血站的核酸檢測與酶免檢測平行篩查血液分析

奚華新

（江蘇省無錫市紅十字中心血站，江蘇 無錫 214021）

輸血傳播病原體篩查可確保血液安全，為預(yù)防以及控制輸血疾病傳染的一種安全手段。就目前而言，通常選擇酶聯(lián)免疫方法對梅毒血清、HIV以及HCV進行檢測，此篩查方法雖然可降低疾病傳播風(fēng)險，但是存在局限性[1]。核酸擴增技術(shù)敏感性和特異性較高，可將酶聯(lián)免疫方法檢測窗口期縮短，確保血液制品安全。此次研究探究血液分析中核酸檢測與酶免檢測平行篩查血液在血站的應(yīng)用效果，內(nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機抽取本中心血站進行無償獻血者12000例，獻血者均為健康人員，采集獻血者血樣，并留有兩種試劑管，即NAT和ELISA。血液標(biāo)本在采集后放置在2～8攝氏度冰箱中，4小時后在室溫下進行離心，時間為20分鐘，離心后放置在2～8攝氏度環(huán)境，24小時內(nèi)實施NAT檢查。

1.2 方法

設(shè)備。ELISA檢測過程中選擇設(shè)備為選擇全自動加樣設(shè)備以及酶免分析設(shè)備，分別為Hamilton Star和FAME；核酸在檢測時選擇Hamilton Star 全自動混樣儀以及核酸擴增檢測儀，經(jīng)過混樣以及數(shù)據(jù)管理服務(wù)其連接成功的血液核酸血篩平臺，Cobas Amp Li Prep 核酸提取儀，實時熒光定量PCR以及低溫大容量離心機。

試劑。檢測試劑分別為批號200909051、200912011、201003041的HBsAg檢測試劑（上海科華生物工程股份有限公司），批號C20121221、C20130305、C20130406等抗-HCV檢測試劑盒（北京萬泰生物藥業(yè)有限公司），批號201212031、201303021、201304011）等抗-HIV1/2檢測試劑盒（上?？迫A生物工程股份有限公司），批號P011692、R01529、R01528 NAT試劑（美國羅氏診斷），乙肝血清學(xué)補充試劑為美國雅培公司生產(chǎn)。

1.3 評估指標(biāo)

按照試劑盒進行操作實施核酸檢測與酶免檢測，如果血液標(biāo)本HBsAg/抗-HCV/抗-HIC1/2試劑呈現(xiàn)陽性，則說明結(jié)果陽性，如出現(xiàn)陰性則說明為陰性結(jié)果，如反應(yīng)表現(xiàn)為陰性，或一種試劑檢測結(jié)果表現(xiàn)為陽性應(yīng)采用NAT檢測[2]。

NAT檢測。依據(jù)操作設(shè)備和試劑盒說明書實施，如果一個Pool呈現(xiàn)陽性，應(yīng)予以拆分，如陰性結(jié)果則出現(xiàn)混陽產(chǎn)生陽性，拆分后陰性；陽性結(jié)果表現(xiàn)為混陽出現(xiàn)陽性，拆分同樣出現(xiàn)陽性。

核酸檢測后如果出現(xiàn)陽性結(jié)果，需要對其進行分項定量檢測和乙肝血清試驗，檢測結(jié)果出現(xiàn)陽性者需要檢測HBV DNA、HCVRNA和HIV RNA 檢測。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

本次研究涉及數(shù)據(jù)在計算時均采用SPSS 21.0統(tǒng)計學(xué)軟件包，結(jié)果均以計數(shù)資料呈現(xiàn)，組間數(shù)據(jù)經(jīng)過對比后如P＜0.05，則形成統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 核酸檢測

12000例標(biāo)本經(jīng)過ELISA檢測后陽性900例為陽性標(biāo)本，陽性率為7.5%，經(jīng)過ELISA篩查HBsAg、抗-HCV和抗-HIV-1/2無反應(yīng)性及僅1種試劑為反應(yīng)性為11000例標(biāo)本，檢測后50例為陽性標(biāo)本，陽性率為0.45%。

2.2 分項定量檢測

分項定量檢測50例陽性標(biāo)本，定量檢測35例結(jié)果呈現(xiàn)HBV DNA為陽性（70%）。

2.3 乙肝血清學(xué)試驗

50例NAT檢測結(jié)果陽性標(biāo)本ELISA檢測確定陽性標(biāo)本為40例（80%），對比其檢測結(jié)果和分項定量檢測，組間對比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討 論

NAT（核酸擴增檢測方法）為直接經(jīng)過分子診斷技術(shù)檢測病原體核酸，其中包含三種步驟，即檢測、擴增以及核酸提取。因為病毒抗原以及抗體蛋白結(jié)構(gòu)產(chǎn)生改變，在窗口期階段發(fā)生漏檢，對于核酸擴增檢測而言，其特異性以及敏感性較高，并且出現(xiàn)自動化，感染病毒后數(shù)天能夠?qū)?biāo)本中少量病毒核酸進行檢測，以此縮短窗口期，降低由于漏診出現(xiàn)輸血后病毒感染發(fā)生率[3-4]。酶聯(lián)免疫法使得抗原體或者抗體和酶連接，從而產(chǎn)生酶標(biāo)抗原或抗體，在保留免疫活性的同時將酶活性進行保留。在實施檢測時將其中的抗體或抗原以及酶標(biāo)抗原或者抗體依據(jù)步驟和固相載體表面出現(xiàn)的抗原形成反應(yīng)。通過洗滌分開固相載體上產(chǎn)生的抗原抗體復(fù)合物和相關(guān)物質(zhì)，最終在固相載體上的酶量和標(biāo)本受檢物質(zhì)結(jié)合，并形成相應(yīng)的比例。因為酶催化頻率較高，將反應(yīng)效果放大，使得檢測方法具有較高的敏感度。

本次研究主要分析核酸檢測與酶免檢測平行篩查血液在血站的應(yīng)用效果，經(jīng)過分析后可知通過ELISA對篩查HBsAg、 抗-HCV 和抗-HIV-1/2 無反應(yīng)性及僅1種試劑為反應(yīng)性為11000例標(biāo)本，檢測結(jié)果為50例陽性（0.45%），實施分項定量檢測，35例定量檢測HBV DNA為陽性，陽性率70%，ELISA檢測確定陽性標(biāo)本為40例（80%），對比其檢測結(jié)果和分項定量檢測，組間對比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。由此能夠看核酸擴增檢測方法具有較高的靈敏度，縮短病毒檢測的窗口期，對隱匿性HBV感染進行有效篩查。35例定量檢測HBV DNA為陽性的原因大致如下：由于工作人員操作錯誤致使假陽性結(jié)果產(chǎn)生，或者在送往檢查的過程中血樣運輸以及保存異常，例如運輸時間、環(huán)境溫度過高會對核酸物質(zhì)分解，此外血樣留存時由于血漿病毒顆粒分布不均勻病毒，改變了其病毒濃度，使得在檢測過程中影響檢測結(jié)果[5]。

綜上所述，核酸檢測與酶免檢測平行篩查兩種方法具有互補性，能夠降低血液疾病傳播的風(fēng)險，避免病毒性疾病的產(chǎn)生。