紫外分光光度法測(cè)定梔子中綠原酸含量

羅娜 王雪 黃麗佳 陳建雯 馮國(guó)華 郭亞?wèn)| 鄧亮

摘要：目的?建立梔子中綠原酸含量的測(cè)定方法。方法?采用紫外分光光度法，以60%乙醇為空白，在波長(zhǎng)329nm處測(cè)定綠原酸含量。結(jié)果?綠原酸在（2.5-15）μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（r=0.9993），回歸方程y=0.0457x+0.0005，平均加樣回收率為98.1%，RSD為2.7%。結(jié)論?紫外分光光度法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為梔子中綠原酸含量測(cè)定的方法。

關(guān)鍵詞：梔子;綠原酸;紫外分光光度法，含量測(cè)定

中圖分類號(hào)：R927.2?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?文章編號(hào)：1007-2349（2020）06-0067-03

Determination of Chlorogenic Acid in Gardenia by Ultraviolet Spectrophotometry

LUO Na1， WANG Xue1， HUANG Li-jia1， CHEN Jian-wen2， FENG Guo-hua3， GUO Ya-dong1， DENG Liang1

（1.?School of Pharmacy， Kunming Medical University and Key Laboratory of Natural Medicineand Pharmacology of Yunnan Province， Kunming 650500， China; 2.?Honghe Vocational College of Health， Mengzi 661101， China; 3.?Biomedical Engineering Center， Kunming Medical University， Kunming 650500， China）

【Abstract】Objective： To establish a method for determining the content of chlorogenic acid in gardenia.?Methods： Ultraviolet spectrophotometry was used with 60% ethanol as the blank to measure the chlorogenic acid content at a wavelength of 329 nm.?Results： Chlorogenic acid had a good linear relationship （r=0.9993） in the range of 2.5 to15 μg/mL.?Regression equation was y=0.0457x+0.0005 and the average sample recovery rate was 98.1%， and RSD was 2.7%.?Conclusion： Ultraviolet spectrophotometry is simple and accurate with good reproducibility and can be used as a method for the determination of chlorogenic acid in gardenia.

【Key words】gardenia， chlorogenic acid， ultraviolet spectrophotometry， content determination

梔子是茜草科植物山梔Gardenia jasminoides Ellis 的果實(shí)，性苦寒，具有保肝，降血糖，瀉火除煩、清熱利尿、涼血解毒之功效，梔子屬植物中含有多種化學(xué)成分，如黃酮類、環(huán)烯醚萜類、三萜類、有機(jī)酸酯類、西紅花苷類、揮發(fā)油等[1-2]。中國(guó)藥典對(duì)梔子藥材只測(cè)定梔子苷的含量[3]，綠原酸是梔子中的有效成分之一，其含量較高，具有抗氧化、清除自由基、降血脂等活性。文獻(xiàn)報(bào)道測(cè)定梔子中綠原酸含量的方法主要是高效液相色譜[4-5]，少數(shù)采用紫外分光光度法測(cè)定其含量[6]，本文用紫外分光光度法測(cè)定了不同產(chǎn)地的梔子中綠原酸含量，并進(jìn)行了系統(tǒng)的樣品提取方法學(xué)的研究。

1?儀器與試藥

1.1?儀器和試劑?紫外一可見(jiàn)分光光度計(jì)（TU1810，北京普析），超聲提取器（SK3200H，上海儀器制造廠），CP225D電子天平（德國(guó)Sartorius公司）。

綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥98%，中國(guó)食品藥品檢驗(yàn)研究院），水為純凈水，其他試劑為分析純。

1.2?樣品?梔子樣品購(gòu)自當(dāng)?shù)蒯t(yī)藥公司，經(jīng)粉碎后過(guò)100目篩。

2?方法與結(jié)果

2.1?溶液的制備

2.1.1?對(duì)照品溶液的制備?精密稱取綠原酸對(duì)照品7.5 mg于25 mL容量瓶中，加60%乙醇制成300μg/mL 的對(duì)照品溶液。

2.1.2?供試品溶液的制備?稱取干燥梔子粉末各1.0 g，放入錐形瓶中，加入60%乙醇25 mL，超聲處理25 min，放冷，過(guò)濾，濾液全部轉(zhuǎn)移于100 mL容量瓶中定容，即得供試品溶液。

2.2?吸收波長(zhǎng)的選擇及標(biāo)準(zhǔn)曲線制作?用60%乙醇分別配制梔子供試品溶液和對(duì)照品溶液。用紫外分光光度計(jì)在波長(zhǎng)為（200-400）nm進(jìn)行掃描，結(jié)果見(jiàn)圖1。綠原酸在329 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。

分別吸取不同體積的300 μg/mL 的對(duì)照品溶液用60%乙醇稀釋后得到濃度為2.5，5，7.5，10，12.5，15 μg/mL的系列對(duì)照品溶液，以60%乙醇為空白，在329 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以綠原酸濃度C（μg/mL）為橫坐標(biāo)x，吸光度A為縱坐標(biāo)y作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：y=0.0475x-0.0075，r=0.9993，表明在2.5-15 μg/mL范圍內(nèi)，綠原酸的吸光度與濃度之間有良好的線性關(guān)系。

