益氣聰明湯加味對(duì)VD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

李王杏安 張獻(xiàn)文 吉海杰 蘇榮葉

【摘要】目的 觀察益氣聰明湯加味對(duì)VD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。方法 采用Pulsinelli四血管阻斷法復(fù)制大鼠全腦缺血模型，設(shè)模型組，假手術(shù)組，益氣聰明湯加味低、中、高（1 g/kg、2 g/kg和4 g/kg）劑量組，鹽酸多奈哌齊陽(yáng)性對(duì)照組（1.5 mg/kg），各組分別灌胃干預(yù)連續(xù)4周，Morris迷宮測(cè)試大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。結(jié)果 手術(shù)后第21天進(jìn)行Morris水迷宮試驗(yàn)，益氣聰明湯加味不同給藥組從第2次開(kāi)始其逃避潛伏期與模型組比較呈現(xiàn)縮短趨勢(shì)，尤其以高劑量治療組逃避潛伏期減少明顯，表明益氣聰明湯加味具有改善模型大鼠空間學(xué)習(xí)能力作用。模型大鼠經(jīng)灌胃給與益氣聰明湯加味與多奈哌齊治療4周后，各給藥組定位航行訓(xùn)練逃避潛伏期與模型組比較有減少趨勢(shì)，同時(shí)目標(biāo)象限時(shí)間有增加趨勢(shì)，其中以多奈哌齊組和高劑量組具有顯著性差異。結(jié)淪 益氣聰明湯加味可提升VD大鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)記憶能力。

【關(guān)鍵詞】益氣聰明湯;記憶能力;影響

【中圖分類(lèi)號(hào)】R259 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】ISSN.2095-6681.2019.19..02

血管性癡呆（VascularDementia，VD）是指由于腦血管疾病引起的缺血性腦組織缺氧和出血性腦損害所導(dǎo)致的以認(rèn)知功能缺損為核心癥狀的獲得性臨床綜合癥，在臨床的表現(xiàn)多為持續(xù)性和獲得性的高級(jí)認(rèn)知功能受到嚴(yán)重?fù)p傷[1]，是老年癡呆最常見(jiàn)類(lèi)型之一[2]。中醫(yī)學(xué)在疾病診治中尤其注重整體調(diào)治，認(rèn)為VD與脾胃虛損，腎陽(yáng)不升有密切聯(lián)系。本課題中，我們研究益氣聰明湯對(duì)VD大鼠水迷宮成績(jī)的改善，并

探討其神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)雄性SD大鼠80只，體質(zhì)量（180±20）g/只（北京華阜康生物科技股份有限公司生產(chǎn)，北京市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（京）2014-004）。動(dòng)物購(gòu)回后飼養(yǎng)于山西省中醫(yī)藥研究院中心實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物房，室溫（22±1）℃，相對(duì)濕度40%～60%，自由進(jìn)食、進(jìn)水。

1.2 藥物與試劑

益氣聰明湯加味顆粒，山西省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院制劑室提供;鹽酸多奈哌齊片（衛(wèi)才（中國(guó)）藥業(yè)有限公司，批號(hào)1611013）。

1.3 儀器

大鼠腦立體定位儀[深圳瑞沃德生命科技有限公司];單通道小動(dòng)物氣體麻醉機(jī)[R540，深圳瑞沃德生命科技有限公司];高頻電刀[DGD-300B-2，北京貝林電子有限公司];Morris水迷宮[DMS-2，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所研制]。

1.4 方法

1.4.1 分組及全腦缺血模型制備

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為模型組，對(duì)照組，益氣聰明湯低、中、高劑量組和假手術(shù)組（n=10）。

（1）模型組：采用Pulsinelli法四血管閉塞復(fù)制大鼠全腦缺血模型。

（2）假手術(shù)組：大鼠除不凝閉椎動(dòng)脈和夾閉頸總動(dòng)脈外，其余操作與模型大鼠相同。

1.4.2 給藥

術(shù)后5天開(kāi)始給藥。陽(yáng)性對(duì)照組灌胃給予0.5 mg/kg多奈哌齊;益氣聰明湯低、中、高劑量組分別灌胃給予1 g/kg、2 g/kg和4 g/kg益氣聰明湯加味顆粒;假手術(shù)組和模型組大鼠均灌胃相同體積自來(lái)水，灌胃體積20 ml/kg。每日灌胃給藥一次，連續(xù)4周。

