黃小蘭,何旭峰,楊 勤*,谷文超,周祥德,張 華,周 濃,*
(1.重慶三峽學(xué)院生物與食品工程學(xué)院,三峽庫區(qū)道地藥材綠色種植與深加工重慶市工程實(shí)驗(yàn)室,重慶 404100;2.重慶市萬州食品藥品檢驗(yàn)所,重慶 404100;3.重慶三峽醫(yī)藥高等??茖W(xué)校中醫(yī)學(xué)院,重慶 404100)
地參為唇形科地筍屬植物毛葉地筍(Lycopus lucidus Turcz. var. hirtus Regel)的干燥根莖,是一種傳統(tǒng)的藥食兼用佳品,可炒食、油炸、做醬菜等,堪稱蔬菜珍品[1]。地參野生資源廣泛分布于我國大部分地區(qū),人工栽培于云南、山東、廣西、江蘇、江西、重慶、浙江等?。ㄊ校2]。目前有關(guān)地參的文獻(xiàn)報(bào)道主要集中在酚酸類[3-4]和多糖類[5],研究表明,地參酚酸和多糖具有抗氧化、降血脂、降血糖、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性[6-7]。因此,地參備受人們關(guān)注,成為近年來保健食品、藥品等領(lǐng)域研究開發(fā)與應(yīng)用的熱點(diǎn)。但地參除含有酚酸、多糖、萜類與甾體、黃酮類、揮發(fā)油、微量元素、粗蛋白外[8-10],還含有豐富的氨基酸類化合物[11-12]。
氨基酸作為蛋白質(zhì)的基本組成單元和人體的必需營(yíng)養(yǎng)成分,不僅能判斷食品的營(yíng)養(yǎng)狀況,而且作為食品加工或中藥炮制過程中參與美拉德反應(yīng)的底物之一,同樣也關(guān)聯(lián)和影響著食品的風(fēng)味和藥物的生理活性[13-14]。早期的研究表明地參中含有豐富的氨基酸成分,總含量可達(dá)2.72%,但研究停留在對(duì)云南產(chǎn)野生地參的粗略統(tǒng)計(jì)[11-12],尚鮮見其深入的研究報(bào)道。因此,測(cè)定地參中氨基酸含量對(duì)地參的質(zhì)量控制、開發(fā)利用具有重要意義。
近幾年來,較為普遍的氨基酸測(cè)定方法有氨基酸分析儀法[15-17]、液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)法[18-19]、高效液相色譜法[20-21],前2 種方法成本較高,普及度不高,高效液相色譜法操作簡(jiǎn)單,成本較低,應(yīng)用范圍廣,常用于實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)。由于氨基酸的分子質(zhì)量較小,極性較強(qiáng),沒有發(fā)色基團(tuán)[22],不利于直接檢測(cè),雖有報(bào)道采用液相色譜-帶電氣溶膠檢測(cè)器直接測(cè)定氨基酸的含量[23],但該法靈敏度低、重現(xiàn)性差,故通過衍生試劑給氨基酸添加發(fā)色基團(tuán)更有利于檢測(cè)。目前常用的柱前衍生方法有異硫氰酸苯酯(phenyl isothiocyanate,PITC)法、6-氨基喹啉-N-羥基琥珀酰亞胺活化環(huán)氨基甲酸酯(6-aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl carbamate,AQC)法[24]、鄰苯二醛(o-phthalaldehyde,OPA)法[25]、2,4-二硝基氟苯(2,4-dinitrofluorobenzene,F(xiàn)DNB)法[26]等。但AQC價(jià)格昂貴,OPA只能與一級(jí)氨基酸發(fā)生反應(yīng)且衍生物質(zhì)不穩(wěn)定,F(xiàn)DNB法需要在避光條件下進(jìn)行且毒性較大[27-28],而PITC可與一、二級(jí)氨基酸同時(shí)反應(yīng),且價(jià)格便宜、操作簡(jiǎn)單、衍生產(chǎn)物單一、穩(wěn)定,成為柱前衍生化測(cè)定氨基酸的首選。
本研究采用PITC對(duì)地參氨基酸進(jìn)行柱前衍生化,即在堿性條件下,氨基酸與PITC相結(jié)合生成具有紫外吸收的化合物[29],利用高靈敏度的超高效液相色譜(ultrahigh performance liquid chromatography,UPLC)儀進(jìn)行分離檢測(cè),并通過主成分分析(principal component analysis,PCA)、聚類分析對(duì)不同產(chǎn)地地參樣品進(jìn)行差異分析,以期為地參在食品、保健食品以及藥品的深入開發(fā)利用方面提供參考依據(jù)。
