王艷華

弓形蟲(chóng)是一種專(zhuān)性細(xì)胞寄生原蟲(chóng)，具有廣泛的宿主群并在世界范圍內(nèi)流行，引起人獸共患寄生蟲(chóng)病[1]。弓形蟲(chóng)作為一種機(jī)會(huì)感染因子，可致免疫功能低下者嚴(yán)重感染甚至死亡。弓形蟲(chóng)病也是影響人類(lèi)優(yōu)生優(yōu)育的一個(gè)重要病原體。孕婦感染弓形蟲(chóng)后無(wú)論有無(wú)臨床癥狀，都可發(fā)生母胎垂直感染，導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎及現(xiàn)先天性缺陷等。家畜感染弓形蟲(chóng)可造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，并成為潛在的人體感染來(lái)源。

弓形蟲(chóng)主要借助于蟲(chóng)體分泌蛋白，驅(qū)動(dòng)蟲(chóng)體入侵宿主細(xì)胞。分泌這些蛋白的細(xì)胞器主要包括微線體(MICs)、棒狀體(ROPs)和致密顆粒(GRAs)等。MICs在弓形蟲(chóng)識(shí)別、附著和入侵宿主細(xì)胞過(guò)程中起重要作用[2]，在蟲(chóng)體與宿主細(xì)胞接觸早期，MICs最先從速殖子頂端分泌，通過(guò)識(shí)別宿主細(xì)胞膜上的受體進(jìn)行粘附；隨之ROPs分泌到宿主細(xì)胞膜的棒狀體頸部蛋白(RONs)與MICs的頂膜抗原1(AMA1)形成移動(dòng)連接。排放到胞質(zhì)中的ROPs與宿主細(xì)胞相互作用，形成納蟲(chóng)空泡(PV)。最后，GRAs修飾納蟲(chóng)空泡，以便于蟲(chóng)體獲取在細(xì)胞內(nèi)存活和復(fù)制所需的營(yíng)養(yǎng)。弓形蟲(chóng)入侵宿主細(xì)胞是由多種蛋白介導(dǎo)完成的。

目前，許多抗原被確定為候選疫苗，但是其免疫力和保護(hù)期有限。因此，選擇合適的抗原是設(shè)計(jì)安全有效疫苗的關(guān)鍵[3]。疫苗保護(hù)效果除了抗原本身外，佐劑以及遞送系統(tǒng)等都影響疫苗誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答。弓形蟲(chóng)感染期間恰當(dāng)?shù)目乖T導(dǎo)的持久免疫保護(hù)起著至關(guān)重要的作用[4]。越來(lái)越多的證據(jù)表明，某些蟲(chóng)體效應(yīng)分子具有致病性，這些分子成為誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答的重要分子。此外，階段特異性抗原可誘導(dǎo)強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)，對(duì)弓形蟲(chóng)感染產(chǎn)生階段性保護(hù)。因此，本文就弓形蟲(chóng)各階段表達(dá)的高致病性和強(qiáng)免疫原性的抗原進(jìn)行綜述。

1 弓形蟲(chóng)表面抗原

弓形蟲(chóng)表面最先接觸宿主細(xì)胞，主要參與吸附、信號(hào)傳導(dǎo)、入侵、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)及宿主免疫應(yīng)答，被作為主要的抗原進(jìn)行研究。弓形蟲(chóng)表面抗原具有診斷和疫苗的雙重潛在價(jià)值。弓形蟲(chóng)表面多以糖磷脂?；问藉^定在細(xì)胞膜上，抗原有40種左右，具有其特異性。除SAG4外，目前已知的多種弓形蟲(chóng)表面抗原均屬于SRS(SAG1-related sequence)蛋白超家族。SRS家族分為SAG1樣和SAG2樣序列家族2個(gè)主要類(lèi)群。該家族由161個(gè)SRS編碼，組成20種以上結(jié)構(gòu)相關(guān)但抗原性不同的蟲(chóng)體表面蛋白[5]。其中SRS8、SRS38A、SRS42和SRS52A蛋白在各期中的表達(dá)情況及其功能還有待于進(jìn)一步研究。

