雙黃連納米乳口服液對(duì)楓葉鴨免疫功能的影響

朱俊平

摘要：將120羽1日齡楓葉鴨分成3組（Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組），Ⅰ組、Ⅱ組分別在日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液1.0、0.5 mL/L，Ⅲ組為對(duì)照組。結(jié)果顯示，Ⅰ組、Ⅱ組與Ⅲ組相比，胸腺指數(shù)分別提高13.89%（P<0.05）、10.19%（P<0.05），脾指數(shù)分別提高10.43%（P<0.05）、3.48%（P>0.05），法氏囊指數(shù)分別提高19.84%（P<0.05）、12.70%（P<0.05）;DVH中和抗體分別提高19.51%（P<0.05）、14.63%（P<0.05）;H5亞型禽流感Re-6血凝抑制抗體分別提高23.90%（P<0.05）、16.98%（P<0.05），H5亞型禽流感Re-8血凝抑制抗體分別提高23.39%（P<0.05）、13.51%（P<0.05）。結(jié)果表明，雙黃連納米乳口服液能夠顯著提高楓葉鴨免疫功能。

關(guān)鍵詞：雙黃連;納米乳;楓葉鴨;免疫功能

中圖分類號(hào)： R285 ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A ?文章編號(hào)：1002-1302（2020）17-0183-03

雙黃連是由金銀花、黃芩、連翹三味藥物復(fù)方精提的中藥制劑，主要有清熱解毒、抗炎消腫、抑制病原和免疫調(diào)節(jié)等藥理作用[1]。雙黃連納米乳口服液是由運(yùn)用納米技術(shù)制造的粒徑小于200 nm的藥物成分制成，具有藥物溶出率高、在消化道的吸收率高、生物利用度高等優(yōu)點(diǎn)[2]。本試驗(yàn)研究了雙黃連納米乳口服液對(duì)楓葉鴨免疫器官指數(shù)及疫苗免疫效果的影響，為該產(chǎn)品的臨床應(yīng)用特別是在鴨生產(chǎn)上的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 120羽1日齡楓葉鴨購(gòu)自山東永惠楓葉種鴨有限公司;SPF雞胚購(gòu)自山東斯帕法斯生物技術(shù)有限公司。

1.1.2 試驗(yàn)藥品 疫苗雙黃連納米乳口服液由山東廣元藥業(yè)科技有限公司試產(chǎn)，含有黃芩苷 13.2 mg/mL、綠原酸1.2 mg/mL、連翹苷 0.6 mg/mL;鴨病毒性肝炎（DVH）活疫苗（A66株）由南京天邦生物科技有限公司生產(chǎn);重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)（Re-6株+Re-8株）滅活苗由肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 診斷試劑 禽流感病毒H5亞型Re-6株和Re-8株血凝抑制抗原、陰性及陽(yáng)性血清，由哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)分組 將120羽1日齡楓葉鴨隨機(jī)分成3組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10羽楓葉鴨。Ⅰ組、Ⅱ組為雙黃連納米乳口服液應(yīng)用試驗(yàn)組，Ⅲ組為空白對(duì)照組。2組楓葉鴨在相同條件下飼養(yǎng)。

1.2.2 給藥方案 Ⅰ組楓葉鴨的日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液1.0 mL/L，Ⅱ組楓葉鴨的日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液0.5 mL/L，從5日齡開(kāi)始連用7 d;Ⅲ組是空白對(duì)照組，楓葉鴨的日常飲水中不添加雙黃連納米乳口服液。

1.2.3 免疫方案 7日齡，根據(jù)疫苗說(shuō)明書(shū)，Ⅰ組、Ⅱ組的楓葉鴨皮下注射鴨病毒性肝炎（DVH）活疫苗（A66株）0.5 mL/羽。

14日齡，根據(jù)疫苗說(shuō)明書(shū)，Ⅰ組、Ⅱ組的楓葉鴨肌肉注射重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)（Re-6株+Re-8株）滅活苗0.5 mL/羽。

1.2.4 檢查指標(biāo) （1）免疫器官指數(shù)。試驗(yàn)鴨30日齡時(shí)，參照胡振華等的方法[3]進(jìn)行屠宰，并采集胸腺、脾和法氏囊進(jìn)行稱質(zhì)量，計(jì)算免疫器官指數(shù)（胸腺指數(shù)、脾指數(shù)和法氏囊指數(shù)）。（2）鴨病毒性肝炎活疫苗免疫效果。試驗(yàn)鴨21日齡時(shí)，翅靜脈采血分離血清，參照徐新紅等的方法[4-5]，測(cè)定鴨病毒性肝炎（DVH）中和抗體。（3）重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)（Re-6株+Re-8株）滅活疫苗免疫效果。試驗(yàn)鴨28日齡時(shí)，翅靜脈采血分離血清，按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《高致病性禽流感防治技術(shù)規(guī)范》的方法測(cè)定禽流感血凝抑制抗體。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

應(yīng)用SPSS程序軟件統(tǒng)計(jì)分析3組數(shù)據(jù)的顯著性差異，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 雙黃連納米乳口服液對(duì)楓葉鴨免疫器官指數(shù)的影響

