超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定水果蔬菜中多抗霉素B的殘留

◎ 張 麗，祝偉霞，李繼利，趙國興

（1.河南檢驗檢疫鑒定咨詢中心，河南 鄭州 450003；2.洛陽理工學院材料科學與工程學院，河南 洛陽 471023）

多抗霉素B又稱多氧霉素，是光譜抗生素類生物源農(nóng)藥，它是可可鏈霉素阿蘇變種產(chǎn)生的代謝物，具有較好的內(nèi)吸傳導作用。該藥主要對小麥白粉病、煙草赤星病、黃瓜霜霉病、瓜類枯萎病、人參黑斑病、甜菜褐斑病、水稻紋枯病、蘋果早期落葉病、林木枯梢病和梨黑斑病等多種真菌性病害具有良好的防治效果。

隨著多抗霉素在水果蔬菜病蟲害防治上的廣泛應用，由其引起的環(huán)境和食品安全問題日益突顯，因此研究多抗霉素在水果蔬菜中的殘留檢測方法具有十分重要的意義。目前我國暫未制定多抗霉素在水果蔬菜中殘留限量；日本制定了大米（糙米）中多氧霉素的最高殘留限量（MRL）為0.06 mg/kg。目前，國內(nèi)外對多抗霉素的研究多集中在病蟲害防治方面，已有文獻報道的關于多抗霉素的分析有生物效價[1-2]、毛細管電泳法[3]，這些方法均操作繁瑣，耗時長，準確度低，精密度差，不適合用于食品檢測及市場監(jiān)督檢測。陶寧等[4]建立了稻田土壤及水中多抗霉素殘留量的高效液相色譜分析，檢出限為0.05 mg/L。呂靜建立了其在煙草中的分析方法[5]，但目前并未見其在水果蔬菜等農(nóng)產(chǎn)品中的殘留檢測報道。本文建立了水果蔬菜中多抗霉素B的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法。與生物測定法、高效液相色譜法等相比，超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法具有靈敏度高、干擾小、分析速度快等顯著優(yōu)點，可為多抗霉素B在水果蔬菜中的殘留分析研究提供技術支持。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

LC-MS/MS 8050高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀(電噴霧離子源）；Millipore型純水系統(tǒng)。

多抗霉素儲備液的制備：稱取10.0 mg多抗霉素B（CAS：19396-06-6）于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，于-18 ℃下保存待用。甲醇、乙腈為色譜純。其他試劑為分析純。

1.2 工作條件

1.2.1 色譜條件

TYPE1:4色譜柱，（5μm，2.0×150 mm）；柱溫40 ℃；流動相B為乙腈，A為20 mmol/L乙酸銨溶液；流量0.3 mL/min；進樣量10 μL。梯度洗脫程序：0～1 min時，B為90%；1～2 min時，B由90%降至40%；2～4 min時，B保持40%，4～5 min時，B由40%升至90%，保持2 min。

1.2.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源正離子（ESI＋）掃描模式；噴霧電壓4.0 kV；加熱模塊溫度400 ℃；離子源溫度300 ℃；DL溫度250 ℃；噴霧流量2.5 L/min；加熱氣流量10 L/min；干燥器流量10 L/min；每個離子對駐留時間200 ms。定量離子366.0，定性離子490.2，碰撞能量分別為29、30。

1.3 實驗方法

稱取5.0 g樣品置于50 mL具塞離心管中，加入15 mL甲醇-水（3∶7）渦旋混勻10 min，超聲提取5 min，以4000 r/min離心5 min，取上清液過WCX柱，取上清過0.22 μm濾膜供LC-MS/MS測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜行為

多抗霉素TIC圖如圖1所示。

圖1 多抗霉素TlC圖

2.2 提取劑的選擇

多抗霉素易溶于水，微溶于甲醇、丙酮等有機溶劑，在酸性和中性溶液中穩(wěn)定，在堿性溶液中不穩(wěn)定，常溫下貯存穩(wěn)定，實驗分別考察了甲醇、乙腈、甲醇-水、0.1%甲酸水對多抗霉素的提取效率，0.1%甲酸水會提取出來較多的糖類和色素，干擾較大；甲醇、乙腈提取時回收率沒有甲醇-水高，因此試驗選用甲醇水作為提取劑。

2.3 色譜柱的選擇

由于多抗霉素極性很強，在普通的C18柱上沒有保留，很快就出峰，故選擇資生堂的Hilic柱和CAPCELL PAK CR 1:4柱進行考察，使用Hilic柱發(fā)現(xiàn)，其靈敏度和峰性均不如CAPCELL PAK CR 1:4柱，故選擇CAPCELL PAK CR 1:4柱。

2.4 流動相的選擇

根據(jù)多抗霉素在酸性和中性條件下穩(wěn)定的性質(zhì)，由于選擇的CAPCELL PAK CR 1:4柱的特殊性，需避免使用甲醇作為流動相，故考察了乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸水、乙腈-20 mmoL乙酸銨體系下目標物的峰形和分離度。直接采用乙腈-水作為流動相，樣品不穩(wěn)定，容易發(fā)生分解；對比之下，乙腈-20 mmoL乙酸銨峰形最好，靈敏度最高，故選擇乙腈-20 mmoL乙酸銨為流動相。

2.5 線性關系及檢出限

準確吸取多抗霉素B標準溶液適量，用空白基質(zhì)溶 液 稀 釋為 0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2 mg/L和0.5 mg/L系列標準溶液。在上述分析條件下進樣測定，以定量離子峰面積對多抗霉素B質(zhì)量濃度進行線性回歸。在0.01～0.5 mg/L濃度范圍內(nèi)，回歸方程為y=121.114x-531.79，相關系數(shù)為0.995。按10倍信噪比得出多抗霉素B在果蔬樣品中定量限為0.01 mg/kg，按3倍信噪比得出檢出限為0.005 mg/kg。

2.6 回收率和精密度

采用標準添加法，在蘋果空白樣品中添加0.01、0.02、0.05 mg/kg3個濃度水平的多抗霉素標準溶液，每個添加水平平行測定6次，測定結(jié)果見表1。實驗數(shù)據(jù)表明，方法的回收率為71.6%～111.2%，精密度（以RSD計）為5.6%～10.9%。

表1 回收率和精密度結(jié)果表

3 結(jié)論

本文采用甲醇-水提，WCX柱凈化，HPLC-MS/MS方法測定果蔬中多抗霉素B殘留的分析方法，本法簡便、快速、準確，具有良好的靈敏度和精密度，有較大的實用價值，可對農(nóng)藥殘留進行有效檢測。