表面蛋白在裂殖子中的表達(dá)顯著高于速殖子中。SAG1是速殖子期特異性蛋白，在弓形蟲(chóng)不同蟲(chóng)株中高度保守，并表現(xiàn)出高致病性并誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答。SAG1影響速殖子與宿主受體的結(jié)合和蟲(chóng)體對(duì)宿主細(xì)胞的入侵[6]。SAG1與蟲(chóng)株的毒力有關(guān)，強(qiáng)毒株入侵宿主細(xì)胞過(guò)程中高表達(dá)SAG1。SAG1可能是決定蟲(chóng)株毒力的重要因素之一。SAG1能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG、IgM及多種細(xì)胞因子，并具有很好的抗原性和免疫原性[7]，是弓形蟲(chóng)疫苗的重要候選抗原。

SAG2能被感染者血清識(shí)別，急性感染者血清與SAG2的結(jié)合強(qiáng)于慢性感染者的血清?？筍AG2的抗體能阻止弓形蟲(chóng)黏附宿主細(xì)胞表面入侵宿主細(xì)胞。SAG2家族的SAG2B、SAG2C和SAG2D均有很高的同源性。SAG2B僅在速殖子階段表達(dá)，而SAG2C和SAG2D僅在緩殖子階段表達(dá)。SAG2A可用作弓形蟲(chóng)感染急性期檢測(cè)的指標(biāo)，SAG 2C，SAG D，SAG X和SAG Y對(duì)于維持蟲(chóng)體在腦內(nèi)持續(xù)感染起到重要作用[5，8]。它們被認(rèn)為是包囊形成的標(biāo)志。

SAG3可能通過(guò)結(jié)合唾液酸化的糖復(fù)合物介導(dǎo)弓形蟲(chóng)的入侵，利于蟲(chóng)體增殖，參與蟲(chóng)體入侵和增殖。SAG3在速殖子和緩殖子中均表達(dá)，具有致病性和較強(qiáng)的免疫原性。SAG4可引起機(jī)體早期細(xì)胞及體液免疫應(yīng)答，抗原性很強(qiáng)。SAG5比SAG1具有更強(qiáng)的免疫原性。SAG 5A不在RH株速殖子中表達(dá)，SAG 5B和SAG 5C在速殖子和緩殖子均有表達(dá)。SAG 5D表達(dá)僅見(jiàn)于速殖子，且具有高致病性和免疫原性。SAG 5E是反轉(zhuǎn)錄假基因。各種表面抗原特性見(jiàn)表1。

表1 表面抗原在弓形蟲(chóng)各期中的表達(dá)
Tab.1 Expression ofToxoplasmaSRSs in various stages of life cycle

表面抗原速殖子緩殖子子孢子裂殖子致病性免疫原性參考文獻(xiàn)SAG 1+---①①[7,9]SRS 1+-----[9]SRS 2+-----[10]SRS 3+-----[9]SRS 9-+----[5]SRS 16-+----[9]SRS 16B+-----[11]SRS 20A+-----[10]SRS 22A---+--[11]SRS 22B---+--[11]SRS 27B---+--[11]SRS 28--+---[12]SRS 29A+-----[11]SRS 35A+-----[11]SRS 35B+-----[11]SRS 36C+-----[11]SRS 36D+-----[11]SRS 36E+-----[11]SRS 42------[10]SRS 44+-----[11]SRS 67+-----[11]BSR 4-+-+--[11]SAG 2A+-----[8]SAG 2B+-----[8]SAG 2C-+----[5,8]SAG 2D-+----[5,8,13]SAG 2X-+----[5,8]SAG 2Y-+----[5,8]SAG 3++--①①[14]SAG 4A-+----[10]SAG 4B-+----[10]SAG 5A++---①[15]SAG 5B++----[15,16]SAG 5C++----[15,16]SAG 5D+---①①[17]SAG 5E+-----[17]

