分光光度法測(cè)定靈芝孢子油中總?cè)频暮?/h1>
2019-08-27 08:46:18李維嘉王志強(qiáng)許澤群梁潔怡林晨
食品研究與開發(fā) 2019年17期
李維嘉，王志強(qiáng)，許澤群，梁潔怡，林晨
（中國廣州分析測(cè)試中心，廣東省化學(xué)危害應(yīng)急檢測(cè)技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510070）
靈芝為多孔菌科真菌赤芝（Ganoderma lucidum Karst），或紫芝（Ganoderma sinense）的干燥子實(shí)體[1]。外形呈傘狀，菌蓋腎形、半圓形或近圓形，為多孔菌科真菌靈芝的子實(shí)體。具有補(bǔ)氣安神、止咳平喘的功效，用于治療眩暈不眠、心悸氣短、虛勞咳喘。主要分布于浙江、黑龍江、吉林、安徽、江西、湖南、貴州、廣東、福建等地[2-4]。靈芝具有雙向調(diào)節(jié)人體機(jī)能的作用，能過雙向調(diào)節(jié)人體機(jī)能平衡，使人的免疫系統(tǒng)得到快速的提升，恢復(fù)人體的內(nèi)臟和細(xì)胞達(dá)到正?；痆5-6]。因此靈芝具有很高的天然藥用價(jià)值和食用價(jià)值，為人們的生活提供更健康的保障[7-8]。
靈芝孢子油是通過超臨界二氧化碳流體萃取技術(shù)從破壁的靈芝孢子中提取的疏水性油狀脂質(zhì)物，具有抗腫瘤、提高免疫、抗病毒等多種作用[9-10]。其中豐富的靈芝總?cè)剖窃u(píng)價(jià)靈芝孢子油保健功效的重要指標(biāo)。靈芝三萜酸具有強(qiáng)烈的藥理活性，有護(hù)肝、解毒、殺滅癌細(xì)胞和止痛等功能。如靈芝酸具有抑制細(xì)胞組織胺的釋放、抑制血管緊張素酶的活性、抗病毒等功效[11-14]。目前測(cè)定靈芝孢子油中總?cè)坪康姆椒ㄉ形唇y(tǒng)一，測(cè)定方法大多采用香草醛乙酸溶液和高氯酸顯色比色法，但顯色條件各有不同，總?cè)坪恳矡o法真實(shí)比較[15-19]。本文通過5%香草醛-乙酸溶液和高氯酸顯色方法，分析各因素影響，建立了簡(jiǎn)單、方便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好的靈芝孢子油總?cè)坪繙y(cè)定的方法，以適用于靈芝孢子油中總?cè)坪康膶?duì)比分析。
1 材料與儀器
1.1 主要材料
靈芝孢子油：廣東現(xiàn)代漢方科技有限公司。
齊墩果酸對(duì)照品：中國食品檢定研究院；冰醋酸、香草醛、高氯酸、無水乙醇等（分析純）：廣州化學(xué)試劑廠。
1.2 主要儀器
UV-2450紫外可見分光光度計(jì)：日本島津公司；HWS24型電熱恒溫水浴鍋、DHG-9425A型電熱鼓風(fēng)干燥箱：上海一恒科學(xué)儀器有限公司；FB15067型超聲波清洗器：Fisher Scientific飛世爾實(shí)驗(yàn)器材（上海）有限公司。
2 試驗(yàn)方法
2.1 試樣液制備
準(zhǔn)確稱取靈芝孢子油樣品0.1 g于100 mL容量瓶中，加入無水乙醇80 mL，超聲提取1 h。冷卻至室溫20℃后，用無水乙醇定容至刻度線，搖勻，作為供試液。
2.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備
稱取10 mg齊墩果酸對(duì)照品，置100 mL容量瓶中，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成約0.1 mg/mL的齊墩果酸對(duì)照品儲(chǔ)備液。
2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇
取配置好的標(biāo)準(zhǔn)溶液0.6 mL于10 mL比色管中，水浴蒸干，加入0.2 mL 5%香草醛-冰乙酸溶液和0.8 mL高氯酸輕輕振蕩，于70℃水浴加熱15 min，取出冷卻加入5 mL乙酸后，在可見光區(qū)進(jìn)行掃描，確定最大吸收波長(zhǎng)540 nm。齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸收曲線掃描見圖1。
圖1 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的光吸收曲線Fig.1 Ultaraviolet absorption speatrum of oleanolic acid
2.4 顯色水浴溫度的選擇
分別取0.8 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液加入到18個(gè)比色管中，按2.3方法操作，改變顯色溫度為40、50、60、70、80、90℃后，測(cè)定吸光度值，其結(jié)果見表1。
