關素華 曾慶輝 張曉飛

摘要：為研究德式乳酸桿菌對黃河鯉應激前后抗應激指標、血液免疫指標、抗氧化指標和HSP70、HSP90基因表達的影響，選取黃河鯉450尾，隨機分為5組（每組3個平行，每個平行30尾魚），分別投喂在基礎飼料中添加不同濃度乳酸菌（0、1×105、1×106、1×107、1×108 CFU/g）的日糧，養(yǎng)殖8周后，進行擁擠脅迫。試驗結果表明：應激前，皮質醇濃度在1×106、1×107 CFU/g乳酸菌組顯著低于對照組（P<0.05），血糖和乳酸濃度在試驗組顯著低于對照組（P<0.05），溶菌酶活性在1×106、1×107 CFU/g乳酸菌組顯著高于對照組（P<0.05），C3和C4在1×106 CFU/g乳酸菌組顯著高于對照組（P<0.05）。應激后，血液皮質醇、血糖和乳酸濃度都有不同程度的升高，這些指標在添加乳酸菌組的含量均顯著低于對照組（P<0.05），血液溶菌酶活性、C3和C4濃度也有升高趨勢，且在1×106 CFU/g乳酸菌組顯著高于對照組（P<0.05）;應激前后SOD和CAT活性在1×106 CFU/g乳酸菌組顯著高于對照組（P<0.05），MDA含量呈相反的趨勢，在1×106、1×107 CFU/g乳酸菌組顯著低于對照組（P<0.05），應激使HSP70和HSP90基因表達均有升高趨勢，在應激前后試驗組的HSP70和HSP90基因表達量大部分都顯著高于對照組（P<0.05）。該研究結果顯示，飼料中添加1×106～1×107 CFU/g 德式乳酸菌能提高黃河鯉的免疫力、抗氧化和抗應激的能力。

關鍵詞：德式乳酸桿菌;黃河鯉;免疫;應激;抗氧化

中圖分類號： S942.1 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2019）01-0166-05

應激是一些有害因子引起動物發(fā)生一系列生理防御的總和。在水產養(yǎng)殖中，應激普遍存在，如溶氧量過低、水溫變化、驚嚇、高密度飼養(yǎng)、酸堿度變化、分池、捕撈等都可能造成應激。當魚類受到這些應激后會出現一系列的生理變化，如體內皮質激素的升高，并引起溶菌酶、巨噬細胞和嗜中性粒細胞活力的下降，抑制動物的免疫系統，使其增質量減緩，成活率下降，嚴重影響水產養(yǎng)殖的經濟效益[1]。因此如何防止和減輕應激發(fā)生是目前水產養(yǎng)殖研究的一個熱點。

在過去，一旦疾病暴發(fā)，多使用抗生素來解決此類問題，但是使用抗生素帶來了很多負面影響，比如病菌抗藥性的增強、抗生素殘留等問題。近年來，使用益生元和益生素來提高水產動物健康水平的報道也日益增多[2-5]，已有報道指出，果寡糖、芽孢桿菌、維生素、大黃素等在水產動物上均有抗應激的效果[6-11]，但是關于乳酸菌抗應激的功效報道較少，因此，本研究通過在飼料中添加不同濃度的乳酸菌，飼喂黃河鯉，研究乳酸菌對黃河鯉免疫、抗氧化和抗應激相關指標的影響，旨在探討乳酸菌在黃河鯉上的作用效果，為防止魚類疾病暴發(fā)和應激發(fā)生提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 黃河鯉魚，購自河南省洛陽市某養(yǎng)殖場，初始質量為（15±0.3） g，試驗選擇規(guī)格一致、健康的鯉魚450尾，隨機分為5組，其中第1組為對照組，對照組投喂基礎飼料，其他4組為試驗組，投喂試驗飼料，每組設3個平行，每個平行30尾魚，共15缸。