①代表有致病性或免疫原性。

2 微線體蛋白

微線體蛋白(MICs)在蟲(chóng)體頂端與宿主細(xì)胞膜接觸早期分泌。目前，已知至少20余種MICs，包括MIC1-MIC12、AMA1、M2AP、PLP1、ROM1、SPATR、SUB1和TLN4[18]。其中8種(TgMIC1-4和TgMIC6-9)含有類(lèi)似真核細(xì)胞黏附分子的不同黏附結(jié)構(gòu)域。弓形蟲(chóng)入侵的宿主細(xì)胞類(lèi)型廣泛。由于蟲(chóng)體利用自身的肌動(dòng)蛋白-肌球蛋白系統(tǒng)進(jìn)入宿主細(xì)胞。MICs不僅對(duì)宿主細(xì)胞的入侵至關(guān)重要，而且對(duì)于滑動(dòng)運(yùn)動(dòng)也是至關(guān)重要的。上述黏附相關(guān)結(jié)構(gòu)域在弓形蟲(chóng)入侵宿主過(guò)程中結(jié)合宿主細(xì)胞表面受體和糖類(lèi)，黏附宿主細(xì)胞驅(qū)動(dòng)蟲(chóng)體滑行運(yùn)動(dòng)。此外，微線體蛋白的黏附相關(guān)結(jié)構(gòu)域還促進(jìn)微線體蛋白復(fù)合物的形成，穩(wěn)定地存在于蟲(chóng)體表面，增加其黏附作用。MICs復(fù)合物在毒力和致病性方面發(fā)揮了重要的作用。越來(lái)越多的關(guān)于MICs的研究表明，MICs是誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的有效候選疫苗。

弓形蟲(chóng)MIC3，MIC4和MIC13在速殖子，緩殖子和子孢子階段均表達(dá)。MIC1、MIC2、MIC2AP、MIC5、MIC7、MIC10和MIC11七種MIC在速殖子和緩殖子中表達(dá)。MIC10在速殖子中的表達(dá)水平高于緩殖子中的表達(dá)水平[19]。其它MICs抗原僅在一個(gè)階段中表達(dá)。另外，致病性和免疫原性研究表明MIC1、MIC3、MIC4和MIC6具有高致病性，而MIC3、MIC4、MIC5、MIC6、MIC8和MIC13表現(xiàn)出強(qiáng)免疫原性。其中MIC3研究比較廣泛，MIC3被認(rèn)為是最重要的疫苗候選抗原之一。此外，MICs抗原還是良好的診斷標(biāo)記。MICs抗原不僅用于普通的血清學(xué)檢測(cè)，最近研究發(fā)現(xiàn)，MICs抗原(MIC1、MIC3、MIC4和MIC6)還可用于基于檢測(cè)IFN分泌的細(xì)胞免疫反應(yīng)診斷方法，來(lái)監(jiān)測(cè)感染期間免疫狀態(tài)[20]。MICs特征見(jiàn)表2。

3 棒狀體蛋白

棒狀體蛋白(ROPs)有助于蟲(chóng)體主動(dòng)入侵宿主細(xì)胞，并參與納蟲(chóng)泡的形成。納蟲(chóng)泡是一種特殊的細(xì)胞內(nèi)小泡，蟲(chóng)體在其內(nèi)部繁殖，可避免宿主清除。ROPs對(duì)3個(gè)階段的蟲(chóng)體入侵及在宿主細(xì)胞內(nèi)的存活起重要作用。一般情況下，ROPs約占弓形蟲(chóng)總量1%～30%，與蟲(chóng)株的毒力和致病性密切相關(guān)[39]，ROPs是弓形蟲(chóng)疫苗的候選分子。ROP1、ROP2、ROP21和ROP42在弓形蟲(chóng)感染各階段都表達(dá)。ROP2具有高致病性和免疫原性。雖然ROP21不是速殖子入侵所必需，但它在由包囊引起的慢性感染過(guò)程中起著重要作用[40]。此外，ROP42在緩殖子中高度表達(dá)[11]。ROP5、ROP16和ROP17在弓形蟲(chóng)速殖子和緩殖子2個(gè)感染階段表達(dá)，并顯示出高致病性和免疫原性。盡管ROP18僅在速殖子階段表達(dá)，但它具有高致病性并能誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答。表3詳細(xì)地列出了ROP研究結(jié)果。

表2 微線體抗原特性
Tab.2 Characteristic of MICs

微線體蛋白速殖子緩殖子子孢子裂殖體致病性免疫原性參考文獻(xiàn)MIC 1++--①①[21]MIC 2++--①①[22]MIC 2AP++---①[22]MIC 3++++①①[23] MIC 4++++①①[24]MIC 5++--①①[25]MIC 6+---①①[26]MIC 7-+----[27]MIC8+---①①[28]MIC 9-+----[27]MIC 10++----[3]MIC 11++--①①[29,30]MIC 12---+--[11]MIC 13+++-①①[10]MIC 16+-----[11,31]MIC 17A---+--[11]MIC 17B---+--[11]MIC 17C---+--[11]AMA 1+-----[3]PLP1 +---①①[32,33]TLN4+-----[34]ROM1 +-+-①①[35,36]SUB1+---①-[37]SPATR--+-①-[38]