1.5 指標(biāo)檢測(cè)

1.5.1 Morris水迷宮行為學(xué)測(cè)試

參照Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)方法[3]。

（1）定位航行試驗(yàn)：從給藥第三周末開(kāi)始本實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)前1 h給藥。每只大鼠每天訓(xùn)練1次，每次60 s，連續(xù)訓(xùn)練5天。選平臺(tái)對(duì)面（第Ⅱ象限）為入池位置，將大鼠置于象限邊緣1/2弧度處頭朝池壁入水，經(jīng)60 s未找到站臺(tái)者，將其引領(lǐng)至平臺(tái)，放置10 s，此時(shí)逃避潛伏期記為60 s。第2～5天重復(fù)如上操作，記錄大鼠找到平臺(tái)的時(shí)間（潛伏期）作為學(xué)習(xí)成績(jī)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

（2）空間探索試驗(yàn)：定位航行試驗(yàn)結(jié)束后，將平臺(tái)撤去，于相同位置將大鼠頭朝池壁入水，自由游泳60 s。記錄每只大鼠在Morris水迷宮測(cè)試中第一次到達(dá)平臺(tái)的時(shí)間及60 s內(nèi)穿越平臺(tái)所在位置的次數(shù)，作為衡量其空間學(xué)習(xí)記憶能力的指標(biāo)。同時(shí)計(jì)算60 s內(nèi)總游泳距離。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié)果以Means±SD表示，采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，水迷宮實(shí)驗(yàn)采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的雙因素方差分析（two-way analysis of variance，ANOVA），其他數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析結(jié)合Dunnett-t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

手術(shù)后第21天進(jìn)行Morris水迷宮定位航行試驗(yàn)，單只大鼠放入Morris水迷宮60 s讓其尋找安全平臺(tái)，記錄其逃避潛伏期，每日1次，連續(xù)5天。假手術(shù)組大鼠隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加其逃避潛伏期逐漸縮短，由首次的（59.9±0.9）s減少到末次（16.3±6.8）s，并且所有大鼠均能找到安全平臺(tái);模型組大鼠逃避潛伏期亦隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加而逐漸縮短，但其在第2次逃避潛伏期與假手術(shù)組比較即明顯延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），末次逃避潛伏期假手術(shù)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），表明全腦缺血可引起大鼠空間學(xué)習(xí)能力受損。益氣聰明湯加味不同給藥組從第2次開(kāi)始其逃避潛伏期與模型組比較呈現(xiàn)縮短趨勢(shì)，尤其以高劑量治療組逃避潛伏期減少明顯，表明益氣聰明湯加味具有改善模型大鼠空間學(xué)習(xí)能力作用。見(jiàn)表1。

大鼠連續(xù)進(jìn)行5天定位航行訓(xùn)練后，第6天撤去安全平臺(tái)進(jìn)行空間探索試驗(yàn)。各組大鼠1 min探索總路程無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;假手術(shù)組大鼠首次穿越平臺(tái)位置的潛伏期為（13.2±5.6）s，并且在目標(biāo)象限探索累積時(shí)間為（25.1±5.3）s，而模型組大鼠分別為（31.8±11.2）s和（16.9±4.6）s，與假手術(shù)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明全腦缺血可引起大鼠空間記憶能力受損。模型大鼠經(jīng)灌胃給與益氣聰明湯加味與多奈哌齊治療4周后，各給藥組逃避潛伏期

與模型組比較有減少趨勢(shì)，同時(shí)目標(biāo)象限時(shí)間有增加趨勢(shì)，其中以多奈哌齊組和高劑量組具有顯著性差異。見(jiàn)表2。