1.1.2 試驗飼料 基礎飼料主要用魚粉、豆粕、棉粕、菜粕作為蛋白源，以魚油和豆油作為脂肪源，以次粉作為糖原，配制成蛋白含量為33.6%、脂肪含量為6.62%的基礎飼料（表1），試驗飼料是在基礎飼料中分別添加1×105、1×106、1×107、1×108 CFU/g 德式乳酸桿菌，各種飼料原料充分粉碎后均過60目篩，先把磷酸二氫鈣、食鹽、預混料、膨潤土等混勻，再加入大料并逐級混合，然后在乳酸菌中加入適量的水，與飼料原料混合后用絞肉機制成1.2 mm的顆粒飼料，并在40 ℃下烘 15 h，至飼料水分含量在10%左右，保存在-4 ℃冰箱備用。

1.2 方法

1.2.1 飼養(yǎng)管理 養(yǎng)殖試驗于2015年7—9月在河南科技大學水族科學實驗室進行，將黃河鯉馴化2周，馴養(yǎng)期間投喂基礎飼料，試驗開始后，每天投喂3次，分別在08：00、12：00、17：00各投喂1次，日投喂量為魚體質量的3%～5%，并根據攝食情況進行適度的調整，確保飼料在0.5 h內吃完，養(yǎng)殖期間每天測水溫、溶氧量，每2 d換水1次，每次換水1/3以保證水質，整個試驗期間水質記錄如下：水溫為（26±1） ℃，溶解氧含量>5 mg/L，氨氮含量<0.01 mg/L，pH值為6.8～7.5，養(yǎng)殖周期持續(xù)8周。

1.2.2 抗應激試驗 養(yǎng)殖試驗結束后，停飼24 h，選取規(guī)格基本一致的10尾魚，參照Xie等的方法[12]進行應激試驗，采取高密度（100 g/L）進行擁擠脅迫試驗，每個水平設3個平行，放置于小型玻璃缸中，水溫、溶氧量同“1.2.1”節(jié)，應激期間保持安靜，防止額外應激，持續(xù)應激6 h后進行采樣。

1.2.3 血液采集與測定

1.2.3.1 血液指標的測定 分別在應激前和應激后對魚進行麻醉，尾靜脈取血，4 ℃、1 500 r/min離心10 min，取血清，于-20 ℃保存，用作應激和血液免疫指標的分析。皮質醇濃度采用放免法進行測定，血糖濃度的測定采用葡萄糖氧化酶法，乳酸濃度的測定采用對羥基聯苯比色法，溶菌酶活性采用比濁法進行測定，補體C3和C4采用酶聯免疫吸附法測定，以上試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，具體操作見說明書。

1.2.3.2 肝臟抗氧化指標的測定 應激前后快速分離肝臟，于液氮中速凍并保存，稱取一定量的肝臟樣品，用生理鹽水按1 g ∶ 9 mL（肝臟 ∶ 生理鹽水）的比例冰浴勻漿，然后于 4 ℃、3 500 r/min 離心10 min，取上清液用于酶活分析，超氧化物歧化酶（SOD）活性的測定參照黃嘌呤氧化酶法，過氧化氫酶（CAT）活性的測定采用紫外法，丙二醛（MDA）含量的測定參照氧化脂質硫代巴比妥酸分光光度計法。

1.2.3.3 基因表達 RNA提取：取肝臟組織0.1 g左右，參照Trizol使用說明書，提取RNA然后測定其濃度和質量，一般D260 nm/D280 nm在1.8～2.0之間，最后稀釋成相同的濃度進行cDNA反轉錄。

cDNA反轉錄：參照寶生物工程（大連）有限公司提供的試劑盒說明書進行反轉錄。反應程序：第1步42 ℃反應 40 min，第2步90 ℃反應2 min，最后于4 ℃保存。之后10倍稀釋，以備RT-PCR使用。