①代表有致病性或免疫原性。

4 棒狀體頸蛋白(RONs)

RONs的分泌受微線體調(diào)控。目前，已知的RONs包括RON1-5、RON8-9、RON2-L1、RON2-L2和RON4-L1，部分RONs(RON2、RON4、RON5、RON8)與微線體蛋白AMA1結(jié)合，形成“運(yùn)動(dòng)連接” (MJ)以便蟲(chóng)體入侵宿主細(xì)胞。MJ也是一分子篩，限制宿主質(zhì)膜蛋白進(jìn)入新生納蟲(chóng)泡，使納蟲(chóng)泡免于融合并保護(hù)蟲(chóng)體免受溶酶體破壞。RONs復(fù)合體2/4/5/8在入侵過(guò)程中定位于MJ，為宿主的免疫應(yīng)答提供了一個(gè)穩(wěn)定的靶點(diǎn)。在侵入開(kāi)始時(shí)，預(yù)先形成MJ的RONs復(fù)合物被注入宿主細(xì)胞，RON2跨越宿主質(zhì)膜，充當(dāng)膜錨，而RON 4/5/8定位于其胞質(zhì)表面。RON8不受ron5基因敲除的影響，但RON5缺失可導(dǎo)致弓形蟲(chóng)分泌的RON2的完全降解和RON4的失活，蟲(chóng)體無(wú)法入侵新的宿主細(xì)胞。另外，RON5缺失時(shí)，ROPs不能形成胞外空泡，完整的MJ復(fù)合物是ROPs分泌的先決條件[65]。RON5充當(dāng)護(hù)航蛋白，確保MJ核心復(fù)合物完整和運(yùn)輸，RON5在MJ RON復(fù)合物的組織結(jié)構(gòu)中起關(guān)鍵作用。雖然RON2和RON5對(duì)于MJ是必不可少的成分，RON8和RON4是MJ非必要成分，但RON8缺失會(huì)導(dǎo)致入侵力減少70%，納蟲(chóng)泡膜(PVM)不能完整閉合[65]。

表3 棒狀體抗原特性
Tab.3 Characteristic of Rops

棒狀體蛋白速殖子緩殖子子孢子裂殖體致病性免疫原性參考文獻(xiàn)ROP 1+++--①[41]ROP 2+++-①①[42]ROP 3+---①-[43]ROP 4++--①-[43,44]ROP 5++--①①[45,46]ROP 6+---①-[47]ROP 7++--①-[48]ROP 8+----①[49]ROP 9+-+--①[50,51]ROP 13+----①[52]ROP 16++--①①[53,54]ROP 17++--①①[55]ROP 18+---①①[56]ROP 19++---①[57,58]ROP 20+-----[59]ROP 21++++--[40]ROP 23+-----[11]ROP 26+-----[60]ROP 27 -++---[40]ROP 28+-+---[40,60]ROP 29 +++---[60]ROP 30+-----[40]ROP 32---+--[61]ROP 33---+--[61]ROP 35 ++----[61]ROP 36---+--[61]ROP 38+---①①[62]ROP 39+-----[11]ROP 40+-----[11]ROP 41+-----[11]ROP 42++++--[11]ROP 43---+--[11]ROP 44+-----[11]ROP 46+--+--[11]ROP 48++---①[63]ROP 54----①①[64]

