俞霖潔，馮宇杰，龐銀娟，吳航俊，吳偉東

（浙江省化工研究院有限公司，杭州 310023）

唑啉草酯（pinoxaden）是由瑞士先正達(dá)公司發(fā)現(xiàn)、開發(fā)和生產(chǎn)的新苯基吡唑啉類除草劑，具有內(nèi)吸傳導(dǎo)性。其為乙酰輔酶A羧化酶（ACCase）抑制劑，通過阻礙脂肪酸的合成，破壞細(xì)胞膜的含酯結(jié)構(gòu)，從而導(dǎo)致雜草生長停止，最終死亡。唑啉草酯主要用于一年生禾本科雜草的防除[1-4]。炔草酯（clodinafop-propargyl）是汽巴-嘉基（現(xiàn)先正達(dá)）公司開發(fā)的具光學(xué)活性的含氟芳氧苯氧丙酸酯類除草劑，主要用于防除野燕麥、看麥娘、燕麥、黑麥草、普通早熟禾、狗尾草等[5-6]。目前唑啉草酯單劑的主要檢測方法有高效液相色譜法，炔草酯單劑的主要檢測方法有高效液相色譜法和氣相色譜法，但兩者復(fù)配制劑的分析方法尚未見報(bào)道。本文通過確定紫外檢測器檢測波長、流動(dòng)相溶液配比和流速，建立了唑啉草酯和炔草酯同柱分離測定的高效液相色譜分析方法。該方法操作簡便，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到定量分析的要求，適用于該產(chǎn)品的分析測定。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260高效液相色譜儀，具可調(diào)波長紫外檢測器和自動(dòng)進(jìn)樣器、色譜處理工作站；色譜柱：AcclaimTM120 C18不銹鋼柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），孔徑120?；甲醇（色譜純），臨海市浙東特種試劑有限公司；唑啉草酯標(biāo)樣（99.0%）、炔草酯標(biāo)樣（98.9%），國家農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心（定值）；2次蒸餾水；5%唑啉·炔草酯乳油（2.5%唑啉草酯＋2.5%炔草酯）。

1.2 溶液配制

標(biāo)樣溶液：準(zhǔn)確稱取25 mg唑啉草酯標(biāo)樣和25 mg炔草酯標(biāo)樣，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，充分搖勻，配制成唑啉草酯和炔草酯混合標(biāo)樣溶液。

樣品溶液：稱取5%唑啉·炔草酯乳油樣品約1.0 g，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，充分搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后待測。

1.3 色譜條件

色譜柱：AcclaimTM120 C18不銹鋼柱（250 mm×4.6 mm），孔徑120?，粒徑5 μm；進(jìn)樣量：5 μL；流速：1.0 mL/min；柱溫：35℃；檢測波長：230 nm。流動(dòng)相梯度洗脫程序見表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序

1.4 測定步驟

在1.3色譜條件下，待儀器基線穩(wěn)定后連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，當(dāng)相鄰2針的峰面積變化小于1.5%時(shí)，按標(biāo)樣溶液、樣品溶液、樣品溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

將測得的樣品溶液以及標(biāo)樣溶液中唑啉草酯（或炔草酯）的峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中唑啉草酯（或炔草酯）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w（%）按下式計(jì)算。

式中：A1為標(biāo)樣溶液中唑啉草酯（或炔草酯）峰面積的平均值；A2為樣品溶液中唑啉草酯（或炔草酯）峰面積的平均值；m1為標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為樣品的質(zhì)量，g；P為標(biāo)樣中唑啉草酯（或炔草酯）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

采用紫外分光光度儀對(duì)1.2中配制的標(biāo)樣溶液進(jìn)行光譜掃描，獲得唑啉草酯和炔草酯的紫外吸收光譜圖（見圖1）。

圖1 唑啉草酯和炔草酯紫外吸收光譜圖

從圖1可知，唑啉草酯在195 nm、230 nm和280 nm波長處均有較大吸收，炔草酯在198 nm和260 nm波長處有較大吸收。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)比對(duì)，選擇230 nm作為檢測波長。在此波長下，唑啉草酯和炔草酯峰形良好，吸收比例適當(dāng)，無雜質(zhì)影響。

2.2 流動(dòng)相的選擇

分別使用不同比例的甲醇＋水為流動(dòng)相對(duì)樣品進(jìn)行檢測分析。由于乳油樣品中添加成分及雜質(zhì)較多，當(dāng)流動(dòng)相中甲醇體積占比較低時(shí)，雜質(zhì)出峰慢，使得樣品檢測時(shí)間過長，且未出峰的雜質(zhì)對(duì)目標(biāo)物出峰時(shí)間有影響，目標(biāo)物出峰時(shí)間出現(xiàn)偏差；當(dāng)流動(dòng)相中甲醇體積占比較高時(shí)，樣品中的雜質(zhì)難以和目標(biāo)峰有效分離。經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)，確定流動(dòng)相采用梯度洗脫程序。先以體積比為62∶38的甲醇＋水為流動(dòng)相，出峰快的雜質(zhì)和目標(biāo)物有效分離，然后以體積比95∶5的甲醇＋水為流動(dòng)相，樣品中的雜質(zhì)快速出峰，最后將流動(dòng)相轉(zhuǎn)換回體積比為62∶38的甲醇＋水，穩(wěn)定5 min。在此條件下，兩組分及雜質(zhì)均能得到很好的分離，峰形尖銳、對(duì)稱，基線平穩(wěn)。唑啉草酯保留時(shí)間約為29.6 min，炔草酯保留時(shí)間約為37.7 min。標(biāo)樣及樣品色譜圖分別見圖2、圖3。

圖2 唑啉草酯和炔草酯標(biāo)樣溶液液相色譜圖

圖3 5%唑啉·炔草酯乳油液相色譜圖

2.3 線性關(guān)系曲線

在上述液相色譜操作條件下，分別注入1 μL、3 μL、5 μL、7 μL、8 μL唑啉草酯、炔草酯混合標(biāo)樣溶液，以標(biāo)樣溶液進(jìn)樣體積為橫坐標(biāo)，唑啉草酯（或炔草酯）峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖4）。唑啉草酯線性回歸方程為y=1 233 x-138.48，R2=0.999 8；炔草酯線性回歸方程為y=590.57 x-127.72，R2=0.999 1。結(jié)果表明，該方法在測定范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖4 唑啉草酯和炔草酯線性關(guān)系圖

2.4 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)

稱取5批次5%唑啉·炔草酯乳油樣品，分別準(zhǔn)確加入一定量的標(biāo)樣，根據(jù)稱取樣品量和加入標(biāo)樣量計(jì)算出唑啉草酯和炔草酯的理論含量。按照1.3色譜條件進(jìn)樣分析，得到唑啉草酯和炔草酯的實(shí)測值。唑啉草酯回收率為98.87%～101.56%，平均回收率為99.70%；炔草酯回收率為98.09%～99.16%，平均回收率為98.51%。檢測方法滿足定量分析要求，結(jié)果見表2。

表2 方法準(zhǔn)確度測定結(jié)果

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

按1.3色譜條件，對(duì)同一5%唑啉·炔草酯乳油樣品平行測定5次，分別獲得唑啉草酯和炔草酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)，結(jié)果見表3。

表3 方法精密度測定結(jié)果