地參自采或委托采集于云南騰沖(S1)、重慶萬州(S2)、江蘇徐州(S3)、山東菏澤(S4)、廣西玉林(S5)、云南大理(S6)6 個(gè)地參主要栽培基地,重慶三峽學(xué)院生物與食品工程學(xué)院鑒定為唇形科地筍屬植物毛葉地筍的干燥根莖。
天冬氨酸 成都德思特生物技術(shù)有限公司;16 種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品 合肥博美生物科技有限公司;氨基酸信息詳見表1。
表1 17 種氨基酸信息Table 1 Information about 17 amino acids tested in this study
鹽酸、三乙胺、苯酚、乙酸鈉、冰醋酸(均為分析純) 成都科龍化工試劑廠;PITC(純度≥99%,蛋白測(cè)序級(jí)) 上海麥克林生化科技有限公司;乙腈(色譜純) 德國默克公司;實(shí)驗(yàn)用水為去離子超純水。
ACQUITY UPLC H-Class UPLC儀(配有二極管陣列檢測(cè)器和Empower色譜工作站) 美國Waters公司;Milli-Q Advantage A10超純水機(jī)(電阻率≥18.2 MΩ·cm)美國Millipore公司;3-30KS型高速離心機(jī) 德國Sigma公司;MS3型渦旋混合器 德國IKA公司;SQP萬分之一電子天平 德國Sartorius公司;TurboVap LV氮吹儀瑞典Biotage公司;BPG-9240A精密鼓風(fēng)干燥箱 上海一恒科學(xué)儀器有限公司。
1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
分別稱取17 種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品適量,用0.1 mol/L HCl溶液溶解,配制成不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液,詳見表1。分別吸取各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量于6 個(gè)10 mL量瓶中,用0.1 mol/L HCl溶液定容至刻度,得不同質(zhì)量濃度的系列混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液,待衍生化操作。
1.3.2 樣品溶液的制備
1.3.2.1 地參樣品的水解
參照GB 5009.124—2016《食品中氨基酸的測(cè)定方法》[30],將地參樣品經(jīng)50 ℃干燥,粉碎過35 目篩,備用。準(zhǔn)確稱取0.5 g(精確至0.000 1 g)地參粉末于頂空瓶中,加入6 mol/L鹽酸溶液10 mL,繼續(xù)向頂空瓶?jī)?nèi)加入苯酚3 滴,立即密封。將頂空瓶置于110 ℃的電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)水解22 h后,取出,冷卻至室溫,濾過,用少量純水多次沖洗殘?jiān)⑥D(zhuǎn)移至25 mL量瓶中,加純水定容至刻度,混勻。取地參水解液0.4 mL于氮吹管中,在50 ℃水浴條件下氮吹至近干,加入0.4 mL純水復(fù)溶備用。
1.3.2.2 氨基酸衍生化
精密移取1.3.2.1節(jié)復(fù)溶后的水解液0.4 mL于10 mL離心管中,分別加入1.0 mol/L三乙胺-乙腈溶液和0.1 mol/L PITC-乙腈溶液各0.2 mL,混勻,室溫靜置60 min后,加入正己烷1 mL,渦旋混合器振蕩1 min,8 000 r/min冷凍離心5 min,萃取反應(yīng)過剩的PITC,棄上層正己烷,將下層溶液用純水定容至2 mL量瓶中,經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾,待測(cè)。
1.3.3 空白溶液的制備
取0.1 mol/L鹽酸溶液0.4 mL于10 mL離心管中,自“分別加入1.0 mol/L三乙胺-乙腈溶液和0.1 mol/L PITC-乙腈溶液各0.2 mL”起照1.3.2.2節(jié)方法進(jìn)行衍生化處理,即得。
1.3.4 色譜條件
