朱潔琳 崔力軍 李露 倪紅芬 沈建慧 張紅波

阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）又稱老年癡呆，作為一種進行性發(fā)展的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，患者除了認知功能和生活能力下降，還常在病程中出現(xiàn)不同程度的精神行為障礙，包括攻擊、躁動不安、幻覺、情緒波動等[1]，給疾病治療及家屬護理都帶來了巨大的壓力。StrittMatter等[2]發(fā)現(xiàn)載脂蛋白 E（apolipoprotein E，Apo E）基因多態(tài)性與AD發(fā)病有關，國內外研究顯示著4是AD發(fā)病的高危因素[3-4]。胥麗霞等[5]研究發(fā)現(xiàn)該基因多態(tài)性同時與精神癥狀相關。也有研究表明攜帶著4基因型AD患者所伴有的精神行為障礙癥狀比不攜帶該基因型患者更嚴重[6]。此外，同型半胱氨酸（homo原cysteine，Hcy）及炎癥指標均與AD的發(fā)生、發(fā)展有關。筆者通過分析伴精神行為障礙AD患者的Apo E基因多態(tài)性及相關實驗室指標的水平，探討AD伴精神行為障礙與Apo E基因多態(tài)性及這些指標的相關性，現(xiàn)將結果報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2017年2月至2019年1月本院門診及住院的322例AD患者為研究對象，根據(jù)是否存在精神行為障礙[簡易智能狀態(tài)量表（MMSE）評分＜24分，癡呆病理行為量表（BEHAVE-AD）總分＞8分]分為兩組，其中AD伴精神行為障礙172例，男80例，女92例，年齡 56～78（64.7依5.6）歲；AD 不伴有精神行為障礙150 例，男 71 例，女 79 例，年齡 53～80（63.9依7.2）歲。所有患者符合《精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊》中AD診斷標準[7]。選取同期年齡、性別相匹配且未患有AD的健康體檢者200例作為正常對照組，男105例，女95例，年齡52～80（62.8依7.7）歲。3組對象年齡、性別比較差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）。所有患者均未服用過抗精神病類藥物。排除標準：（1）血管性癡呆和其他混合性癡呆；（2）合并其他精神疾病；（3）顱腦外傷史和家族史；（4）依從性差。本研究經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會審查通過，所有入組對象均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 相關實驗室指標檢測 所有對象抽取清晨空腹靜脈血 3 ml于分離膠管中，離心（3 500 r/min，5 min）后的血清使用雅培公司ABBOTT ARCHITECT C16000全自動生化分析儀檢測Apo E、CRP和Hcy濃度測定，Apo E及CRP檢測采用免疫比濁法，Hcy檢測采用酶循環(huán)法。

1.2.2 基因多態(tài)性分析 所有對象抽取靜脈血2 ml于EDTA-K2管中。應用全血基因組提取試劑盒（微量離心柱法，北京天根公司）提取基因組DNA。基因多態(tài)性分析采用聚合酶鏈式反應、限制性片段長度多態(tài)性（PCRRFLP）技術。引物的設計參考Hixon等[8]方法，上游引物：ACAGAATTCGCCCCGGCCTGGTACAC，下游引物TAAGCTTGGCACGGCTGTCCAAGGA。95益預變性5 min，然后按95益變性30 s、65益退火30 s、72益延伸30 s的循環(huán)條件擴增35個循環(huán)，最后72益延伸10 min。擴增產(chǎn)物經(jīng)Hha I內切酶酶切后進行瓊脂糖電泳，根據(jù)電泳圖譜進行基因分型。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件?；蛐皖l率采用Hardy-Weinberg定律進行平衡檢驗。計量資料用±s表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗?；蛐图暗任换蝾l率用率表示，組間比較采用字2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 Apo E基因多態(tài)性分析 Apo E共有6種基因型（著 2/2、著 2/3、著 2/4、著 3/3、著 3/4、著 4/4）和 3種等位基因（著 2、著3和 著 4）。本實驗得到 著 2/3、著 3/3、著3/4、著4/4這4種基因型，著2/2、著2/4這兩種基因型未檢測到?；蚪MDNA經(jīng)PCR-RFLP技術，通過酶切位點特定的限制性內切酶將待測基因酶切成多個片段后分型，分型圖譜見圖1。

圖1 載脂蛋白E（Apo E）基因分型電泳圖

由圖 1 可見，著 2/3基因型為 91、83、48、35 bp 4 個條帶，著3/3 為 91、48、35 bp 3 個條帶，著3/4 為 91、72、48、35 bp 4個條帶，著 4/4為 72、48、35 bp 3個條帶。

2.2 AD患者和正常對照組Apo E基因型及等位基因頻率分布 AD患者和正常對照組基因頻率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律（P＞0.05）。AD伴精神行為障礙組著3/4和著4/4基因型頻率明顯高于正常對照組（均P＜0.05）。AD伴精神行為障礙組著3/4基因型頻率明顯高于AD不伴精神行為障礙組（P＜0.05）。AD伴精神行為障礙組著4等位基因頻率明顯高于與AD不伴精神行為障礙組和正常對照組（均P＜0.05）。AD不伴精神行為障礙組與正常對照組間各基因型和等位基因頻率差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）。見表1。

