張碧玲

（陜西省涇陽縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗監(jiān)測站，陜西 涇陽 713700）

1 試劑配制

緩沖溶液：燒杯中依次加入試劑、蒸餾水（500毫升），之后將燒杯置于室溫保存；底物：向標(biāo)有“底物”的試劑瓶中加3.1毫升蒸餾水溶解，混勻備用，為避免試劑瓶溫度過低，應(yīng)降低放入0～5℃的冰箱冷藏；酶試劑：處于溶液狀態(tài)的酶試劑應(yīng)用時，應(yīng)堅持在常溫狀態(tài)應(yīng)用，避免溫度過低。向標(biāo)有“酶試劑”的試劑瓶中加入3.1毫升的緩沖溶液，混勻備用，需放入冰箱冷藏（0～5℃）切勿冷凍結(jié)冰；顯色劑：顯色劑已配制成溶液，從冰箱取出恢復(fù)到常溫后直接使用。需放入冰箱冷藏（0～5℃）切勿冷凍結(jié)冰。

需要注意的是，配制緩沖溶液時，邊倒水邊攪拌，防止試劑結(jié)塊，不停攪拌，直到試劑全部溶解。加熱會使溶解加快，但會影響檢測結(jié)果。沒有蒸餾水的，可用純凈水代替，礦泉水、自來水等不能代替，配制酶試劑時，輕搖使之溶解，不能劇烈震搖。

2 樣品制備

稱取2克果蔬樣品放入三角瓶中，用移液槍加入10毫升緩沖溶液后，放入振蕩器中震蕩2分鐘，其中，所選果蔬樣品的葉菜應(yīng)順著葉緣剪成寬度為1厘米的菜樣，塊根采取1厘米左右的表皮樣品。沒有振蕩器的，可用手順著一個方向輕輕搖動，力度不要太大，心里默數(shù)120下即可。

3 樣品測定

首先，對照測試。取酶100微升，緩沖液2.5毫升，加入比色皿中，再加顯色劑100微升，放置10分鐘，加底物100微升，搖勻后立即放入儀器的比色池中，按對照鍵進(jìn)行對照檢測，對照后△A在3分鐘的吸光值在0.3～0.8之間就可選用。然后，樣品測試：取得測液2.5毫升，取酶100微升，加入比色皿中，再加顯色劑100微升，靜置10分鐘，加底物100微升，搖勻立即放入儀器的比色池中，按樣品鍵進(jìn)行檢測，反應(yīng)180秒，出結(jié)果。最后，結(jié)果判定。抑制率，陰性，為合格樣品；40%＜抑制率＜50%，為可疑樣品；抑制率≥50%，陽性，為不合格樣品。

抑制率(%)=[（△A-△At）/△A]×100%；△A—對照3分鐘的吸光值，△At—樣品3分鐘的吸光值。注意事項：緩沖液和樣品的比例是1∶5，即稱取1克樣品，就加5毫升緩沖液，取稱2克樣品，就加入10毫升緩沖液，必須是同比例的；樣品測定跟對照測定是同一過程，即做對照靜置多長時間，做樣品同樣也靜置多長時間；當(dāng)溫度較高時，酶反應(yīng)速度變快，加入酶液和顯色劑后靜置的時間可以相對短點，具體時間應(yīng)以膽堿酯酶空白對照測試3分鐘的吸光值變化而定。

當(dāng)溫度高時，酶反應(yīng)速度快，可將儀器的反應(yīng)時間調(diào)至1分鐘，做空白對照時，測試1分鐘的吸光度△A在0.15～0.3之間即可往下操作；待測樣品加入底物后，應(yīng)快速搖勻放入儀器的比色池中，否則會影響數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性；平時應(yīng)該保持比色皿的清潔，使比色皿有好的透光度，做檢測時，用手拿比色皿的磨沙面，比色皿長期使用透光面就不太清潔，可用乙醇清洗，確保比色皿透光面透亮；微量移液槍專用，最好貼上標(biāo)簽，使用時應(yīng)先潤洗，用完后應(yīng)調(diào)到最大量程量放置，吸取試劑時堅持只吸出，不能放回的原則，防止試劑污染；切記做檢測時必須是同批試劑，即生產(chǎn)日期相同、配制時間相同，任何試劑使用時，用一瓶打開一瓶，用完后才能使用新的，防止變質(zhì)。

4 數(shù)據(jù)分析