表1 不同水浴溫度對(duì)吸光度值的影響Table 1 Effect of different bath temperature on the absorbance value
由表1比較得知，顯色溫度在70℃時(shí)，試樣與顯色劑反應(yīng)完全，顯色效果較佳，在80℃以后時(shí)雖然吸光度高，但空白吸光度值大，因此水浴溫度在70℃時(shí)最佳。
2.5 顯色的穩(wěn)定時(shí)間的選擇
分別取0.8 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液加入到18個(gè)比色管中，按2.3方法操作，改變顯色的穩(wěn)定時(shí)間為5、10、15、30、45、60 min后，測(cè)定其吸光度值，其結(jié)果見表2。
表2 不同穩(wěn)定時(shí)間對(duì)吸光度值的影響Table 2 Effect of different stabilizing time on absorbance value
續(xù)表2 不同穩(wěn)定時(shí)間對(duì)吸光度值的影響Continue table 2 Effect of different stabilizing time on absorption value
由表2比較得知，穩(wěn)定時(shí)間在15 min時(shí)，試樣顯色充分，隨著時(shí)間的增長(zhǎng)，空白吸光度過大。因此選擇15 min為穩(wěn)定時(shí)間。
2.6 顯色劑用量的選擇
分別取0.8 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液加入到15個(gè)比色管中，按2.3方法操作，改變顯色的顯色劑用量為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL后，測(cè)定其吸光度值，其結(jié)果見表3。
表3 不同顯色劑用量對(duì)吸光度值的影響Table 3 Effect of different amount of colorant on the absorbance value
由表3比較得知，顯色劑用量在0.2 mL時(shí)，吸光度較大且平行性好，顯色劑用量在0.2 mL以后，空白吸光度過高，會(huì)對(duì)低濃度試樣結(jié)果產(chǎn)生影響，因此選擇0.2 mL為顯色劑用量。
2.7 高氯酸用量的選擇
分別取0.8 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液加入到18個(gè)比色管中，按2.3方法操作，改變高氯酸用量為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL后，測(cè)定其吸光度值，其結(jié)果見表4。
表4 不同高氯酸用量對(duì)吸光度值的影響Table 4 Effect of different amounts of perchloric acid on the absorbance value
由表4比較得知，穩(wěn)定劑在0.8 mL時(shí)，吸光度較大，顯色效果較好，選擇高氯酸用量為0.8 mL最佳。
2.8 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定
用建立的檢測(cè)方法按2.3方法測(cè)定齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，配置實(shí)際齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液溶度為0.092 07 mg/mL，x軸選取齊墩果酸的絕對(duì)含量為0、0.018、0.037、0.055、0.074、0.092、0.110 mg，每點(diǎn)平行測(cè)定3次結(jié)果取平均值，分析結(jié)果見表5。以質(zhì)量c為橫坐標(biāo)，吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性擬合，c與A之間呈線性關(guān)系。線性回歸方程和線性相關(guān)系數(shù)見表5，線性擬合曲線見圖2。該分析方法線性關(guān)系良好，可以進(jìn)行定量分析。
2.9 專屬性