A C Q U I T Y U P L C B E H C18色譜柱(2.1 mm×150 mm,1.7 μm);檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm;柱溫40 ℃;進(jìn)樣量1 μL;流速0.2 mL/min;流動(dòng)相:A為0.1 mol/L乙酸鈉-乙腈(97∶3,V/V)溶液(冰醋酸調(diào)pH 6.5),B為80%乙腈溶液;梯度洗脫:0~1 min,94% A,6% B;1~15 min,94%~65% A,6%~3 5% B;1 5 ~2 2 m i n,6 5%~4 0% A,35%~60% B。
采用Microsoft Excel 2007軟件對(duì)測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,氨基酸含量以表示。采用SPSS 20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行PCA和聚類分析。
氨基酸的衍生反應(yīng)屬于競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng),只有足夠的衍生試劑才能保證所有氨基酸充分衍生化。本研究取最高濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.4 mL,加入1.0 mol/L三乙胺-乙腈溶液0.2 mL,渦旋混勻,分別加入衍生試劑0.1 mol/L PITC-乙腈溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL進(jìn)行衍生化反應(yīng),通過各氨基酸衍生產(chǎn)物的峰面積確定最佳用量。結(jié)果表明:當(dāng)衍生試劑超過0.2 mL時(shí),峰面積增幅不明顯,考慮到過量的PITC會(huì)造成色譜柱的損壞[26],故本研究選擇衍生試劑用量為0.2 mL。
氨基酸需在堿性條件下(約為pH 9)與PITC發(fā)生反應(yīng)生成具有紫外吸收的氨基酸衍生物[26],故地參水解液pH值的調(diào)節(jié)尤為重要。本研究比較用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至中性和氮吹法除掉HCl溶液2 種方式,結(jié)果發(fā)現(xiàn):用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值的過程中生成了大量的NaCl,當(dāng)加入三乙胺-乙腈溶液和PITC-乙腈溶液后,出現(xiàn)分層現(xiàn)象,衍生試劑與目標(biāo)物無法充分接觸,造成反應(yīng)不完全。而采用氮吹法除HCl溶液能完全避免這種現(xiàn)象,保證氨基酸完全衍生。在上述優(yōu)化后的條件下對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品進(jìn)行衍生化處理,按1.3.4節(jié)色譜條件注入U(xiǎn)PLC儀進(jìn)行測(cè)定,如圖1所示,各色譜峰峰形尖銳,分離度良好。
圖1 氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品(A)與地參樣品(B)UPLC圖Fig. 1 UPLC chromatograms of mixture of 17 amino acid standards (A) and amino acids in hydrolysate of L. lucidus Turcz. var. hirtus Regel (B)
表2 17 種氨基酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量限、儀器精密度和方法重復(fù)性Table 2 Calibration curves, linear ranges, correlation coefficients,limits of detection, limits of quantitation, instrumental precision and method repeatability for amino acids detected by UPLC