RT-PCR過程：用Primer 5軟件設計引物，由上海英捷維基生物有限公司合成（表2），按照SYBR PrimeScriptTM RT-PCR Kit（TaKaRa公司）使用說明進行RT反應，熒光定量PCR反應條件：94 ℃預變性5 min;94 ℃變性30 s，55.9 ℃退火30 s，72 ℃ 延伸30 s，45個循環(huán);72 ℃延伸7 min。選用β-actin作為內參基因，用2-ΔΔCT方法計算HSP70和HSP90基因的相對表達量。

1.3 數據統計與分析

試驗數據先用Excel 2007作簡單處理，然后用SPSS 17.0軟件進行單因素方差分析，當各組間差異顯著時（P<0.05），用Duncans檢驗法進行均值間的多重比較，結果用平均值±標準誤差表示。

2 結果與分析

2.1 德式乳酸菌對鯉魚脅迫應激前后血清皮質醇、血糖和乳酸濃度的影響

由圖1、圖2、圖3可知，應激前血液皮質醇、血糖和乳酸濃度都比較低，皮質醇含量在1×106、1×107 CFU/g乳酸菌處理下顯著低于對照組（P<0.05），其他各組之間差異并不顯著（P>0.05）。血糖和乳酸濃度在試驗組均顯著低于對照組（P<0.05）。應激后，血液皮質醇、血糖和乳酸濃度都有不同程度的升高，這些指標在添加乳酸菌組中的濃度多數均顯著低于對照組（P<0.05）。

2.2 德式乳酸桿菌對黃河鯉應激前后血液免疫指標的影響

由表3可知，應激前血液溶菌酶活性在1×106和1×107 CFU/g 乳酸菌組均顯著高于對照組（P<0.05），1×

108 CFU/g 乳酸菌組和對照組差異并不顯著（P>0.05）;C3和C4含量在1×106 CFU/g乳酸菌組顯著高于對照組（P<0.05），其他各組之間差異不顯著;應激后，血液溶菌酶活性、C3和C4濃度都有不同程度的升高，且1×106 CFU/g乳酸菌組顯著高于對照組（P<0.05），C4含量在1×107 CFU/g乳酸菌組也顯著高于對照組（P<0.05）。

2.3 德式乳酸桿菌對黃河鯉應激前后抗氧化指標的影響

由表4可知，應激前后SOD和CAT活性在1×106 CFU/g乳酸菌組顯著高于對照組（P<0.05），1×105、1×108 CFU/g 乳酸菌組和對照組差異并不顯著（P>0.05）。MDA含量呈相反趨勢，應激前后1×106、1×107 CFU/g乳酸菌組均顯著低于對照組（P<0.05）。

2.4 德式乳酸桿菌對黃河鯉應激前后HSP70和HSP90基因表達的影響

由圖4、圖5可知，應激使HSP70和HSP90基因量表達均有升高趨勢，在應激前后試驗組的HSP70和HSP90基因表達量均顯著高于對照組（P<0.05）。

3 討論

3.1 德式乳酸菌對黃河鯉應激指標的影響

皮質醇是魚體受到應激后通過下丘腦垂體-腎間組織軸（hypothalamus-pituitary-interrenal axis，簡稱HPI）所分泌的一種重要的應激激素[13]。血液皮質醇升高通常作為魚類發(fā)生應激的靈敏信號，本研究得出，在應激后皮質醇、血糖和乳酸含量都呈現顯著升高的趨勢，血糖的升高可能是由于隨著皮質醇水平的升高，糖異生的關鍵酶葡萄糖-6-磷酸酶的活性被激活，糖異生和糖原分解作用加強，另外，肌糖原的分解是血液乳酸含量增加的原因之一[14]。相似的研究結果在團頭魴（Megalobrama amblycephala Yih）[15-16]和金頭鯛（Sparus aurata）[17]中都有報道。在飼料中添加適量濃度的乳酸菌，應激前后皮質醇、血糖和乳酸含量都有降低趨勢，這表明乳酸菌可以有效地緩解黃河鯉的擁擠脅迫應激，但是具體的作用機制尚需進一步研究。