2.3?單因素實(shí)驗(yàn)?影響提取效率的因素主要有乙醇濃度、提取時(shí)間、料液比等。

2.3.1?乙醇濃度對(duì)梔子中綠原酸提取率的影響?稱取3份梔子粉末各1.0 g，置于3個(gè)錐形瓶中，分別加入25 mL的50%、60%、70%的乙醇，超聲提取25 min，過(guò)濾，用60%乙醇稀釋定容至100 mL，適當(dāng)稀釋后在329 nm處測(cè)定吸光度，用回歸方程計(jì)算綠原酸的提取率，用50%、60%、70%的乙醇所得的綠原酸的提取率分別為1.91%，2.01%和1.92%，可見(jiàn)60%乙醇的提取效果最好。

2.3.2?提取時(shí)間對(duì)梔子中綠原酸提取率的影響?稱取3份梔子粉末各1.0 g，置于3個(gè)錐形瓶中，各加入25 mL的60%的乙醇，分別超聲提取15、25和35 min，過(guò)濾，用60%乙醇稀釋定容至100 mL，適當(dāng)稀釋后在329 nm處測(cè)定吸光度，用回歸方程計(jì)算綠原酸的提取率，測(cè)得提取時(shí)間為15 mim、25 mim和35 mim時(shí)綠原酸的提取率分別為2.16%、2.01%和2.14%，可見(jiàn)15 min的超聲時(shí)間提取效果最好。

2.3.3?料液比對(duì)梔子中綠原酸提取得率的影響?稱取3份梔子粉末各1.00 g，置于3個(gè)錐形瓶中，分別按1：20、1：25、1：30的料液比加入60%乙醇，超聲提取25 min，過(guò)濾，用60%乙醇定容至100 mL，適當(dāng)稀釋后在329 nm處測(cè)定吸光度，用回歸方程計(jì)算綠原酸的提取率，當(dāng)料液比為1：20、1：25和1：30時(shí)，綠原酸的提取率分別為1.91%、2.03%和2.01%，可見(jiàn)1：25 的料液比提取效果最好。

2.4?正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.4.1?正交試驗(yàn)的設(shè)計(jì)?在提取單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化提取條件。以乙醇濃度、提取時(shí)間、料液比3個(gè)因素作為考察對(duì)象，每個(gè)因素選用3個(gè)水平。選用L9（34）表，安排實(shí)驗(yàn)優(yōu)化工藝條件，因素水平見(jiàn)表1。

2.4.2?正交試驗(yàn)結(jié)果及分析?試驗(yàn)結(jié)果及分析見(jiàn)表2 和表3。從表2可以看出，最佳工藝組合是 A3B3C2，即乙醇濃度70%，提取時(shí)間25 min，料液比1：25。對(duì)極差貢獻(xiàn)最大的是A因素，其次是C因素，B因素影響最小。

從方差分析的結(jié)果看，A、B、C三個(gè)因素對(duì)提取率沒(méi)有顯著性差異。

2.5?精密度試驗(yàn)?取對(duì)照品溶液，在329nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，重復(fù)6 次，測(cè)得RSD為1.2%。

2.6?重復(fù)性實(shí)驗(yàn)?精密稱取6份梔子粉末各0.50 g，按2.1.2項(xiàng)下供試品溶液的制備方法平行制備6份供試品溶液，329nm測(cè)定吸光度，測(cè)得的RSD為2.3%。

2.7?加樣回收率試驗(yàn)?精密稱取已經(jīng)測(cè)定含量的梔子粉末6份各0.5 g，放入錐形瓶中，分別加入60%乙醇25 mL，各加入濃度為300 μg/mL對(duì)照品溶液4 mL，超聲處理25 min，放冷，過(guò)濾，全部轉(zhuǎn)移于100 mL容量瓶中定容，適當(dāng)稀釋后，于329 nm測(cè)定吸光度值。計(jì)算平均加樣回收率為98.1%，RSD為2.7%。

2.9?綠原酸含量測(cè)定?取不同產(chǎn)地的梔子樣品，用70%乙醇超聲提取，過(guò)濾，稀釋后于329 nm測(cè)定吸光度，由回歸方程計(jì)算樣品中綠原酸的含量，結(jié)果：江西1.64%，云南1.54%，貴州1.75%，安徽1.89%，河南2.16%，廣西1，57%，四川1.10%。

3?討論

3.1?提取方法的考察?以乙醇為溶劑，比較熱回流、超聲、浸泡等方法進(jìn)行提取，以梔子中綠原酸的提取量為考察指標(biāo)，結(jié)果表明超聲提取法簡(jiǎn)便，快速，效果好。

3.2?通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)考察了超聲提取時(shí)乙醇濃度，提取時(shí)間和料液比的影響，最佳提取條件是70%乙醇濃度，提取時(shí)間25 min時(shí)，料液比1：25。

3.3?綠原酸是梔子中的重要活性成分，測(cè)定其含量可用于對(duì)梔子藥材的質(zhì)量控制，用紫外分光光度法來(lái)測(cè)定綠原酸的含量，該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好.可作為梔子中綠原酸含量的測(cè)定方法。

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（收稿日期：2020-01-13）