杜俊勇 曲宇霆 蘇比努爾 沙達爾丁

【摘要】探究水合氯醛、烏拉坦、戊巴比妥對小鼠免疫功能的影響。方法：通過給小鼠短期注射水合氯醛、烏拉坦、戊巴比妥測定小鼠免疫器官生長指數(shù)測定、適應性免疫和固有性免疫功能等，檢測水合氯醛、烏拉坦、戊巴比妥對小鼠外周免疫器官脾臟和胸腺生長指數(shù)、B細胞生成抗體及巨噬細胞吞噬功能的影響。結果：注射水合氯醛，烏拉坦和戊巴比妥的小鼠在免疫器官的重量，固有性免疫和適應性免疫功能均顯著低于對照組（P<0.05）。結論：水合氯醛，烏拉坦，戊巴比妥均可使小鼠免疫功能下降。

【關鍵詞】水合氯醛;烏拉坦;戊巴比妥;免疫功能

【中圖分類號】R821.4+2 ? ? ?【文獻標識碼】A ? ? 【文章編號】2095-6851（2019）08-034-02

水合氯醛在醫(yī)學上常用作麻醉藥和抗驚厥藥，用于失眠煩躁不安及驚厥，對胃腸道有很強的刺激性;烏拉坦常用于試驗動物麻醉，癌癥模型建立;戊巴比妥用于動物麻醉實驗，僅供科研使用，為作用的巴比妥類催眠藥，用作催眠和麻醉前給藥，亦可用于治療癲癇和破傷風的痙攣。

1 動物與試劑

1.1 動物

健康雄性昆明小鼠，體重（35

SymbolqB@ 2）g，由武漢科技大學校醫(yī)院提供。

1.2 試劑

水合氯醛，烏拉坦，戊巴比妥，根據(jù)查閱文獻結果將其加水配成分別為350mg/kg、750mg/kg、40mg/kg的溶液，該劑量均為最適劑量。

2 方法

2.1 實驗動物分組 將小白鼠隨機分為3個大組，每組數(shù)量分別為35只、20只、20只，分別用于免疫器官生長指數(shù)的測定、特異性免疫功能測定、非特異性免疫功能測定。小鼠的生理狀況大致一致，每一大組又均分為4個小組。

2.2 免疫器官生長指數(shù)測定 試驗第一天，將第一大組的35只小鼠分為4組，一組為空白組5只小鼠;其它三組分別10只小鼠，分別用三種麻醉劑進行腹腔注射，之后將其放置飼養(yǎng)箱中。麻醉后第七天，再次對小鼠分別進行腹腔注射，麻醉后放入飼養(yǎng)箱。麻醉后第八天，三個小組隨機抽取5只小鼠勁椎脫臼處死后剖殺;麻醉后第十五天，將三個小組的剩余老鼠處死后剖殺。每次剖殺時，剖殺前空腹稱重，剖殺后立即取出脾臟、胸腺稱重，并計算生長指數(shù)。生長指數(shù)=免疫器官重量（mg）/小鼠重量（g）。

2.3 適應性免疫功能測定 試驗第一天，將20只小鼠等分成4組，一組為空白組，其他3組分別用三種麻醉劑進行腹腔注射，之后將其放置飼養(yǎng)箱中;麻醉后第7天，再次對小鼠分別進行腹腔注射麻醉劑，麻醉后放入飼養(yǎng)箱。麻醉后第8天，取無脂載玻片，用雙面膠帶在載玻片兩端和中間各粘一條，然后再覆蓋上同樣的載玻片，即形成兩個小室。將此雙層玻片的一側長邊浸入融化的石臘池中以封閉小室的一邊。將5%綿羊紅細胞 0.4 mL注射入小白鼠腹腔。麻醉后第13天后拉脫頸椎處死，取出脾臟稱重后放在已加入6 mL Hanks液的平皿中，用不銹鋼網(wǎng)研磨后，經(jīng)尼龍布過濾放入試管，1000r/min離心5min，洗2次。將沉淀的脾細胞重懸Hanks液中，細胞計數(shù)配成1×107/mL。將上述脾細胞 Hanks液50μL、15% SRBC 50μL、1∶6 ～ 1∶8補體50μL、Hanks液250 μL混勻，用微量加樣器將混合液注入事先制備好的小室中，然后以石蠟封口，放37℃溫箱1h，取出。借助放大鏡，進行空斑計數(shù)，計算1×106個脾細胞所含空斑數(shù)。

2.4 固有性免疫功能測定 試驗第一天，將20只小鼠等分成4組，一組為空白組，其它3組分別用三種麻醉劑進行腹腔注射，以后將其放置飼養(yǎng)箱中。麻醉后第7天再次對小鼠分別進行腹腔注射麻醉劑，麻醉后放入飼養(yǎng)箱。麻醉后第8天，經(jīng)小白鼠腹腔注射6%淀粉肉湯1mL，刺激小白鼠產(chǎn)生無菌性炎癥，誘導巨噬細胞在腹腔的聚集、活化。麻醉后第12天腹腔注射1%雞紅細胞1mL，30分鐘后注射2mL Hanks液，頸椎脫臼法處死小白鼠，解剖小白鼠暴露腹腔，用尖吸管盡可能多地沖洗出小白鼠腹腔的巨噬細胞，并取脾臟稱重。收集腹腔液，置于潔凈試管內(nèi)，加1-2滴1%堿性美蘭染色，涂片于載玻片上， 37℃溫箱干燥，油鏡鏡檢。

3 結果

3.1 免疫器官重量和生長指數(shù)測定 水合氯醛、烏拉坦、戊巴比妥這三組小鼠的脾臟和胸腺的生長指數(shù)均顯著低于對照組。

3.2 適應性免疫（B細胞）功能測定 由于B細胞所分泌的抗體和綿羊紅細胞結合形成抗原抗體復合物，在補體作用下可使紅細胞溶解于特制的小室內(nèi)，形成肉眼可見的溶血空斑，1個空斑即代表1個PFC。對照組、水合氯醛組、烏拉坦組、戊巴比妥組小鼠1×106個B細胞所含PFC個數(shù)。三個實驗組的PFC個數(shù)顯著低于對照組。

4 討論

研究表明正常劑量的水合氯醛，烏拉坦和戊巴比妥均對人體有毒性，對免疫系統(tǒng)也有較大損傷。本實驗進行了免疫器官生長指數(shù)的測定、吞噬細胞功能的測定、B細胞功能的測定，其結果表明了機體免疫功能的強弱。研究結果表明，三種麻醉劑對小鼠的免疫功能均有影響。

參考文獻：

[1] 熊平源，王強.醫(yī)學免疫學實驗教程[M].武漢：武漢大學出版社. 2011.8-9.（2014-）4-30 收稿 2014-）7-）7 修回）

[2] 鄭杰蔚，陸豐榮，李國樑，謝植偉，鐘怡洲，曾麗海，黃曼琪，張雅婷，殷霄，曾玉梨，高晨，張海燕，吳潔嬌，江亮，黃振烈.不同麻醉劑及采血方式對SD大鼠和昆明小鼠血常規(guī)影響[J].中國職業(yè)醫(yī)學，2018，45（01）：51-54