取1.3.1節(jié)的17 種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)工作液按照1.3.2.2節(jié)方法進(jìn)行衍生化處理,以1.3.4節(jié)色譜條件依次進(jìn)樣分析,記錄色譜峰峰面積,以各氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積(Y)與其相應(yīng)的質(zhì)量濃度(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)信噪比計(jì)算檢出限(RSN=3)和定量限(RSN=10)。如表2所示,17 種氨基酸的相關(guān)系數(shù)均大于0.999 0,表明線性關(guān)系良好;檢出限為0.020~0.110 μg/mL,定量限為0.067~0.368 μg/mL,表明儀器靈敏度高,可檢測(cè)較低質(zhì)量濃度的氨基酸。
取同一混合標(biāo)準(zhǔn)品衍生化溶液按照1.3.4節(jié)色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次,記錄17 種氨基酸峰面積并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD),見表2。結(jié)果顯示:各氨基酸峰面積的RSD在0.11%~2.32%之間,均小于3.00%,表明儀器精密度良好,可進(jìn)行樣品分析。
精密稱取樣品(S6)0.5 g,平行6 份,按照1.3.2節(jié)制備樣品溶液,并按1.3.4節(jié)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄17 種氨基酸峰面積并計(jì)算RSD,見表2。結(jié)果顯示:各物質(zhì)峰面積RSD在0.27%~2.25%之間,表明該方法的重復(fù)性良好,可用于地參樣品中氨基酸的含量測(cè)定。
取同一混合標(biāo)準(zhǔn)品衍生化溶液,分別在0、2、8、14、20、24、28、32、36 h時(shí)間里按照1.3.4節(jié)色譜條件進(jìn)樣,結(jié)果顯示:各衍生產(chǎn)物隨著時(shí)間的延長(zhǎng),標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度呈下降趨勢(shì),在32 h內(nèi)測(cè)得17 種氨基酸RSD在0.30%~2.63%之間,均小于3.00%;超過32 h后,部分氨基酸RSD超過3.00%。表明氨基酸衍生產(chǎn)物隨著時(shí)間的推移發(fā)生了降解,為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確性,衍生化處理完畢后保證在32 h內(nèi)完成檢測(cè)。
表3 17 種氨基酸回收率結(jié)果(n=6)Table 3 Recoveries of 17 amino acids spiked into sample (n= 6)
根據(jù)本實(shí)驗(yàn)方法,稱取已測(cè)得氨基酸含量的地參樣品(S6)0.25 g各6 份,置于頂空瓶中,分別加入各標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液適量,按照1.3.2節(jié)方法制備衍生化溶液,按1.3.4節(jié)色譜條件測(cè)定峰面積,計(jì)算回收率和RSD,以平均值表示,結(jié)果見表3。結(jié)果表明17 種氨基酸平均回收率為89.69%~106.02%,RSD為0.44%~2.60%,可以滿足地參中17 種氨基酸含量測(cè)定的要求。
表4 不同產(chǎn)地地參中氨基酸含量(n=3)Table 4 Amino acid composition of samples collected from six differenthabitats (n= 3)mg/g
表5 地參氨基酸的物質(zhì)的量比(n=3)Table 5 Molar ration of amino acid (n = 3)
取6 個(gè)不同產(chǎn)地地參樣品按照1.3.2節(jié)進(jìn)行樣品溶液的制備,平行3 份,注入U(xiǎn)PLC測(cè)定氨基酸含量,并計(jì)算各氨基酸組分間物質(zhì)的量比,結(jié)果見表4、5。不同產(chǎn)地的地參酸水解液中均檢出17 種氨基酸,但氨基酸總量存在差異,介于19.463~81.663 mg/g之間,氨基酸總量為山東菏澤>江蘇徐州>云南騰沖>云南大理>廣西玉林>重慶萬州,平均含量為50.679 mg/g,明顯高于紫蘇葉與紫蘇子[29]、霍山石斛[14]、橄欖[18],與黨參[31]含量接近。地參所含氨基酸中含量最高的為天冬氨酸,為6.268~18.450 mg/g,平均含量為13.338 mg/g,其次是谷氨酸,含量為3.088~13.346 mg/g,平均含量為8.478 mg/g,分別占總氨基酸含量的26.32%和16.73%,這與前期對(duì)云南地產(chǎn)野生地參的研究[11-12]結(jié)果一致;含量較低的氨基酸為甲硫氨酸和半胱氨酸,甲硫氨酸含量為0.109~0.514 mg/g,平均含量為0.316 mg/g,半胱氨酸含量為0.306~0.572 mg/g,平均含量為0.431 mg/g。