①代表有致病性或免疫原性。

最近研究顯示，RON4-L1是弓形蟲(chóng)MJ復(fù)合體的另一新成員。RON4-L1與RON4具有一定的序列相似性，以宿主細(xì)胞膜的胞質(zhì)面為靶點(diǎn)。RON4-L1敲除株弓形蟲(chóng)對(duì)小鼠的致死作用降低。與RON8相似，RON4-L1是一種球蟲(chóng)特異性蛋白，在無(wú)RON2、RON4和RON5的情況，不影響RON4-L1運(yùn)輸?shù)組J[66]。由于弓形蟲(chóng)、新孢子蟲(chóng)等球蟲(chóng)具有非常廣泛的宿主，這些豐富的MJ蛋白可能有利于蟲(chóng)體入侵多種類(lèi)型細(xì)胞。RON2-L1、RON2-L2在子孢子或緩殖子中高表達(dá)，RON4-L1在速殖子中大量表達(dá)，也在裂殖體表達(dá)。RON5在弓形蟲(chóng)所有3個(gè)階段都表達(dá)，具有部分致病性和強(qiáng)免疫原性。RON4在裂殖子中表達(dá)[61]。RON4 DNA疫苗以及RON4重組蛋白疫苗抗弓形蟲(chóng)慢性感染(包囊灌胃)的免疫保護(hù)效果較弱[67]。RON9和RON10在蟲(chóng)體內(nèi)通過(guò)二硫鍵形成復(fù)合物。敲除ron9基因，會(huì)使RON10在棒狀體內(nèi)錯(cuò)誤定位；敲除ron10基因，會(huì)影響RON9分泌，但棒狀體形態(tài)、入侵能力、復(fù)制(體外)以及毒力都不會(huì)受影響[68]。

5 致密顆粒蛋白 (GRAs)

GRAs分子量一般為20-50 kDa，在入侵過(guò)程中不起重要作用，但與蟲(chóng)體在宿主細(xì)胞內(nèi)存活和復(fù)制有關(guān)。GRAs分別從蟲(chóng)體頂端、側(cè)面及末端分泌進(jìn)入納蟲(chóng)泡，最終與PVM或膜內(nèi)微管網(wǎng)絡(luò)關(guān)聯(lián)，完成對(duì)納蟲(chóng)泡的修飾，抵抗宿主細(xì)胞溶酶體的酸化和裂解，隔離宿主的內(nèi)吞噬作用，確保蟲(chóng)體在細(xì)胞內(nèi)的存活與增殖。目前已鑒定出20余種GRAs，其中若干個(gè)GRAs為分泌排泄抗原，它們誘導(dǎo)抗體依賴(lài)和細(xì)胞調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)[69]。除了NTPase的2個(gè)同工酶，這些蛋白質(zhì)序列同源性很低，但它們都含信號(hào)序列。蟲(chóng)體通過(guò)更新膜分泌及可溶蛋白分泌的形式修飾調(diào)理納蟲(chóng)泡結(jié)構(gòu)[69-70]。

GRA1、GRA5、GRA6、GRA8和GRA14在弓形蟲(chóng)3個(gè)感染階段都表達(dá)。GRA1由速殖子，子孢子和緩殖子表達(dá)[12]。卵囊中GRA8的表達(dá)水平與速殖子相當(dāng)，但是高于緩殖子[10]。此外，卵囊中GRA14的表達(dá)高于速殖子和緩殖子。GRA23在慢性感染期間的抗原性強(qiáng)于急性感染[3]。針對(duì)GRA1和GRA5的抗體是慢性感染的標(biāo)志物，而GRA6，GRA7和GRA8被報(bào)道為急性感染的標(biāo)志物。GRA4，GRA10，GRA12和GRA15在速殖子和緩殖子中均有表達(dá)，具有較高的致病性和較強(qiáng)的免疫原性。重組GRA2 、GRA5、GRA14、GRA17和GRA23具有較好的免疫原性[71-72]。表4詳細(xì)地列出了GRA研究結(jié)果。

表4 致密顆粒抗原GRAs特性
Tab.4 Characteristic of GRAs

致密顆粒蛋白速殖子緩殖子子孢子裂殖體致病性免疫原性參考文獻(xiàn)GRA 1+++-①①[73]GRA 2++---①[74]GRA 3+---①-[75]GRA 4++---①[76]GRA 5+++--①[77]GRA 6+++--①[78]GRA 7++-+-①[79]GRA 8+++--①[10,61]GRA 9++----[80]GRA 10++---①[81]GRA 11A---+--[11]GRA 11B---+--[11]GRA 12++-+①①[61,82]GRA 14+++-①①[71]GRA 15++--①①[61]GRA 16++----[11,3]GRA 17+---①①[83]GRA 19+-----[3]GRA 20+-----[3]GRA 21 +-----[3]GRA 22+-----[84]GRA 23 ++----[72]GRA 24+---①①[85,86]

①代表有致病性或免疫原性。

6 菱形體蛋白(ROMs)

