43家食品藥品檢測機構(gòu)實驗室檢測6項生化指標(biāo)能力驗證評價*

苗玉發(fā)，張河戰(zhàn)(中國食品藥品檢定研究院，北京 100176)

血糖(blood glucose，GLU)、膽固醇(cholesterol，CHO)、三酰甘油(triglyceride，TG)以及電解質(zhì)鉀(potassium，K+)、鈉 (sodium，Na+) 、氯(chlorine，Cl-)等指標(biāo)除用于臨床人體疾病診斷外，還普遍用于評估藥物在動物體內(nèi)的毒性[1，2]。實驗室檢測這些指標(biāo)的準(zhǔn)確性直接影響藥物的安全性評價結(jié)果，從而影響能否進一步開展該藥物的臨床人體研究。目前，開展這6項生化檢測的大多數(shù)食品藥品檢測機構(gòu)實驗室未參加過相應(yīng)的能力驗證活動，其檢測能力不得而知，本研究的目的就是評價各實驗室檢測這6項指標(biāo)的準(zhǔn)確性和可比性，發(fā)現(xiàn)檢測能力缺陷，促進檢驗?zāi)芰μ岣摺?/p>

能力驗證(proficiency testing，PT)是按照預(yù)先制定的準(zhǔn)則評價參加實驗室的檢測能力，具體過程包括研究方案制定、樣品制備、樣品均勻性和穩(wěn)定性檢驗、分發(fā)樣品并回收數(shù)據(jù)、結(jié)果評價等[3～5]。本文總結(jié)了本次能力驗證研究的相關(guān)內(nèi)容，并對不滿意結(jié)果進行了分析，為實驗室采取糾正措施，促進質(zhì)量改善，以及監(jiān)管部門評價實驗室檢測能力提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1 研究對象 本研究對象為43家食品藥品檢測機構(gòu)實驗室。向43家實驗室發(fā)送了能力驗證樣品，回報GLU，CHO，TG，K+，Na+和Cl-結(jié)果的分別有42，42，43，33，33和33家。43家實驗室分布于18個省、自治區(qū)或直轄市。

能力驗證樣品為市售的低、高2個水平的血清凍干粉。使用時每瓶加入5 ml去離子水，室溫放置30 min，混勻配制成上機樣品。

1.2 試劑和儀器 HITACHI 7180型全自動生化分析儀(日本日立公司)；HB-RO/60 制水機(杭州惠邦凈水設(shè)備有限公司)；P1000 Gilson移液槍(美國吉爾森公司)；GLU，CHO，TG試劑和校準(zhǔn)品以及電解質(zhì)試劑和校準(zhǔn)品，均購自日本和光純藥工業(yè)株式會社。

1.3 方法

1.3.1 樣品制備及運輸方法：能力驗證樣品為血清凍干粉，5 ml/瓶，無需分裝，對低、高水平樣品進行均勻性和穩(wěn)定性檢驗，且檢驗結(jié)果符合要求后，按低、高、低、高、高設(shè)置成1號、2號、3號、4號和5號5個樣品，直接粘貼標(biāo)簽制備成能力驗證樣品，4℃冷藏保存。運輸時樣品瓶外包裹海綿墊防止擠壓，包裹錫箔紙避光，然后放入塑料泡沫盒中，內(nèi)置冰袋冷藏。

1.3.2 均勻性和穩(wěn)定性檢驗方法：能力驗證樣品標(biāo)記分發(fā)之前，根據(jù)CNAS-GL03《能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南》，對低、高2個水平能力驗證樣品的均勻性和穩(wěn)定性進行檢驗[6]。均勻性檢驗具體實施方法是從低、高水平樣品中按照隨機化原則分別隨機抽取10個樣品，配制成溶液后，每個樣品再分成2份樣品，進行20次獨立平行測定，采用單因素方差分析法(F檢驗)對樣品進行均勻性檢驗，當(dāng)檢驗結(jié)果的F值

