羅小兵,夏厚才,蔡洪英,馬瑞紅,喬 鐵

(1.廣東省廣州市南沙區(qū)第六人民醫(yī)院檢驗科 511470；2.廣東省廣州市南沙區(qū)第六人民

醫(yī)院病理科 511470；3.廣東省廣州市中德內鏡研究所 511430)

華支睪吸蟲病俗稱肝吸蟲病，是由華支睪吸蟲寄生在人體肝內膽管所引起的以肝膽病變?yōu)橹鞯囊环N食源性寄生蟲病。據(jù)報道，全球約有3 500萬人感染此病，中國感染人數(shù)約為1 249萬人[1-3]。目前，華支睪吸蟲感染與膽結石的關系已有報道證實，但相應的致病機制仍不清楚[4-6]。多數(shù)研究認為，各種原因引起的膽汁成分改變是結石發(fā)生、發(fā)展的可能致病因素。當前，有關華支睪吸蟲感染相關膽囊結石的膽汁成分研究報道較少，本研究初探了華支睪吸蟲感染的膽囊結石患者的多種膽汁成分及其相互關系，以期為相關研究提供借鑒和參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 連續(xù)選取2016年4-12月廣州市南沙區(qū)第六人民醫(yī)院135例膽囊結石患者，所有患者均為本地(華支睪吸蟲流行區(qū))戶籍居民，并在本院普外科成功實施硬鏡取石保膽手術。其中男64例，女71例，年齡18～80歲，中位年齡46.30歲。

1.2儀器與試劑 微量清蛋白(MALB)、β2微球蛋白(β2-MG)、總膽紅素(TBIL)、膽固醇(CHO)和總鈣(Ca)測定用商品試劑盒購自北京中生生物技術公司，免疫球蛋白(IgA、IgG和IgM)和補體(C3和C4)測定試劑購自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，碳酸氫根(HCO3-)商品試劑盒購自四川邁克生物技術公司，總膽汁酸(TBA)試劑盒購自日本積水醫(yī)療株式會社。上述膽汁成分測定儀器為日本東芝公司TBA-120FR全自動生化分析儀；pH測定儀為美國Thermo Fisher Scientific公司產品。

1.3方法

1.3.1標本獲取 患者的膽囊膽汁于術中以無菌方式獲得：取膽汁5～10 mL，置于肝素抗凝管內送檢。所獲標本于1 h內送檢，不能及時送檢的置于4 ℃保存不超過4 h。所有標本的獲取均征得患者本人及其家屬同意，并經醫(yī)院倫理委員會審核通過。

1.3.2檢測方法 取送檢膽囊膽汁5 mL于無菌刻度離心管內，380×g離心10 min，吸取上層膽汁用于化學成分測定，留取離心沉淀物約300 μL檢查華支睪吸蟲卵。膽汁化學成分測定按照參考文獻[7]的方法，測定MALB、β2-MG、IgA、IgG、IgM、C3、C4、pH值、TBIL、TBA、CHO、Ca2+和HCO3-共13項指標。膽汁及結石中的華支睪吸蟲卵檢測采用顯微鏡檢法[8]。臨床上稱為“白膽汁”(即外觀無顏色、總膽紅素測不出的膽汁)排除于本研究。

1.4統(tǒng)計學處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件進行分析。計量資料先用描述性分析檢驗兩組數(shù)據(jù)資料是否正態(tài)分布和方差齊性，本研究數(shù)據(jù)資料為非正態(tài)分布且方差不齊，故用中位數(shù)(M)和四分位數(shù)間距(P75，P25)表示，組間比較使用兩獨立樣本的非參數(shù)檢驗；膽汁各成分間的相關分析采用Kendall′s tau-b相關系數(shù)表示，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1華支睪吸蟲感染陽性和陰性患者的膽汁成分對比 根據(jù)膽汁離心沉淀鏡檢結果，將135例膽囊結石患者分為感染陽性和感染陰性兩組，陽性組68例，陰性組67例，然后比較兩組患者的膽汁各成分水平。與華支睪吸蟲感染陰性組相比，陽性組膽汁中MALB(429.0 mg/Lvs.198.0 mg/L)、pH(7.64vs.7.47)和HCO3-(20.8 mmol/Lvs.17.3 mmol/L)的水平較高，而CHO水平較低(3.45 mmol/Lvs.5.40 mmol/L)，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其他成分比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 華支睪吸蟲感染陽性與陰性患者之間的膽汁成分對比[M(P75，P25)]