弓形蟲(chóng)含有6個(gè)ROMs。菱形體蛋白可識(shí)別MICs的跨膜區(qū)，并對(duì)其進(jìn)行蛋白水解，使MICs的N端片段釋放到介質(zhì)中并激活MICs。ROM1，ROM4和ROM5顯示出高致病性并誘導(dǎo)強(qiáng)烈的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答。ROM4參與MIC2、AMA1和MIC3表面粘附素的加工。抑制ROM4會(huì)導(dǎo)致MIC2分泌減少，同時(shí)蟲(chóng)體表面MIC2和其它粘連蛋白表達(dá)增加。抑制ROM4會(huì)破壞蟲(chóng)體正?；?，導(dǎo)致蟲(chóng)體后端發(fā)生旋轉(zhuǎn)。缺乏ROM4的蟲(chóng)體能很好地與宿主細(xì)胞粘附，但喪失了頂端定向能力，大多數(shù)蟲(chóng)體不能產(chǎn)生移動(dòng)連接，因此入侵能力嚴(yán)重削弱。ROM4參與細(xì)胞表面蛋白的脫落。ROM4下調(diào)會(huì)破壞弓形蟲(chóng)高效的細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和破壞對(duì)侵襲宿主細(xì)胞起重要作用的頂后部黏附素[87]。ROM1、ROM4、ROM5在速殖子階段表達(dá)，而ROM2、ROM3在卵囊階段表達(dá)。雖然ROM5和ROM4在速殖子階段都定位于細(xì)胞表面，但ROM5主要位于蟲(chóng)體的后部，只有ROM5能夠裂解MIC粘附素，表明它可能提供了侵襲所必需的關(guān)鍵蛋白酶活性[88]。

7 鈣依賴(lài)蛋白激酶(CDPKs)

目前，因?yàn)镃DPKs在鈣信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)中起重要作用，CDPKs家族成為關(guān)注的焦點(diǎn)。CDPK在植物、纖毛蟲(chóng)和頂復(fù)門(mén)蟲(chóng)體中普遍存在。弓形蟲(chóng)含有14個(gè)CDPKs，這些酶在弓形蟲(chóng)生活史包括入侵細(xì)胞、退行、滑動(dòng)和復(fù)制過(guò)程中起重要作用[89]。弓形蟲(chóng)CDPKs家族有14個(gè)成員，其中CDPK1、CDPK2、CDPK3、CDPK5和CDPK6具有良好的免疫原性，被認(rèn)為是有希望的候選疫苗。CDPK2對(duì)支鏈淀粉代謝起著關(guān)鍵作用，CDPK2的缺失可導(dǎo)致支鏈淀粉聚合物的過(guò)度積累，并導(dǎo)致蟲(chóng)體出現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)缺陷而無(wú)法形成包囊。由于哺乳動(dòng)物不存在CDPKs，CDPKs家族被認(rèn)為是一種潛在的抗弓形蟲(chóng)藥物的靶標(biāo)和疫苗候選抗原。最近報(bào)道，CDPK2與弓形蟲(chóng)緩殖子的形成相關(guān)，缺失CDPK2基因的弓形蟲(chóng)在緩殖子階段超微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變[89]，導(dǎo)致活力喪失，表明CDPK2可以作為一種有潛力的候選疫苗[90]。

8 弓形蟲(chóng)其它抗原

卵囊壁蛋白在弓形蟲(chóng)的子孢子感染階段表達(dá)。CCP5A是一種子孢子特異性孢壁蛋白，其作為識(shí)別動(dòng)物和人類(lèi)感染的新標(biāo)記可用于診斷和流行病學(xué)研究[91]?；|(zhì)抗原1(MAG1)是急性感染的特殊標(biāo)志物，可用于弓形蟲(chóng)感染早期檢測(cè)。弓形蟲(chóng)烯醇化酶2(enolase， ENO2)在速殖子和裂殖子中表達(dá)，在蟲(chóng)體代謝中起重要作用，具有高致病性和免疫原性。ENO2可能與弓形蟲(chóng)毒力相關(guān)，參與多種細(xì)胞正?；顒?dòng)。弓形蟲(chóng)ENO2序列具有高度保守性，與其他寄生蟲(chóng)一致性達(dá)58.9%～98.9%，序列中金屬、底物結(jié)合基序及烯醇酶標(biāo)簽(LLLKVNQIGSVTES)完全一致。ENO2在37 ℃時(shí)活性達(dá)到最大，具有熱穩(wěn)定性(25 ℃～45 ℃)，這一特性有利于在不同溫度下促進(jìn)與感染相關(guān)的過(guò)程[92]。