取8只具塞比色管標(biāo)號(hào)1至8，以1、2號(hào)比色管作為空白試劑管，加入乙酸試劑；以3、4號(hào)比色管作為陰性樣試驗(yàn)管，加入無水乙醇0.2 mL；以5、6號(hào)管作為陽性樣試驗(yàn)管，在其中加入0.2 mL 2試樣液；以7、8號(hào)管作為陽性樣加標(biāo)試樣管，在其中加入0.2 mL試樣夜和0.2 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。分別將3～8號(hào)比色管按2.3進(jìn)行處理，將1至8號(hào)比色管在540 nm處測(cè)定吸光值，結(jié)果見表6。
表5 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性回歸方程和線性相關(guān)系數(shù)Table 5 Linear regression equation and linear correlation coefficient of the standard solution of oleanolic acid
圖2 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液線性擬合曲線Fig.2 Linear fitting curve of standard solution of oleanolic acid
表6 方法專屬性試驗(yàn)Table 6 Method exclusive test
由表6分析得知，試驗(yàn)方法在空白試劑條件下吸光度值為0，陰性樣和陽性樣的吸光度值結(jié)果差異明顯，且陽性樣加標(biāo)試驗(yàn)與陽性試驗(yàn)有很顯著的吸光度值增加體現(xiàn)，結(jié)果表明分析方法具有良好的專屬性。
2.10 方法精密度
用建立的方法對(duì)同一批次的靈芝孢子油進(jìn)行6次測(cè)定，其中樣品取樣量為0.1 g。計(jì)算6個(gè)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD），結(jié)果見表7。
表7 測(cè)定方法的重復(fù)性Table 7 Repetition of measurement methods
用建立的方法對(duì)同一批次的靈芝孢子油進(jìn)行6次測(cè)定，其中樣品取樣量為0.1 g，分別在不同日期，不同人員，不同儀器的情況下分別測(cè)試2次，計(jì)算6個(gè)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表8。
表8 測(cè)定方法的中間精密度Table 8 Intermediate precision of the determination method
從表7和表8得出：RSD值分別為1.5%和2.3%，符合一般方法的RSD＜5%的要求，該方法具有很好的精密度。
2.11 方法準(zhǔn)確度
稱取樣品0.1g（精確到0.000 1 g），共稱取12個(gè)，每4個(gè)為1組一共3組，每組保留1個(gè)不加標(biāo)，另外3個(gè)進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)。樣品稱取后，按試驗(yàn)方法操作，于樣品中分別加入 28.25、28.77、28.79、35.20、35.18、35.26、53.65、54.21、55.15 mg 齊墩果酸對(duì)照品，按試驗(yàn)方法處理進(jìn)行比色測(cè)定，即進(jìn)行3組不同濃度的加標(biāo)回收試驗(yàn)，具體試驗(yàn)數(shù)據(jù)見表9。
表9 回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 9 Experimental results of recovery rates
從表9可知，此3組不同濃度的平均加標(biāo)回收率分別為101.8%、99.9%、97.4%，滿足一般檢測(cè)方法對(duì)回收率90%～110%要求。
3 10批不同廠家靈芝孢子油樣品測(cè)定
分別購買10批不同廠家的靈芝孢子油，分別準(zhǔn)確稱取0.10 g樣品于10 0 mL容量瓶中，加入無水乙醇80 mL，超聲提取1 h。冷卻至室溫20℃后，用無水乙醇定容至刻度線，搖勻，作為供試液。取0.2 mL供試液于具塞比色管，置于干燥箱內(nèi)，90℃烘干溶劑。分別加入0.2 mL 5%香草醛-冰乙酸溶液和0.8 mL高氯酸，輕輕振蕩，于70℃水浴加熱15 min，取出，立即置冰水冷卻5 min。用5 mL移液管準(zhǔn)確移取冰乙酸5.0 mL稀釋，搖勻，在30 min內(nèi)用紫外分光光度計(jì)在540 nm處測(cè)其吸光度A。通過線性回歸方程計(jì)算得到供試液中總?cè)频暮恳姳?0。