3.2 德式乳酸菌對黃河鯉血液免疫指標的影響

溶菌酶是機體內重要的免疫因子之一，主要由巨噬細胞核和嗜中性粒細胞分泌產生，本研究得出，在急性應激后，血液溶菌酶、補體C3和C4都有升高趨勢，這可能是由于在急性應激條件下，魚體通過增加特定溶菌酶和補體含量來增加其免疫活力，共同抵抗由應激帶來的不適反應。有研究報道，一般急性應激會導致溶菌酶活性的升高[18-19]，而長時間的慢性應激會導致其活性的顯著降低，免疫力下降[20]，發(fā)生應激后中華鱉（Pelodiscus sinensis）補體C3、C4含量下降[21]，但是添加維生素C能夠促進補體C3和C4的合成，相似的結果在團頭魴[16]中也有報道。應激抑制還可促進補體C3和C4的合成，這與應激強度、應激時間以及應激類型都有很大的關系，但是適量的乳酸菌加強了溶菌酶的活性，也在一定程度上提高了補體C3和C4的水平，這有助于增強魚體的非特異性免疫力。乳酸菌的免疫增強作用在畜禽的研究[22-24]中也有報道，據報道，乳酸菌胞外多糖具有免疫增強的作用[24]。

3.3 德式乳酸桿菌對黃河鯉抗氧化指標的影響

應激能夠引起自由基的大量產生，比如 O-2 · ?和·OH，這些物質會造成機體細胞的脂質過氧化，正常情況下機體的抗氧化系統能夠清除這些自由基，抑制機體過氧化，使機體處于平衡狀態(tài)[25]，但是這種平衡狀態(tài)會隨著環(huán)境條件的改變而被破壞，造成氧化損傷。SOD和CAT作為主要的抗氧化酶，SOD負責把 O-2 · ?轉化成O2和H2O2，CAT能夠把H2O2分解成O2和H2O，以清除機體內過多的自由基[26-27]。本研究得出，SOD和CAT的活性在應激條件下不斷增加，防止機體的氧化損傷?？寡趸锩富钚缘纳吆蜋C體的氧化應激程度有關，氧化應激程度越高，酶活性也會隨之升高[28]。之前的報道得出，SOD活性在應激條件下（比如鹽度和溫度）都有升高[29]。MDA含量在應激后呈現不斷升高的趨勢，這表明高密度應激會引起黃河鯉脂質過氧化程度的增加，這是因為應激會造成機體的耗氧量增加，容易造成自由基的產生，自由基與多不飽和脂肪酸等抗氧化脂類反應時，會引發(fā)脂質過氧化，并最終降解產生MDA。施兆鴻等研究表明，云紋石斑魚（Epinephelus moara）在氨氮脅迫條件下的MDA含量也顯著升高[10]，鹽度脅迫使云紋石斑魚的MDA含量顯著升高，但是添加適量的維生素E可有效減少脂質過氧化物MDA的產生[11]。類似的研究結果在其他魚類和水產類動物中[30-33]都有報道。本試驗結果得出，在擁擠脅迫前后投喂1×106 CFU/g乳酸菌的SOD和CAT活性最高，MDA含量最低。本試驗說明，乳酸菌能夠抑制黃河鯉由應激引起的脂質過氧化程度。乳酸菌的抗氧化功能可能與它的益菌保護作用有關，以前的試驗證明，乳酸菌的代謝產物具有抗氧化功能[34-36]，乳酸菌也可能作為調節(jié)腸道微生物平衡的物質促進機體的抗氧化功能。