3 討 論

3.1 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)記憶能力

Morris水迷宮是嚙齒類(lèi)動(dòng)物神經(jīng)認(rèn)知模型研究中普遍公認(rèn)的工具，同時(shí)也是評(píng)價(jià)神經(jīng)遞質(zhì)、分子轉(zhuǎn)導(dǎo)通路以及藥物之間作用的手段之一。本實(shí)驗(yàn)在VD大鼠灌胃治療干預(yù)后進(jìn)行Morris水迷宮定位航行測(cè)試和空間探索實(shí)驗(yàn)測(cè)試，兩者均為評(píng)估大鼠獲取空間記憶能力的指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，VD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力顯著下降，通過(guò)益氣聰明湯加味干預(yù)可有效改善其學(xué)習(xí)記憶能力。

3.2 脾胃虛損與VD

近年來(lái)隨著腦卒中、心血管等疾病的劇增，血管性癡呆在全球發(fā)病率上升趨勢(shì)明顯[4]，在我國(guó)，VD的患病率為1.1%～3.0%。通過(guò)不斷的臨床實(shí)踐，我們發(fā)現(xiàn)VD患者除了常見(jiàn)的學(xué)習(xí)、記憶能力的改變外，多包括有神疲意散、少氣懶言，四肢無(wú)力，困倦少食的特點(diǎn)，遣方立藥中結(jié)合補(bǔ)益后天、提升中氣之品，每每可以取得良效。特別是早期的癡呆患者，補(bǔ)益脾胃，使得清陽(yáng)上升，榮養(yǎng)腦絡(luò);重鎮(zhèn)潛降，濁陰下行，浮陽(yáng)不升，腦絡(luò)清明;兼化瘀通絡(luò)逐痰貫穿，可使中州之土無(wú)犯，至高之陽(yáng)不損，經(jīng)絡(luò)之氣無(wú)堵，血脈之血無(wú)瘀。在臨床的病機(jī)分析中，患者尚有心理上的障礙，往往伴有情緒的不暢和抑郁，若適當(dāng)加以疏肝活絡(luò)，潛降重鎮(zhèn)之品，多獲良效。據(jù)此我們對(duì)VD的病機(jī)加以完善，認(rèn)為其病理基礎(chǔ)應(yīng)該是清陽(yáng)不升，濁陰不降，脈絡(luò)瘀阻，氣絡(luò)不寧，在理論

上和實(shí)踐上進(jìn)行了有效補(bǔ)充，揭示了VD病機(jī)變化的復(fù)雜性。

3.3 益氣聰明湯加味防治VD

益氣聰敏湯加味，由益氣聰明湯、不忘方聯(lián)合水蛭組成，益氣聰明湯是金元時(shí)期著名醫(yī)家李東垣益氣升陽(yáng)的代表方劑，現(xiàn)代已有學(xué)者[5]用于VD治療并獲得較好療效。不忘方源自《備急千金要方》，具有補(bǔ)腎養(yǎng)心益志之功效。方中人參、黃芪甘溫以補(bǔ)脾胃，甘草甘緩以和脾胃，葛根、升麻、蔓荊輕揚(yáng)升發(fā)，能入陽(yáng)明，鼓動(dòng)胃氣，上行頭目，中氣既足，清陽(yáng)上升，白芍?jǐn)筷幒脱?，黃柏補(bǔ)腎生水，菖蒲，茯苓，茯神，健脾開(kāi)竅醒神化痰，兩方聯(lián)合水蛭，可升清陽(yáng)降濁陰，化痰通絡(luò)，兼具補(bǔ)脾、補(bǔ)腎、平肝之功，使精氣上行充養(yǎng)清竅，改善學(xué)習(xí)記憶能力。

參考文獻(xiàn)

[1] 吳江，賈建平，崔麗英，等.神經(jīng)病學(xué)[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：190.

[2] BLACK S.Vascular cognitive impairment：epidemiology，subtypes，diagnosis and management[J].JR Coll Physicians Edinb，2011，41（1）：49.

[3] 劉利兵.實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)[M].西安：第四軍醫(yī)大學(xué)出版社，進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)，2009：362-363.

本文編輯：劉欣悅