從表1可以看出，Ⅰ組、Ⅱ組與Ⅲ組相比，胸腺指數(shù)分別提高13.89%（P<0.05）、10.19%（P<0.05），脾指數(shù)分別提高10.43%（P<0.05）、3.48%（P>0.05），法氏囊指數(shù)分別提高19.84%（P<0.05）、12.70%（P<0.05）;Ⅰ組和Ⅱ組相比，胸腺指數(shù)提高3.36%（P>0.05），脾指數(shù)提高6.72%（P>0.05），法氏囊指數(shù)提高6.38%（P>0.05）。結(jié)果表明，在楓葉鴨的日常飲水中加入1.0、0.5 mL/L 雙黃連納米乳口服液，都能顯著提高楓葉鴨的各免疫器官指數(shù);而在楓葉鴨日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液1.0、0.5 mL/L處理間各免疫器官指數(shù)差異不顯著。

2.2 雙黃連納米乳口服液對(duì)楓葉鴨DVH活疫苗免疫效果的影響

從表2可以看出，Ⅰ組、Ⅱ組與Ⅲ組相比，DVH中和抗體分別提高19.51%（P<0.05）、14.63%（P<0.05）;Ⅰ組、Ⅱ組相比，DVH中和抗體提高4.26%（P>0.05）。結(jié)果表明，在楓葉鴨的日常飲水中加入1.0、0.5 mL/L雙黃連納米乳口服液，都能顯著提高楓葉鴨DVH活疫苗免疫效果;而在楓葉鴨日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液1.0、0.5 mL/L 處理間免疫效果差異不顯著。

2.3 雙黃連納米乳口服液對(duì)楓葉鴨重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)（Re-6株+Re-8株）滅活苗免疫效果的影響

從表3可以看出，Ⅰ組、Ⅱ組與Ⅲ組相比，H5亞型禽流感Re-6血凝抑制抗體分別提高23.90%（P<0.05）、16.98%（P<0.05），H5亞型禽流感 Re-8血凝抑制抗體分別提高23.39%（P<0.05）、13.51%（P<0.05）;Ⅰ組和Ⅱ組相比，H5亞型禽流感Re-6血凝抑制抗體提高5.91%（P>0.05），H5亞型禽流感Re-8血凝抑制抗體提高8.70%（P>0.05）。結(jié)果表明，在楓葉鴨的日常飲水中加入1.0、0.5 mL/L雙黃連納米乳口服液，都使楓葉鴨重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)（Re-6株+Re-8株）滅活苗的免疫效果顯著增強(qiáng);而在楓葉鴨日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液1.0、0.5 mL/L處理間免疫效果差異不顯著。

3 討論與結(jié)論

免疫器官是動(dòng)物免疫的物質(zhì)基礎(chǔ)，免疫器官指數(shù)能夠反映動(dòng)物免疫功能的強(qiáng)弱[6-7]?？贵w效價(jià)的高低是評(píng)價(jià)疫苗免疫效果最直接的方法，同時(shí)也能反映動(dòng)物免疫功能的強(qiáng)弱。因此，本研究選擇免疫器官指數(shù)、鴨病毒性肝炎中和抗體效價(jià)及禽流感血凝抑制抗體效價(jià)，研究雙黃連納米乳口服液對(duì)楓葉鴨免疫功能的影響。結(jié)果表明，在楓葉鴨日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液1.0、0.5 mL/L與空白對(duì)照組相比，各免疫器官指數(shù)都有顯著提高，本結(jié)果與楊麗梅等報(bào)道的雙黃連蜂膠口服液提高肉雞免疫器官指數(shù)的研究結(jié)論[6]相近;DVH中和抗體效價(jià)提高顯著，也高于徐新紅等檢測(cè)的DVH中和抗體效價(jià);H5亞型禽流感Re-6血凝抑制抗體效價(jià)和H5亞型禽流感Re-8血凝抑制抗體效價(jià)都有顯著提高[4-5]，也高于楊飛燕等在鴨首次免疫14 d后檢測(cè)的Re-6和Re-8血凝抑制抗體效價(jià)[8-9]。所有試驗(yàn)結(jié)果也都與畢文術(shù)等報(bào)道[10]的雙黃連提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，增強(qiáng)體液免疫試驗(yàn)研究相符。說(shuō)明在楓葉鴨日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液1.0、0.5 mL/L能顯著提高楓葉鴨的免疫器官指數(shù)和疫苗免疫效果。

Ⅰ組楓葉鴨日常飲水中加入試驗(yàn)品推薦量雙黃連納米乳口服液1.0 mL/L，高于《中國(guó)藥典》（2010年版）關(guān)于雙黃連口服液有效成分黃芩苷 10.0 mg/mL、綠原酸0.60 mg/mL、連翹苷 0.30 mg/mL 的量，Ⅱ組楓葉鴨日常飲水中加入試驗(yàn)品雙黃連納米乳口服液0.5 mL/L，各有效成分低于或等于《中國(guó)藥典》的量。而Ⅱ組也能夠顯著提高楓葉鴨免疫功能，這可能與本試驗(yàn)產(chǎn)品采用納米乳生產(chǎn)技術(shù)有關(guān)。納米乳技術(shù)提高了本試驗(yàn)產(chǎn)品有效成分（黃芩苷、綠原酸、連翹苷）的溶出度、穩(wěn)定性、在消化道的吸收率和生物利用度[11]，相同藥量的情況下，免疫增強(qiáng)效果更佳。在本試驗(yàn)產(chǎn)品的其他作用研究中，將繼續(xù)研究此用量的效果。

綜上所述，通過(guò)在日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液，顯著提高楓葉鴨的免疫功能，可在畜牧業(yè)特別是鴨生產(chǎn)上推廣應(yīng)用。

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