注：與陰性組相比，*P<0.05

2.2陽性組膽汁中各成分的相關關系 陽性組膽汁中，MALB與TBIL和Ca2+呈正相關(r=0.174、0.263，P<0.05)；pH與HCO3-呈正相關(r=0.522，P<0.05)，但與IgA、TBIL、TBA、CHO和Ca2+呈負相關(r=-0.315、-0.250、-0.294、-0.214和-0.168，P<0.05)；此外，CHO與HCO3-呈負相關(r=-0.232，P<0.05)，與TBIL、TBA和Ca2+呈正相關(r=0.497、0.430和0.218，P<0.05)；其他各成分間無相關性(P>0.05)，見表2。

表2 華支睪吸蟲感染者膽汁各成分間的相關系數(shù)(n=68)

注：相關系數(shù)比較，*P<0.05

3 討 論

人體感染華支睪吸蟲后，可引起一系列的肝膽系統(tǒng)損傷，引起膽囊炎、膽結石甚至膽管癌發(fā)生[9-11]。其中，華支睪吸蟲感染引起膽囊結石已有報道證實，但其具體機制仍不清楚[4-6]。大多數(shù)研究認為人體內膽結石的產生和結石類型與膽汁的成分改變密不可分，但是在華支睪吸蟲病流行區(qū)，膽囊結石患者的人群分布和結石類型與其他地區(qū)明顯不同[12-14]。因此本文作者推測，與普通膽結石患者相比，華支睪吸蟲感染的膽結石患者體內的膽汁成分可能也有不同?；诖耍髡邷y定對比了華支睪吸蟲感染膽結石患者與非感染患者的13種膽汁成分，并分析了感染患者各種成分之間的相關性，得到了一些有意義的結果和發(fā)現(xiàn)。

本研究發(fā)現(xiàn)，與普通膽囊結石患者相比，華支睪吸蟲感染患者的膽汁中pH和HCO3-的水平較高(二者呈正相關，r=0.522)，而CHO水平較低(P<0.05)。從結果可以看出，由于感染患者膽汁成分的不同，比如較高的HCO3-，可能會導致膽囊內產生較多的CO2，過多的CO2在一定條件下與Ca2+結合產生碳酸鈣結晶或沉淀，進而逐步形成以碳酸鈣為主要成分的結石；同時，感染患者膽汁中的膽固醇水平較低，因此由于膽固醇過飽和而導致膽固醇結石發(fā)生的可能性變小。上述兩種膽汁成分改變情況同時存在，最終引起華支睪吸蟲感染患者的膽結石類型與普通患者明顯不同：即感染者的膽結石類型以碳酸鈣類結石為主，膽固醇類結石最少，而普通患者絕大多數(shù)為膽固醇結石。本研究還發(fā)現(xiàn)，感染患者膽汁中的MALB水平高于非感染患者，推測可能與華支睪吸蟲感染所致肝內膽管局部機械損傷及炎癥引起的膽管通透性增加有關，但由于研究的局限，還需要進一步研究證實。

為了進一步了解華支睪吸蟲感染與膽汁成分改變的關系，筆者還分析了膽汁中各種成分間的相關性。結果顯示，陽性組膽汁中的MALB與TBIL和Ca2+水平，pH與HCO3-之間呈正相關(r=0.522，P<0.05)，提示華支睪吸蟲感染引起肝內膽管通透性及膽管內外離子交換改變，進而導致膽汁的整體化學性質和相應功能改變的可能性。同時，由于HCO3-和(或)pH 與TBIL、TBA、CHO和Ca2+之間呈負相關(P<0.05)，因此在膽汁中高HCO3-(與之對應較高的pH)和高MALB水平共同作用下，陽性組的膽汁中CHO水平相對較低、CO2相對過多、但TBIL、TBA和Ca2+水平改變不顯著，進而造成膽固醇結石的可能性降低，碳酸鈣類和膽紅素類結石更易形成的結局[15]。此外，感染者膽汁中pH與IgA、IgG與補體C3之間呈負相關，提示華支睪吸蟲感染者尤其是膽汁高pH者可能發(fā)生分泌型抗體IgA減少及膽道的免疫防御改變，這可能是華支睪吸蟲持續(xù)感染或抵抗機體膽管系統(tǒng)局部免疫功能的機制之一。需要注意的是，由于本研究的樣本只限于膽囊結石患者，是否全部華支睪吸蟲感染人群都存在上述膽汁成分的改變，還需要更多的研究來證實。

綜上所述，華支睪吸蟲感染的膽結石患者膽汁成分發(fā)生改變，主要表現(xiàn)為HCO3-及其相關的pH、MALB增高，以及相關的膽固醇減低及潛在的膽道局部免疫功能改變，這種改變的長期存在，可能最終導致膽囊結石的發(fā)生及結石主要成分的不同。膽汁成分的研究，有助于從另一個方面了解華支睪吸蟲感染所致膽道系統(tǒng)損傷的機制、發(fā)展和結局，為臨床治療和相關研究提供重要參考。