從表4可知,6 個(gè)產(chǎn)地地參中包括7 種人體必需氨基酸,含量為5.298~23.831 mg/g,平均含量為13.956 mg/g。必需氨基酸含量從高到低依次為纈氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸,含量最高的纈氨酸占氨基酸總量的5.36%,甲硫氨酸含量最低,占總量的0.62%。6 個(gè)產(chǎn)地地參按必需氨基酸含量排序?yàn)樯綎|菏澤>云南騰沖>江蘇徐州>云南大理>廣西玉林>重慶萬州。不同產(chǎn)地地參必需氨基酸與氨基酸總量的百分比為23.99%~29.36%,平均值為27.35%,必需氨基酸與非必需氨基酸含量的百分比為31.57%~41.57%,平均值為37.73%,與聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織/世界衛(wèi)生組織標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)氨基酸理想模式的規(guī)定必需氨基酸與氨基酸總量比值為40%和必需氨基酸與非必需氨基酸比值為60%[32]有一定差距,表現(xiàn)為地參營(yíng)養(yǎng)價(jià)值不夠均衡。
藥用氨基酸種類齊全,包括甲硫氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、賴氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸和精氨酸9 種,含量為13.887~55.890 mg/g,平均含量為35.825 mg/g,占總氨基酸的比例為68.44%~74.16%,平均比值為70.96%,高于枸杞[33]、石斛[34]等中藥,與黨參[31]含量相當(dāng)。結(jié)果顯示,盡管不同產(chǎn)地地參的藥用氨基酸含量相差較大,但其在總氨基酸中所占比例無明顯差異,與王曉媛等[34]對(duì)不同品種石斛的研究結(jié)果類似。其中天冬氨酸和谷氨酸作為地參中主要的藥用氨基酸,分別占藥用氨基酸總量的37.23%和23.67%,而谷氨酸和天冬氨酸作為對(duì)映體,在人體的氨基酸蛋白質(zhì)代謝過程中具有重要的作用[35]。研究表明,谷氨酸作為中樞神經(jīng)中的主要興奮性神經(jīng)遞質(zhì)可介導(dǎo)神經(jīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),能改善學(xué)習(xí)和記憶能力[36];同時(shí)谷氨酸被人體吸收后與血氨結(jié)合可解氨毒,具有保肝護(hù)肝的作用[37]。而天冬氨酸具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、消除疲勞、促進(jìn)肝功能和保護(hù)心肌等生物活性,廣泛用于食品、保健食品、化妝品及工業(yè)原料中,需求量大[38]。在地參中精氨酸含量?jī)H次于天冬氨酸、谷氨酸,達(dá)3.199 mg/g,有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、改善心腦血管等作用[31]。綜上所述,地參中富含各類藥用氨基酸為其開發(fā)成各種保健食品、藥品以及日常食用的藥膳提供了一定的抗病物質(zhì)基礎(chǔ)。
由表5可知,地參檢出的17 種氨基酸組分間物質(zhì)的量比存在差異,但廣西玉林和云南大理2 個(gè)產(chǎn)地之間相似度極高。
2.9.1 PC篩選及其貢獻(xiàn)率利用SPSS 20軟件對(duì)地參中17 種氨基酸進(jìn)行PCA。如表6所示,從17 個(gè)氨基酸組分中提取出2 個(gè)PC(特征值>1),PC1的特征值為15.210,特征貢獻(xiàn)率為89.473%,主要影響因子為脯氨酸、纈氨酸和苯丙氨酸;PC2的特征值為1.176,特征貢獻(xiàn)率為6.917%,主要影響因子為精氨酸、蘇氨酸和谷氨酸;2 個(gè)PC的累計(jì)貢獻(xiàn)率為96.390%。
表6 方差分析Table 6 Analysis of variance