3.4 德式乳酸桿菌對黃河鯉HSP70和HSP90基因表達的影響

在HSP家族中，HSP70和HSP90參與新生蛋白質合成和損傷蛋白的修復，并參與機體在應激條件下的免疫應答[37]，機體受到外界應激（比如高溫、缺氧和細菌感染等）時，組織中HSP70和HSP90的表達量升高，從而形成保護機制，抵御應激對機體帶來的危害[38-39]。本研究發(fā)現，應激后HSP70和HSP90的相對表達量都呈升高趨勢，其表達量升高可能因為當魚類處在應激條件下時，機體為了防止自身的氧化損傷而作出的相應策略。類似的研究在團頭魴的研究中[8]也有報道，Zhang等報道，在高溫和氨氮應激條件下HSPs的表達量均呈升高趨勢[6-7];劉波等研究表明，高溫應激后比應激前羅氏沼蝦HSP70 mRNA的相對表達量顯著升高[9]，相似的研究結果在吉富羅非魚（Oreochromis niloticus）[40]中也有報道。本研究得出，在飼料中添加一定濃度的乳酸菌應激前后HSP70和HSP90的表達均有升高趨勢，從而增強了對機體的保護作用，HSPs在應激條件下的表達與細胞的分裂、增殖和發(fā)育等生理過程都有關系，需要進一步研究。本研究也得出，添加適量的乳酸菌能夠增強HSPs的表達量和機體的抗應激能力，這和免疫指標以及抗氧化功能得出的結果相一致，表明乳酸菌在抗應激和增強免疫方面都起到重要作用。

4 結論

飼料中添加適宜水平的德式乳酸桿菌能夠提高黃河鯉的抗應激能力、免疫力和抗氧化功能，且在本試驗條件下，乳酸菌的最適添加量為1×106～1×107 CFU/g。

參考文獻：

[1]李大鵬，劉松巖，謝從新，等. 水溫對中華鱘血清活性氧含量及抗氧化防御系統的影響[J]. 水生生物學報，2008，32（3）：327-332.

[2]Ai Q H，Xu H G，Mai K S，et al. Effects of dietary supplementation of Bacillus subtilis and fructooligosaccharide on growth performance，survival，non-specific immune response and disease resistance of juvenile large yellow croaker，Larimichthys crocea[J]. Aquaculture，2011，317（1/2/3/4）：155-161.

[3]Soleimani N，Hoseinifar S H，Merrifield D L，et al. Dietary supplementation of fructooligosaccharide （FOS） improves the innate immune response，stress resistance，digestive enzyme activities and growth performance of Caspian roach （Rutilus rutilus） fry[J]. Fish & Shellfish Immunology，2012，32（2）：316-321.

[4]Zhang Q，Ma H M，Mai K S，et al. Interaction of dietary Bacillus subtilis and fructooligosaccharide on the growth performance，non-specific immunity of sea cucumber，Apostichopus japonicus[J]. Fish & Shellfish Immunology，2010，29（2）：204-211.

[5]Zhang C N，Li X F，Xu W N，et al. Combined effects of dietary fructooligosaccharide and Bacillus licheniformis on innate immunity，antioxidant capability and disease resistance of triangular bream （Megalobrama terminalis）[J]. Fish & Shellfish Immunology，2013，35（5）：1380-1386.

[6]Zhang C N，Li X F，Tian H Y，et al. Effects of fructooligosaccharide on immune response，antioxidant capability and HSP70 and HSP90 expressions of blunt snout bream （Megalobrama amblycephala） under high ammonia stress[J]. Fish Physiology and Biochemistry，2015，41（1）：203-217.

[7]Zhang C N，Tian H Y，Li X F，et al. The effects of fructooligosaccharide on the immune response，antioxidant capability and HSP70 and HSP90 expressions in blunt snout bream （Megalobrama amblycephala Yih） under high heat stress[J]. Aquaculture，2014，433：458-466.

[8]明建華，謝 駿，徐 跑，等. 大黃素、維生素C及其配伍對團頭魴生長、生理生化指標、抗病原感染以及兩種HSP70s mRNA表達的影響[J]. 水產學報，2010，34（9）：1447-1459.