1.3.3 能力驗證評價方法：按照CNAS-GL02《能力驗證結(jié)果的統(tǒng)計處理和能力評價指南》的評價原則，采用數(shù)值范圍的形式對結(jié)果進行評價。參照美國臨床實驗室改進法案(CLIA’88)中能力驗證的評價標(biāo)準(zhǔn)制定本研究的評價標(biāo)準(zhǔn)，GLU，CHO，TG，K+，Na+和Cl-的評價標(biāo)準(zhǔn)分別為均值±10%，均值±10%，均值±25%，均值±0.5 mmol/L，均值±4 mmol/L和均值±5%。依據(jù)美國病理學(xué)家學(xué)會(College of American Pathologists，CAP)組織的生化指標(biāo)能力驗證的評價要求，每個指標(biāo)分配5個樣品，一個樣品通過記20分，得分≥80分為該指標(biāo)滿意[7，8]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件進行隨機抽樣、均勻性和穩(wěn)定性數(shù)據(jù)分析以及能力驗證結(jié)果處理。通過單樣本Kolmogorov-Smirnov檢驗進行能力驗證結(jié)果數(shù)據(jù)的正態(tài)性檢驗，顯著性水平α=0.05。

2結(jié)果

2.1 樣品均勻性和穩(wěn)定性考察結(jié)果 均勻性檢驗結(jié)果顯示低、高水平樣品的各指標(biāo)檢驗F值

表1 低水平樣品的均勻性檢驗結(jié)果

表2 高水平樣品的均勻性檢驗結(jié)果

表3 樣品穩(wěn)定性試驗結(jié)果(P值)

2.2 數(shù)據(jù)正態(tài)性檢驗及統(tǒng)計量結(jié)果 對能力驗證結(jié)果數(shù)據(jù)進行單樣本Kolmogorov-Smirnov檢驗，P<0.05時，數(shù)據(jù)呈正態(tài)性分布，P≥0.05時，數(shù)據(jù)不呈正態(tài)性分布。結(jié)果顯示，所有指標(biāo)的Kolmogorov-Smirnov檢驗P值均大于0.05，數(shù)據(jù)呈正態(tài)性分布。5個樣品能力驗證結(jié)果的統(tǒng)計量見表4。

表4 能力驗證結(jié)果的統(tǒng)計量

2.3 評價結(jié)果 除TG滿意率為100%外，其余所有指標(biāo)均出現(xiàn)不滿意的結(jié)果，評價結(jié)果見表5。

表5 能力驗證評價結(jié)果

注：*表示無實驗室代碼。

3討論在本研究中，各實驗室的血糖定量采用了葡萄糖氧化酶法(GOD)和己糖激酶法(HK)兩種檢測方法，統(tǒng)計分析后發(fā)現(xiàn)這兩種方法檢測結(jié)果的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，因此，沒有對這兩種檢測方法進行分組評價。TG測定方法分為去游離甘油酶法和不去游離甘油酶法。不去游離甘油酶法不能消除樣本中游離甘油的影響，會導(dǎo)致TG的測定結(jié)果偏高[9]。本研究中兩種方法測定TG值的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，因此，將兩種方法進行分組統(tǒng)計分析和評價。其余指標(biāo)均分別采用相同的檢測方法，未進行分組統(tǒng)計分析和評價。

中國衛(wèi)計委臨檢中心2016年GLU，CHO，TG，K+，Na+，Cl-的室間質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)分別為靶值±10%，靶值±10%，靶值±25%，靶值±0.5mmol/L，靶值±4mmol/L和靶值±5%，與本研究中參照的美國臨床實驗室改進法案(CLIA’88)中能力驗證的評價標(biāo)準(zhǔn)一致。但是，2017年衛(wèi)計委臨檢中心將GLU，CHO，TG，K+，Na+，Cl-的室間質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)分別修訂為靶值±7%，靶值±9%，靶值±14%，靶值±6%和靶值±4%，Cl-的評價標(biāo)準(zhǔn)不變。按照修改后的標(biāo)準(zhǔn)來評價本研究中的數(shù)據(jù)，除Na+的滿意率提升為90.9%以及Cl-的滿意率不變外，其余指標(biāo)的滿意率均下降，不滿意實驗室數(shù)量增加。很明顯，衛(wèi)計委修訂后的GLU，CHO，TG和K+的評價標(biāo)準(zhǔn)更為嚴(yán)格，而Na+的評價標(biāo)準(zhǔn)卻變的寬松。對于美國CLIA’88的評價標(biāo)準(zhǔn)和中國衛(wèi)計委臨檢中心的評價標(biāo)準(zhǔn)，哪個是最科學(xué)、最適合的標(biāo)準(zhǔn)仍需要在實踐中去論證。

