李祖洪

摘 要：目的：探討酶抑制法在蔬菜農(nóng)藥殘留檢測中的作用。方法：完成樣品與對照溶液的制備后，采用乙酰膽堿酯酶對樣品與對照溶液內(nèi)殘留的有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥進行檢測。結果：白菜樣品中對酶抑制率為71.2%;番茄樣品對酶抑制率為89.2%;甘蘭樣品對酶抑制率為90.1%。根據(jù)酶抑制程度，表明3種樣品中皆含有一定的農(nóng)藥殘留。結論：運用酶抑制法能夠快速測定蔬菜農(nóng)藥殘留含量，但為了保障測定結果的準確性，應結合定性定量方式一同進行檢測。

關鍵詞：蔬菜農(nóng)藥殘留;酶抑制法;應用

近年來，頻頻發(fā)生的食品質量安全問題，使得公民安全消費意識逐步提升，對蔬菜農(nóng)藥殘留予以了更多的關注。為促進農(nóng)產(chǎn)品質量安全水平的提升，保障消費者健康，相關職能部門應當對蔬菜生產(chǎn)實施全過程農(nóng)藥管控。酶抑制法無需耗費太多成本，具備較高的準確性與靈敏度，在基層市場監(jiān)管部門農(nóng)藥殘留快速檢測中十分適用。

1 實驗方法

1.1 儀器與試劑

農(nóng)藥殘留快速檢測儀，比色瓶、移液槍、樣品超聲提取儀等。K2HPO4（無水磷酸氫二鉀）;KH2PO4（磷酸二氫鉀）;C14H6N2O8S2（二硫代二硝基苯甲酸）;NaHCO3（碳酸氫鈉）;C7H16SNI（硫代乙酰膽堿）等;蒸餾水;葉菜類蔬菜、瓜果、塊根（莖）樣品。

1.2 試劑配制

緩沖液：取KH2PO4、K2HPO4各3.23 g、11.90 g，用蒸餾水（1 000.0 mL）溶解。

顯色劑：取NaHCO3、C14H6N2O8S2各15.6 mg、160.00 g，用上述緩沖液（20.0 mL）溶解，轉入冰箱（4 ℃）。

底物：取硫代乙酰膽堿25.0 mg，用蒸餾水（3.0 mL）溶解，轉入冰箱（4 ℃）。

乙酰膽堿酯酶：以酶活性為根據(jù)，緩沖液溶解，控制3 min吸光度值變化不低于0.3，搖勻后冰箱中保存（4 ℃）。

2 檢測步驟

2.1 樣品溶液制備

擦掉蔬菜樣品表面泥土，取塊根（莖）、瓜果類蔬菜取2.00 g表皮，葉菜類蔬菜剪成大小為1cm2的碎片后取2.00 g，加入到含有10.0 mL緩沖液的提取瓶中，然后轉至多用可調(diào)速振蕩器內(nèi)，震蕩提取2 min，靜置3～5 min[1]。

浸提液顏色較淺或無色時，轉入離心管備用，待測;若顏色渾濁，吸取0.5mL至離心管并離心，上層液清澈時結束離心，做樣液，待測。

浸提液存在嚴重色素干擾時，可轉至另一提取瓶內(nèi)，根據(jù)顏色深淺加入活性炭0.10～0.50 g，轉入多用可調(diào)速振蕩器，振蕩提取5～6 min后，靜置5～10 min，吸取0.5 mL至離心管，用微型離心機離心至上層液清澈，做樣液備用（若有活性炭殘留于樣液中，需再次離心處理，保障樣液內(nèi)無活性炭殘留）。

2.2 對照溶液制備

緩沖液作對照液，待測。

2.3 測試

樣品溶液測試：試管內(nèi)移入

2.5 mL樣品提取液，并加入0.1 mL酶液、顯色劑，搖勻后在37 ℃下靜置15 min。加入底物0.1 mL，搖勻，當發(fā)生顯色反應后，向儀器比色池轉移，記錄樣品溶液持續(xù)反應3 min后的吸光度ΔAt。

對照溶液測試：試管內(nèi)移入

2.5 mL對照溶液，并依次加入0.1 mL酶液、顯色劑，其他操作同樣品溶液的測試，記錄對照溶液持續(xù)反應3 min后吸光度。

測試操作程序：在V型槽內(nèi)完成顯色劑、底物及酶試劑等的移取，移取裝置選擇多通道移液器。用移液器分別將20 μL酶加入測試微孔板內(nèi)，后加入250 μL樣品溶液或對照溶液。微孔板轉入儀器，開啟振板將酶和樣品混勻[2]。完成振板后，酶試劑與樣品溶液或對照溶液混合液持續(xù)反應10 min，將10 μL顯色劑、底物分別加入測試微孔板內(nèi)，隨后轉入儀器測量。根據(jù)面板顯示開始測量，第一列會被儀器自動視作對照溶液，樣品溶液則為其他行。完成測量后，儀器將當前對照值自動保存，后續(xù)樣品測量中無需再次測量對照。各通道樣品抑制率的計算，參照各自對照液。各通道對照測試完成后，微孔板所有孔皆可視作樣品測量，轉至儀器后，根據(jù)面板顯示開始測量。

2.4 結果

以酶被抑制程度表示結果。酶抑制率在50%以下，說明蔬菜健康，農(nóng)藥殘留量極少;酶抑制率在50%及以上，說明蔬菜內(nèi)有機磷等農(nóng)藥含量較高，重復檢驗兩次后確認結果為陽性。

此次檢測中，白菜樣品對酶的抑制率為71.2%;番茄樣品對酶的抑制率為89.2%;甘蘭樣品對酶的抑制率為90.1%。表明3種樣品中皆含有一定的農(nóng)藥殘留。

3 討論

運用酶抑制法快速測定蔬菜農(nóng)藥殘留含量，能及時了解蔬菜質量及安全性，然而該方法僅限于含有有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的蔬菜，且僅支持粗篩，檢測結果與國家標準農(nóng)藥最大殘留限量要求值不符合，獲取的檢測數(shù)據(jù)準確性也有一定不足，需結合定性定量方式一同檢測。

參考文獻

[1]丁澤鋒.基于酶抑制法的蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測研究[J].農(nóng)業(yè)技術與裝備，2019（9）：28-29，31.

[2]周琴.酶抑制法在蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測中的應用[J].河南農(nóng)業(yè)，2017（32）：53-54.