表10 市售10種靈芝孢子油中總?cè)坪縏able 10 Total triterpenes in 10 commercially available ganoderma spore oils
從表10中可以看出市售的10種靈芝孢子油都能滿足其標(biāo)示值，其中產(chǎn)品2和產(chǎn)品6的總?cè)茖?shí)測(cè)值最高，達(dá)到34.2%，產(chǎn)品4的實(shí)測(cè)值最低，為23.7%。
4 結(jié)論
以香草醛乙酸溶液及高氯酸為顯色劑，并通過水浴加熱的條件，采用分光光度法是測(cè)定總?cè)频某Ｓ梅椒ǎ渌r(shí)間、溫度、顯色劑用量和高氯酸用量都會(huì)影響所測(cè)總?cè)坪?。通過單因素逐步分析，總結(jié)出在加入0.2 mL 5%香草醛-冰乙酸溶液和0.8 mL高氯酸，于70℃水浴加熱15 min的條件下，測(cè)試靈芝孢子油中總?cè)频暮磕軌蜻_(dá)到精密度好，準(zhǔn)確度高，對(duì)樣品空白影響較小，且方法有很好的回收率，能夠?yàn)椴煌`芝孢子油中總?cè)坪康膶?duì)比提供較好的參考方法。
猜你喜歡
分光光度法檢測(cè)污水中重金屬六價(jià)鉻的改進(jìn)研究安徽化工(2022年4期)2022-08-02 06:35:02 環(huán)境監(jiān)測(cè)中六價(jià)鉻分析方法的改進(jìn)與優(yōu)化分析皮革制作與環(huán)保科技(2022年4期)2022-04-29 08:18:46 無碳復(fù)寫紙及其顯色劑市場(chǎng)現(xiàn)狀及趨勢(shì)造紙化學(xué)品(2019年6期)2020-01-17 01:20:40 齊墩果酸固體分散體的制備中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:40:56 齊墩果酸對(duì)自然衰老大鼠睪丸DNA損傷保護(hù)作用及機(jī)制研究天然產(chǎn)物研究與開發(fā)(2018年5期)2018-06-13 03:23:32 分光光度法測(cè)定鉻(VI)實(shí)驗(yàn)教學(xué)方法的改進(jìn)*廣州化工(2016年6期)2016-09-05 09:56:21 齊墩果酸衍生物的合成及其對(duì)胰脂肪酶的抑制作用天然產(chǎn)物研究與開發(fā)(2016年1期)2016-06-05 10:29:24 酸溶-高氯酸氧化光度法測(cè)定錳礦石中全錳的含量河北地質(zhì)(2016年2期)2016-03-20 13:52:04 高氟高氯酸性廢水處理實(shí)驗(yàn)研究江西理工大學(xué)學(xué)報(bào)(2015年3期)2015-12-22 05:26:17 水線草熊果酸和齊墩果酸含量測(cè)定中國當(dāng)代醫(yī)藥(2015年8期)2015-03-01 02:01:33
李維嘉，王志強(qiáng)，許澤群，梁潔怡，林晨
（中國廣州分析測(cè)試中心，廣東省化學(xué)危害應(yīng)急檢測(cè)技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510070）
靈芝為多孔菌科真菌赤芝（Ganoderma lucidum Karst），或紫芝（Ganoderma sinense）的干燥子實(shí)體[1]。外形呈傘狀，菌蓋腎形、半圓形或近圓形，為多孔菌科真菌靈芝的子實(shí)體。具有補(bǔ)氣安神、止咳平喘的功效，用于治療眩暈不眠、心悸氣短、虛勞咳喘。主要分布于浙江、黑龍江、吉林、安徽、江西、湖南、貴州、廣東、福建等地[2-4]。靈芝具有雙向調(diào)節(jié)人體機(jī)能的作用，能過雙向調(diào)節(jié)人體機(jī)能平衡，使人的免疫系統(tǒng)得到快速的提升，恢復(fù)人體的內(nèi)臟和細(xì)胞達(dá)到正?；痆5-6]。因此靈芝具有很高的天然藥用價(jià)值和食用價(jià)值，為人們的生活提供更健康的保障[7-8]。
靈芝孢子油是通過超臨界二氧化碳流體萃取技術(shù)從破壁的靈芝孢子中提取的疏水性油狀脂質(zhì)物，具有抗腫瘤、提高免疫、抗病毒等多種作用[9-10]。其中豐富的靈芝總?cè)剖窃u(píng)價(jià)靈芝孢子油保健功效的重要指標(biāo)。靈芝三萜酸具有強(qiáng)烈的藥理活性，有護(hù)肝、解毒、殺滅癌細(xì)胞和止痛等功能。如靈芝酸具有抑制細(xì)胞組織胺的釋放、抑制血管緊張素酶的活性、抗病毒等功效[11-14]。目前測(cè)定靈芝孢子油中總?cè)坪康姆椒ㄉ形唇y(tǒng)一，測(cè)定方法大多采用香草醛乙酸溶液和高氯酸顯色比色法，但顯色條件各有不同，總?cè)坪恳矡o法真實(shí)比較[15-19]。本文通過5%香草醛-乙酸溶液和高氯酸顯色方法，分析各因素影響，建立了簡(jiǎn)單、方便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好的靈芝孢子油總?cè)坪繙y(cè)定的方法，以適用于靈芝孢子油中總?cè)坪康膶?duì)比分析。