[9]劉 波，明俊超，謝 駿，等. 大黃蒽醌提取物對羅氏沼蝦高溫下抗氧化能力與熱應激蛋白70基因表達的影響[J]. 水產學報，2010，34（6）：972-980.

[10]施兆鴻，張艷亮，高權新，等. 飼料維生素E水平影響云紋石斑魚幼魚對氨氮脅迫的響應[J]. 動物營養(yǎng)學報，2015，27（5）：1596-1604.

[11]張晨捷，張艷亮，彭士明，等. 不同維生素E水平飼料對云紋石斑魚幼魚低鹽脅迫前后抗氧化和滲透壓調節(jié)功能的比較[J]. 水產學報，2015，39（11）：1679-1689.

[12]Xie J，Liu B，Zhou Q L，et al. Effects of anthraquinone extract from rhubarb Rheum officinale Bail on the crowding stress response and growth of common carp Cyprinus carpio var. Jian[J]. Aquaculture，2008，281（1/2/3/4）：5-11.

[13]Mommsen T P，Vijayan M M，Moon T W. Cortisol in teleosts：dynamics，mechanisms of action，and metabolic regulation[J]. Reviews in Fish Biology and Fisheries，1999，9（3）：211-268.

[14]Grutter A S，Pankhur N W. The effects of capture，handling confinement and ectoparasite load on plasma levels of cortisol，glucose and lactate in the coral reef fish Hemigymnus melapterus[J]. Journal of Fish Biology，2000，57：391-401.

[15]明建華，謝 駿，徐 跑，等. 大黃素、維生素C及其配伍對團頭魴抗擁擠脅迫的影響[J]. 水生生物學報，2011，35（3）：400-413.

[16]周傳朋，劉 波，謝 駿，等. 抗應激制劑對運輸團頭魴血清生化和肝臟抗氧化指標的影響[J]. 水產科學，2014（1）：8-14.

[17]Ortuo J，Esteban M A，Meseguer J. Effects of short-term crowding stress on the gilthead seabream（Sparus aurata L.）innate immune response[J]. Fish & Shellfish Immunology，2001，11（2）：187-197.

[18]Wang Y，Xiong L，Yang K J，et al. Effect beta-cypermethrin on GPT and GOT activities of crucian serum[J]. Agricultural Science Technology，2005（1）：20-23.

[19]Mck A，Peters G. Lysozyme activity in rainbow trout，Oncorhynchus mykiss（Walbaum），stressed by handling，transport and water pollution[J]. Journal of Fish Biology，1990，37（6）：873-885.

[20]Fevolden S E，Roed K H，Fjalestad K T，et al. Poststress levels of lysozyme and cortisol in adult rainbow trout：heritabilities and genetic correlations[J]. Journal of Fish Biology，1999，54（4）：900-910.

[21]周顯青，牛翠娟，孫儒泳. 維生素C和E合用對中華鱉幼鱉非特異性免疫功能的影響[J]. 水生生物學報，2004，28（4）：356-360.

[22]林春玉，趙蓬蓬，簡 楊，等. 灌服乳酸桿菌對番鴨生長性能及免疫性能的影響[J]. 福建畜牧獸醫(yī)，2017，39（1）：10-12.

[23]徐基利，許 麗. 不同乳酸菌及其添加水平對肉仔雞生長性能、免疫機能和腸道結構的影響[J]. 動物營養(yǎng)學報，2011，23（11）：1976-1983.

[24]劉少敏，滿朝新，李 理，等. 乳酸菌免疫調節(jié)作用的研究進展[J]. 中國食物與營養(yǎng)，2013，19（4）：60-63.

[25]Laudicina D C，Marnett L J. Enhancement of hydroperoxide-dependent lipid peroxidation in rat liver microsomes by ascorbic acid[J]. Archives of Biochemistry & Biophysics，1990，278（1）：73-80.