2.3 AD患者和正常對照組血清Apo E、CRP、Hcy水平的比較 AD伴精神行為障礙組的Apo E水平明顯低于其他兩組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。AD不伴精神行為障礙組的Apo E水平與正常對照組比較雖無統(tǒng)計學差異，但存在下降趨勢。Hcy水平在AD伴精神行為障礙組最高，AD不伴精神行為障礙組次之，正常對照組最低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。所有患者的CRP水平顯著高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），但兩組患者間CRP水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表 2。

表1 AD患者和正常對照組Apo E基因型及等位基因頻率分布

表2 AD患者和正常對照組血清Apo E、Hcy、CRP水平的比較

2.4 AD患者和正常對照組攜帶或不攜帶著4基因型者Apo E水平的比較 將各組按是否攜帶著4基因分為攜帶著4基因型者和不攜帶著4基因型者。3組中攜帶著4基因型者血清Apo E水平均低于不攜帶著4基因型者（均P＜0.05）。3組間攜帶著4基因型者和不攜帶著4基因型者的血清Apo E水平差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05），但AD伴精神行為障礙組攜帶著4基因型者的血清Apo E水平最低。見表3。

表3 AD患者和正常對照組攜帶或不攜帶著4基因型者Apo E水平的比較

3 討論

AD發(fā)病的病理機制主要涉及淀粉樣瀑布假說、tau蛋白假說以及氧化炎癥反應[9]。其中茁淀粉樣蛋白（amyloid茁，A茁）的異常沉積以及炎性反應都是目前公認引起AD的關鍵因素[10]。Apo E基因多態(tài)性在A茁沉積物形成過程中起著關鍵作用，一直備受關注。本研究結果顯示，AD組和正常對照組均為著3等位基因的比例最高，所得基因型及等位基因頻率分布與國內眾多報道結果的趨勢保持基本一致[11]。Apo E基因多態(tài)性不僅與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷有關，也與AD患者精神行為障礙的產(chǎn)生有關[12]。本研究提示AD伴精神行為障礙組著4等位基因頻率顯著高于其他兩組，與學者們發(fā)現(xiàn)的著4等位基因頻率在有陽性癥狀的精神行為患者中明顯增高相一致[13]。筆者推測可能是AD伴精神行為障礙的易感基因。

Apo E除了調節(jié)機體脂蛋白代謝，它在神經(jīng)系統(tǒng)膽固醇轉運中也發(fā)揮著重要作用[14]。不少研究認為Apo E水平可能與AD的發(fā)生、發(fā)展有關[15]。本研究顯示，AD伴精神行為障礙的Apo E水平最低，而正常對照組水平最高。由表3可見，著4基因攜帶者的Apo E水平均低于未攜帶該基因者，提示著4等位基因可能影響Apo E水平。同時也發(fā)現(xiàn)著4等位基因在患者及健康人群中的分布存在差異。在AD伴精神行為障礙組中，著4等位基因攜帶者的比例明顯多于其他兩組，AD伴精神行為障礙組的整體Apo E水平更低。至于Apo E水平是否與AD的相關精神行為障礙存在關聯(lián)，還需要進一步研究。

本研究通過統(tǒng)計分析后還發(fā)現(xiàn)所有AD患者的CRP水平與正常對照組有統(tǒng)計學差異，這個結果與Locascio等[16]研究所報道的CRP水平可能與AD患者認知功能下降有關相一致。CRP作為炎癥反應的重要標志之一，一方面介導IL-6參與炎癥反應[17]，符合AD發(fā)病的炎性反應假說。另一方面，在CRP等慢性炎癥因素的影響下，多數(shù)AD患者發(fā)病前就存在動脈粥樣硬化斑塊，斑塊周圍血小板源性淀粉樣前體蛋白（amyloid pre原cursor protein，APP）水解，導致 A茁 沉積物異常增多[18]，進而又回到了AD發(fā)病的關鍵因素。也有研究顯示CRP水平同AD并無關聯(lián)[19]，畢竟炎性因子在AD的發(fā)病機制并未完全明確，需要更深入地探索。

高Hcy血癥在神經(jīng)變性疾病中起到重要的作用，同AD的發(fā)病密切相關，是AD的危險因素[20]。本研究中，Hcy水平在3組中差異有統(tǒng)計學意義。AD伴精神行為障礙組的Hcy水平最高，而正常對照組最低，同國內外報道的結果相一致[21]。這可能由于高水平Hcy可以誘導神經(jīng)細胞的凋亡，從而引發(fā)AD。且Hcy水平越高，對海馬神經(jīng)元的損傷越大[22]。

綜上所述，AD伴精神行為障礙患者著4等位基因頻率及血清CRP及Hcy水平顯著升高，Apo E水平降低。Apo E基因多態(tài)性和Apo E、CRP、Hcy水平的變化可能與AD伴精神行為障礙有關。由于本研究樣本量較小，且為單中心研究，因此相關指標與AD伴精神行為障礙的關系尚需進一步研究。