1 材料與儀器
1.1 主要材料
靈芝孢子油：廣東現(xiàn)代漢方科技有限公司。
齊墩果酸對(duì)照品：中國食品檢定研究院；冰醋酸、香草醛、高氯酸、無水乙醇等（分析純）：廣州化學(xué)試劑廠。
1.2 主要儀器
UV-2450紫外可見分光光度計(jì)：日本島津公司；HWS24型電熱恒溫水浴鍋、DHG-9425A型電熱鼓風(fēng)干燥箱：上海一恒科學(xué)儀器有限公司；FB15067型超聲波清洗器：Fisher Scientific飛世爾實(shí)驗(yàn)器材（上海）有限公司。
2 試驗(yàn)方法
2.1 試樣液制備
準(zhǔn)確稱取靈芝孢子油樣品0.1 g于100 mL容量瓶中，加入無水乙醇80 mL，超聲提取1 h。冷卻至室溫20℃后，用無水乙醇定容至刻度線，搖勻，作為供試液。
2.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備
稱取10 mg齊墩果酸對(duì)照品，置100 mL容量瓶中，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成約0.1 mg/mL的齊墩果酸對(duì)照品儲(chǔ)備液。
2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇
取配置好的標(biāo)準(zhǔn)溶液0.6 mL于10 mL比色管中，水浴蒸干，加入0.2 mL 5%香草醛-冰乙酸溶液和0.8 mL高氯酸輕輕振蕩，于70℃水浴加熱15 min，取出冷卻加入5 mL乙酸后，在可見光區(qū)進(jìn)行掃描，確定最大吸收波長(zhǎng)540 nm。齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸收曲線掃描見圖1。
圖1 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的光吸收曲線Fig.1 Ultaraviolet absorption speatrum of oleanolic acid
2.4 顯色水浴溫度的選擇
分別取0.8 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液加入到18個(gè)比色管中，按2.3方法操作，改變顯色溫度為40、50、60、70、80、90℃后，測(cè)定吸光度值，其結(jié)果見表1。
表1 不同水浴溫度對(duì)吸光度值的影響Table 1 Effect of different bath temperature on the absorbance value
由表1比較得知，顯色溫度在70℃時(shí)，試樣與顯色劑反應(yīng)完全，顯色效果較佳，在80℃以后時(shí)雖然吸光度高，但空白吸光度值大，因此水浴溫度在70℃時(shí)最佳。
2.5 顯色的穩(wěn)定時(shí)間的選擇
分別取0.8 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液加入到18個(gè)比色管中，按2.3方法操作，改變顯色的穩(wěn)定時(shí)間為5、10、15、30、45、60 min后，測(cè)定其吸光度值，其結(jié)果見表2。
表2 不同穩(wěn)定時(shí)間對(duì)吸光度值的影響Table 2 Effect of different stabilizing time on absorbance value
續(xù)表2 不同穩(wěn)定時(shí)間對(duì)吸光度值的影響Continue table 2 Effect of different stabilizing time on absorption value
由表2比較得知，穩(wěn)定時(shí)間在15 min時(shí)，試樣顯色充分，隨著時(shí)間的增長(zhǎng)，空白吸光度過大。因此選擇15 min為穩(wěn)定時(shí)間。
2.6 顯色劑用量的選擇
分別取0.8 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液加入到15個(gè)比色管中，按2.3方法操作，改變顯色的顯色劑用量為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL后，測(cè)定其吸光度值，其結(jié)果見表3。