[26]Farombi E O，Adelowo O A，Ajimoko Y R. Biomarkers of oxidative stress and heavy metal levels as indicators of environmental pollution in African cat fish （Clarias gariepinus） from Nigeria Ogun River[J]. International Journal of Environmental Research and Public Health，2007，4（2）：158-165.

[27]Jovanovi c′-Galovi c′ A，Blagojevi c′ D P，Grubor-Lajsi c′ G，et al. Role of antioxidant defense during different stages of preadult life cycle in European corn borer（Ostrinia nubilalis，Hubn.）：diapause and metamorphosis[J]. Archives of Insect Biochemistry and Physiology，2004，55（2）：79-89.

[28]Rahmat A，Abu Bakar M，Faezah N，et al. The effects of consumption of guava（Psidium guajava）or papaya（Carica papaya）on total antioxidant and lipid profile in normal male youth[J]. Asia Pacific Journal of Clinical Nutrition，2004，13：s106.

[29]Lesser M P. Oxidative stress in marine environments：biochemistry and physiological ecology[J]. Annual Review of Physiology，2006，68（1）：253-278.

[30]Lushchak V I. Environmentally induced oxidative stress in aquatic animals[J]. Aquatic Toxicology，2011，101（1）：13-30.

[31]Lushchak V I，Bagnyukova T V. Effects of different environmental oxygen levels on free radical processes in fish[J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part B：Biochemistry and Molecular Biology，2006，144（3）：283-289.

[32]Parihar M S，Dubey A K. Lipid peroxidation and ascorbic acid status in respiratory organs of male and female freshwater catfish Heteropneustes fossilis exposed to temperature increase[J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part C：Pharmacology，Toxicology and Endocrinology，1995，112（3）：309-313.

[33]Bocchetti R，Lamberti C V，Pisanelli B，et al. Seasonal variations of exposure biomarkers，oxidative stress responses and cell damage in the clams，Tapes philippinarum，and mussels，Mytilus galloprovincialis，from Adriatic Sea[J]. Marine Environmental Research，2008，66（1）：24-26.

[34]Lin M Y，Yen C L. Antioxidative ability of lactic acid bacteria[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，1999，47（4）：1460-1466.

[35]Wang C H，Lai P，Chen M E，et al. Antioxidative capacity produced by Bifidobacterium- and Lactobacillus acidophilus-mediated fermentations of konjac glucomannan and glucomannan oligosaccharides[J]. Journal of the Science of Food and Agriculture，2008，88（7）：1294-1300.

[36]Yagi R，Doi M. Isolation of an antioxidative substance produced by Aspergillus repens[J]. Bioscience Biotechnology & Biochemistry，1999，63（5）：932-933.

[37]Fu D，Chen J，Zhang Y，et al. Cloning and expression of a heat shock protein（HSP）90 gene in the haemocytes of Crassostrea hongkongensis under osmotic stress and bacterial challenge[J]. Fish & Shellfish Immunology，2011，31（1）：118-125.

[38]Farcy E，Serpentini A，Fiévet B，et al. Identification of cDNAs encoding HSP70 and HSP90 in the abalone Haliotis tuberculata：transcriptional induction in response to thermal stress in hemocyte primary culture[J]. Comparative Biochemistry and Physiology B：Biochemistry & Molecular Biology，2007，146（4）：540-550.

[39]Ivanina A V，Taylor C，Sokolova I M. Effects of elevated temperature and cadmium exposure on stress protein response in eastern oysters Crassostrea virginica （Gmelin）[J]. Aquatic Toxicology，2009，91（3）：245-254.

[40]強 俊，楊 弘，王 輝，等. 急性溫度應激對吉富品系尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）幼魚生化指標和肝臟HSP70mRNA表達的影響[J]. 海洋與湖沼，2012，43（5）：943-953.李景龍，劉廣東，尚東維，等. 黑水虻不同的投喂策略對鸚鵡魚生長及腸道消化酶指標的影響[J]. 江蘇農業(yè)科學，2019，47（1）：171-173.