本研究中的6項生化指標(biāo)，只有TG的滿意率為100%，其余均有不滿意的結(jié)果。電解質(zhì)的滿意率普遍較低，以Na+為最低。被評價為不滿意的結(jié)果一定是那些與靶值偏差較大的結(jié)果，實驗室應(yīng)采取措施糾正偏差，也可以申請測量審核進行再次評價。實驗室應(yīng)保留對不滿意結(jié)果所采取的糾正措施及產(chǎn)生效果的相關(guān)記錄，以供監(jiān)管者審閱。

參考文獻：

[1] 黨 珊，楊 飛，呂宏軍，等．GIP受體抑制劑對誘導(dǎo)的糖尿病小鼠糖脂代謝的研究[J]．現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2017，32(5)：41-43，47．

[2] 程俊杰，李 靜，梁西強，等．高血壓并發(fā)腦梗死患者不同血脂分層下病死率的分析研究[J]．現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2017，32(3)：97-100．

Cheng JJ，Li J，Liang XQ，et al．Significance on cerebral infarction’s fatality rate for the retrospective analysis of hypertension under serum lipids layer management[J]．J Mod Lab Med，2017，32(3)：97-100．

[3] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會．GB/T 28043-2011/ISO 13528：2003．利用實驗室間比對進行能力驗證的統(tǒng)計方法[S]．北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2011．

General Administration of Ouality Supervision Inspection and Quarantine of the People’s Republic of China，Standardization Administration of the People’s Republic of China．GB/T 28043-2011/ISO 13528．Statistical methods for use in proficiencytesting by interlaboratory comparisons[S]．Beijing：China Standsrd Press，2011．

[4] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會．GB/T 27043-2012/ISO/IEC 17043：2010．合格評定-能力驗證的通用要求[S]．北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2011．

General Administration of Ouality Supervision Inspection and Quarantine of the People’s Republic of China，Standardization Administration of the People’s Republic of China．GB/T 27043-2012/ISO/IEC 17043：2010.Conformity assessment-general requirements for proficiency testing[S]．Beijing：China Standard Press，2011．

[5] 中國合格評定委員會．CNAS-CL03能力驗證提供者認(rèn)可準(zhǔn)則[S]．北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010．

China National Accreditation Service for Conformity Assessment．CNAS-CL03 Accreditation criteria for proficiency testing providers[S]．Beijing：China Standsrd Press，2010．

[6] 中國合格評定委員會．CNAS-GL03能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南[S]．北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2015．

China National Accreditation Service for Conformity Assessment．CNAS-GL03 Guidance on evaluating the homogeneity and stability of samples used for proficiency testing[S]．Beijing：China Standard Press，2015．

[7] CNAS-GL02能力驗證結(jié)果的統(tǒng)計處理和能力評價指南[S]．北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006．

China National Accreditation Service for Conformity Assessment．CNAS-GL02 Guidance on statistic treatment of proficiency testing results and performance evaluation[S]．Beijing：China Standard Press，2006．

[8] 程開書，孫建民，方 蘭．血清肌酐兩種測定方法偏倚的比較[J]．檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10(16)：2092-2093，2095．

Cheng KS，Sun JM，F(xiàn)ang L．Comparson the bias of two methods in detecting serum creatinine[J]．Laboratory Medicine and Clinic，2013，10(16)：2092-2093，2095．

[9] 向哲邑，吳佳麗，胡 敏．臨床實驗室的血脂檢測與管理[J]．中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2017，40(6)：421-424．

Xiang ZY，Wu JL，Hu M．Blood lipid frofiling and management in clinical laboratory[J]．Chinese Journal of Laboratory Medicine，2017，40(6)：421-424．