2.9.2 綜合PCA結(jié)果
表7 PC系數(shù)向量值Table 7 Vectors of principal components
表8 樣品PC得分、綜合得分及其排序Table 8 Principal component scores, comprehensive scores and their ranking
將表7中的系數(shù)向量值與17 種氨基酸含量標(biāo)準(zhǔn)化后的數(shù)據(jù)相乘,計(jì)算每個(gè)PC得分,根據(jù)每個(gè)PC所對(duì)應(yīng)的特征值占所提取PC總特征值之和的比例作為權(quán)重得到綜合PC表達(dá)式為F=0.928F1+0.072F2,并進(jìn)行排序。如表8所示,相對(duì)于PC1,采自山東菏澤的地參得分最高;相對(duì)于對(duì)PC2,采自江蘇徐州的地參得分最高;綜合得分排序由高到低依次為山東菏澤>云南騰沖>江蘇徐州>云南大理>廣西玉林>重慶萬州。不同產(chǎn)地地參的F值為-1.426~1.485,表明不同產(chǎn)地地參間氨基酸含量差異明顯。
圖2 樣品聚類分析Fig. 2 Cluster analysis of samples
采用SPSS 20.0軟件對(duì)6 份樣品進(jìn)行聚類分析,結(jié)果見圖2。當(dāng)歐式距離為15時(shí),全部樣品被分成3 大類,其中山東菏澤的為第I類,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值最高,其余4 組為第II類,氨基酸品質(zhì)含量中等,重慶萬州為第III類,品質(zhì)相對(duì)較差,與PCA的結(jié)果一致。第I類山東菏澤地參為高品質(zhì)蛋白,可作為地參資源開發(fā)與利用的理想資源;第III類為低品質(zhì)蛋白,氨基酸含量可能與當(dāng)?shù)厣鷳B(tài)環(huán)境、種質(zhì)資源等[2]有關(guān)。聚類分析結(jié)果較好地體現(xiàn)了不同產(chǎn)地間氨基酸含量的差異性,為地參營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、藥用開發(fā)提供理論指導(dǎo)。
本研究采用6 mol/L鹽酸溶液在110 ℃條件下對(duì)地參樣品進(jìn)行水解,取水解液進(jìn)行PITC柱前衍生,結(jié)合UPLC進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算得到地參中游離和水解氨基酸的總和。該方法的靈敏度高、分離效果好、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和回收率良好,結(jié)果穩(wěn)定可靠。分析地參樣品中氨基酸的組成及含量,可以為地參藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)和將其開發(fā)為保健品提供理論依據(jù)。
地參作為我國傳統(tǒng)藥食兩用的中藥材歷史悠久,其氨基酸種類豐富且含量較高,本研究中6 個(gè)不同產(chǎn)區(qū)的地參均含有17 種氨基酸,總含量約占地參質(zhì)量的5.00%即50 g/kg,極具開發(fā)作為補(bǔ)充氨基酸的功能性食品的潛力,豐富市場(chǎng);檢出氨基酸中含有7 種必需氨基酸和9 種藥用氨基酸,具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值,并通過PCA和聚類分析綜合評(píng)價(jià),山東菏澤地參氨基酸總含量高,重慶萬州的相對(duì)較低。因此,建立地參栽培基地時(shí),應(yīng)充分考慮地參對(duì)產(chǎn)地的適應(yīng)性。由于本實(shí)驗(yàn)選擇的樣品產(chǎn)地僅限于5 個(gè)地參栽培?。ㄊ校┎⑽窗ㄎ覈械貐a(chǎn)地,且樣本數(shù)量較少并不能完全代表當(dāng)?shù)氐貐⑵焚|(zhì),因此在今后研究中還需擴(kuò)大采樣量和采樣范圍,調(diào)查生長(zhǎng)環(huán)境和栽培技術(shù),明確環(huán)境因素對(duì)地參氨基酸營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值的影響,為地參品質(zhì)評(píng)價(jià)、產(chǎn)品的深入開發(fā)利用提供更多依據(jù)。