表3 不同顯色劑用量對(duì)吸光度值的影響Table 3 Effect of different amount of colorant on the absorbance value
由表3比較得知，顯色劑用量在0.2 mL時(shí)，吸光度較大且平行性好，顯色劑用量在0.2 mL以后，空白吸光度過高，會(huì)對(duì)低濃度試樣結(jié)果產(chǎn)生影響，因此選擇0.2 mL為顯色劑用量。
2.7 高氯酸用量的選擇
分別取0.8 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液加入到18個(gè)比色管中，按2.3方法操作，改變高氯酸用量為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL后，測(cè)定其吸光度值，其結(jié)果見表4。
表4 不同高氯酸用量對(duì)吸光度值的影響Table 4 Effect of different amounts of perchloric acid on the absorbance value
由表4比較得知，穩(wěn)定劑在0.8 mL時(shí)，吸光度較大，顯色效果較好，選擇高氯酸用量為0.8 mL最佳。
2.8 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定
用建立的檢測(cè)方法按2.3方法測(cè)定齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，配置實(shí)際齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液溶度為0.092 07 mg/mL，x軸選取齊墩果酸的絕對(duì)含量為0、0.018、0.037、0.055、0.074、0.092、0.110 mg，每點(diǎn)平行測(cè)定3次結(jié)果取平均值，分析結(jié)果見表5。以質(zhì)量c為橫坐標(biāo)，吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性擬合，c與A之間呈線性關(guān)系。線性回歸方程和線性相關(guān)系數(shù)見表5，線性擬合曲線見圖2。該分析方法線性關(guān)系良好，可以進(jìn)行定量分析。
2.9 專屬性
取8只具塞比色管標(biāo)號(hào)1至8，以1、2號(hào)比色管作為空白試劑管，加入乙酸試劑；以3、4號(hào)比色管作為陰性樣試驗(yàn)管，加入無水乙醇0.2 mL；以5、6號(hào)管作為陽性樣試驗(yàn)管，在其中加入0.2 mL 2試樣液；以7、8號(hào)管作為陽性樣加標(biāo)試樣管，在其中加入0.2 mL試樣夜和0.2 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。分別將3～8號(hào)比色管按2.3進(jìn)行處理，將1至8號(hào)比色管在540 nm處測(cè)定吸光值，結(jié)果見表6。
表5 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性回歸方程和線性相關(guān)系數(shù)Table 5 Linear regression equation and linear correlation coefficient of the standard solution of oleanolic acid
圖2 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液線性擬合曲線Fig.2 Linear fitting curve of standard solution of oleanolic acid
表6 方法專屬性試驗(yàn)Table 6 Method exclusive test
由表6分析得知，試驗(yàn)方法在空白試劑條件下吸光度值為0，陰性樣和陽性樣的吸光度值結(jié)果差異明顯，且陽性樣加標(biāo)試驗(yàn)與陽性試驗(yàn)有很顯著的吸光度值增加體現(xiàn)，結(jié)果表明分析方法具有良好的專屬性。
2.10 方法精密度
用建立的方法對(duì)同一批次的靈芝孢子油進(jìn)行6次測(cè)定，其中樣品取樣量為0.1 g。計(jì)算6個(gè)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD），結(jié)果見表7。
表7 測(cè)定方法的重復(fù)性Table 7 Repetition of measurement methods