9 熱休克蛋白(HSPs)

熱休克蛋白(HSPs)為分子伴侶，與抗原肽形成復(fù)合物通過(guò)受體與抗原遞呈細(xì)胞(APC)相互作用，刺激APC分泌炎癥細(xì)胞因子，并介導(dǎo)樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)的成熟。這些特性使得HSPs成為有待開(kāi)發(fā)預(yù)防癌癥和傳染病的新一代預(yù)防疫苗。HSP70是所有生物體中最保守的蛋白質(zhì)，它是多種病原體引起感染的主要免疫原。HSP70能被DCs和自然殺傷細(xì)胞(NKs)識(shí)別，引發(fā)固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答。HSP70是弓形蟲(chóng)速殖子特異性毒力分子，在宿主死亡前迅速增加。它通過(guò)抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮(NO)，下調(diào)宿主的免疫防御[93]。HSP70具有致病性和免疫原性特征[94]。HSP70基因疫苗不僅適用于包括貓、豬和羊在內(nèi)的家畜，而且在未來(lái)的研究中也將適用于人類(lèi)。HSP30是一種小分子熱休克蛋白，緩殖子階段特異表達(dá)，刺激速殖子轉(zhuǎn)化為緩殖子[92]，HSP30基因疫苗可以干擾緩殖子形成[95]。

10 展 望

弓形蟲(chóng)生活史復(fù)雜，抗原成分具有發(fā)育階段的特異性，致使階段特異性抗原的疫苗接種只能激發(fā)階段性保護(hù)。因此，具有高致病性和免疫原性的3個(gè)階段均表達(dá)的抗原可能是疫苗免疫研究的最佳候選者，如MIC3、MIC4、MIC13、ROP2、RON5、GRA1、GRA6、GRA8和GRA14。一些在速殖子和緩殖子2個(gè)感染階段均表達(dá)的抗原，例如MIC1、MIC5、ROP5、ROP8、ROP16、ROP17、ROP19、ROP38、ROP48、RON4、ROM4、GRA2、GRA4、GRA10、GRA12、GRA15、GRA16、SAG3、SAG5A，或在某一個(gè)階段表達(dá)具有強(qiáng)力致病性和強(qiáng)免疫原性的抗原，例如ENO2、SAG1、SAG5D、HSP70、ROM1、ROM5、AMA1、ROP18、ROP13、RON2和GRA24，可用于制備雞尾酒疫苗以獲得更好的免疫結(jié)果。

此外，由于佐劑、疫苗給藥途徑、抗原劑量和抗原制備方法等許多因素影響疫苗的免疫效果，為了找到合適的候選抗原，必須對(duì)上述諸多因素做出準(zhǔn)確地選擇。其中選擇合適的佐劑對(duì)于增強(qiáng)疫苗抗原組分十分重要。因此，在動(dòng)物模型中使用標(biāo)準(zhǔn)化方案比較不同佐劑與候選抗原所引發(fā)免疫反應(yīng)的效果顯得非常重要。此外，采用弱毒株以及我國(guó)優(yōu)勢(shì)基因型蟲(chóng)株攻擊感染測(cè)試疫苗的效果，更具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

目前雖然鑒定到了很多弓形蟲(chóng)疫苗候選抗原，但仍有許多抗原需要鑒定和評(píng)估。例如卵囊壁蛋白免疫效果的研究還未見(jiàn)報(bào)道。其次，弓形蟲(chóng)抗原用于抗貓弓形蟲(chóng)感染免疫效果的研究較少。未來(lái)的研究也應(yīng)側(cè)重于設(shè)計(jì)有效和安全的雞尾酒疫苗以抵抗弓形蟲(chóng)感染。弓形蟲(chóng)許多抗原對(duì)于該寄生蟲(chóng)的致病性和免疫原性都很重要。因此，未來(lái)的研究不僅應(yīng)側(cè)重于抗原數(shù)量的選擇，也需對(duì)重組疫苗、DNA疫苗作用和最佳佐劑的選擇進(jìn)一步研究。此外，可以借助計(jì)算機(jī)模擬和生物信息學(xué)來(lái)確定針對(duì)弓形蟲(chóng)病的新候選疫苗。

利益沖突：無(wú)