用建立的方法對(duì)同一批次的靈芝孢子油進(jìn)行6次測(cè)定，其中樣品取樣量為0.1 g，分別在不同日期，不同人員，不同儀器的情況下分別測(cè)試2次，計(jì)算6個(gè)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表8。
表8 測(cè)定方法的中間精密度Table 8 Intermediate precision of the determination method
從表7和表8得出：RSD值分別為1.5%和2.3%，符合一般方法的RSD＜5%的要求，該方法具有很好的精密度。
2.11 方法準(zhǔn)確度
稱取樣品0.1g（精確到0.000 1 g），共稱取12個(gè)，每4個(gè)為1組一共3組，每組保留1個(gè)不加標(biāo)，另外3個(gè)進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)。樣品稱取后，按試驗(yàn)方法操作，于樣品中分別加入 28.25、28.77、28.79、35.20、35.18、35.26、53.65、54.21、55.15 mg 齊墩果酸對(duì)照品，按試驗(yàn)方法處理進(jìn)行比色測(cè)定，即進(jìn)行3組不同濃度的加標(biāo)回收試驗(yàn)，具體試驗(yàn)數(shù)據(jù)見表9。
表9 回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 9 Experimental results of recovery rates
從表9可知，此3組不同濃度的平均加標(biāo)回收率分別為101.8%、99.9%、97.4%，滿足一般檢測(cè)方法對(duì)回收率90%～110%要求。
3 10批不同廠家靈芝孢子油樣品測(cè)定
分別購買10批不同廠家的靈芝孢子油，分別準(zhǔn)確稱取0.10 g樣品于10 0 mL容量瓶中，加入無水乙醇80 mL，超聲提取1 h。冷卻至室溫20℃后，用無水乙醇定容至刻度線，搖勻，作為供試液。取0.2 mL供試液于具塞比色管，置于干燥箱內(nèi)，90℃烘干溶劑。分別加入0.2 mL 5%香草醛-冰乙酸溶液和0.8 mL高氯酸，輕輕振蕩，于70℃水浴加熱15 min，取出，立即置冰水冷卻5 min。用5 mL移液管準(zhǔn)確移取冰乙酸5.0 mL稀釋，搖勻，在30 min內(nèi)用紫外分光光度計(jì)在540 nm處測(cè)其吸光度A。通過線性回歸方程計(jì)算得到供試液中總?cè)频暮恳姳?0。
表10 市售10種靈芝孢子油中總?cè)坪縏able 10 Total triterpenes in 10 commercially available ganoderma spore oils
從表10中可以看出市售的10種靈芝孢子油都能滿足其標(biāo)示值，其中產(chǎn)品2和產(chǎn)品6的總?cè)茖?shí)測(cè)值最高，達(dá)到34.2%，產(chǎn)品4的實(shí)測(cè)值最低，為23.7%。
4 結(jié)論
以香草醛乙酸溶液及高氯酸為顯色劑，并通過水浴加熱的條件，采用分光光度法是測(cè)定總?cè)频某Ｓ梅椒ǎ渌r(shí)間、溫度、顯色劑用量和高氯酸用量都會(huì)影響所測(cè)總?cè)坪?。通過單因素逐步分析，總結(jié)出在加入0.2 mL 5%香草醛-冰乙酸溶液和0.8 mL高氯酸，于70℃水浴加熱15 min的條件下，測(cè)試靈芝孢子油中總?cè)频暮磕軌蜻_(dá)到精密度好，準(zhǔn)確度高，對(duì)樣品空白影響較小，且方法有很好的回收率，能夠?yàn)椴煌`芝孢子油中總?cè)坪康膶?duì)比提供較好的參考方法。
猜你喜歡
安徽化工(2022年4期)2022-08-02 06:35:02
皮革制作與環(huán)保科技(2022年4期)2022-04-29 08:18:46
造紙化學(xué)品(2019年6期)2020-01-17 01:20:40
中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:40:56
天然產(chǎn)物研究與開發(fā)(2018年5期)2018-06-13 03:23:32
廣州化工(2016年6期)2016-09-05 09:56:21
天然產(chǎn)物研究與開發(fā)(2016年1期)2016-06-05 10:29:24
河北地質(zhì)(2016年2期)2016-03-20 13:52:04
江西理工大學(xué)學(xué)報(bào)(2015年3期)2015-12-22 05:26:17
中國當(dāng)代醫(yī)藥(2015年8期)2015-03-01 02:01:33
