源自泡菜的植物乳桿菌產(chǎn)新型廣譜抑菌細菌素的特性分析

高兆建，黃亮浩，丁飛鴻，趙宜峰，陳 騰,*

（1.徐州工程學院食品與生物工程學院，江蘇 徐州 221018；2.長江桂柳食品睢寧有限公司，江蘇 徐州 221000）

近年來，隨著社會發(fā)展，食品安全問題越來越受到人們的關(guān)注。食源性腐敗菌及致病菌是導致食品安全事故的重要原因。這些有害微生物導致食品腐敗變質(zhì)、降低食品質(zhì)量造成經(jīng)濟損失，其有毒代謝物對人體健康造成極大危害[1]，特別是某些病原菌，在環(huán)境中普遍存在，能適應(yīng)低溫、酸性和高鹽的苛刻條件，還能逃避宿主免疫系統(tǒng)[2-3]。這些特性使食品容易受到食源性病原菌的污染，并難以控制。目前，解決食品腐敗問題主要依靠化學食品防腐劑，但化學食品防腐劑存在潛在危害，故開發(fā)天然生物防腐劑代替化學防腐劑具有重要意義[4]。

乳酸菌是革蘭氏陽性菌的一個非分類學類群，它在食品工業(yè)中有多種應(yīng)用，例如用于飲料、肉類、蔬菜、水果和牛奶的發(fā)酵[5]。發(fā)酵過程中，它能夠?qū)⑻寝D(zhuǎn)化為乳酸，并且有些能夠產(chǎn)生抑菌活性代謝物，如過氧化氫、細菌素等[6]。細菌素是由核糖體合成的多肽，能抑制多種耐藥的食源性致病菌[7]，很多國家在考慮將細菌素用于食品防腐[8]。很多乳酸菌在合適條件下可產(chǎn)生細菌素，且其是正常菌群中存在的對宿主生理有積極影響的非致病性益生菌[9]，故從不同材料中分離乳酸菌并進一步尋找新的細菌素成為目前研究的熱點。目前，已有從發(fā)酵香腸[10]、咸菜[11]、發(fā)酵肉[12]、發(fā)酵魚[13]、牛奶產(chǎn)品[14]、啤酒[15]等樣品分離到細菌素的報道。但目前應(yīng)用于商業(yè)化生產(chǎn)的細菌素非常有限，開發(fā)新型的細菌素對彌補目前商業(yè)化使用的Nisin抑菌譜窄的缺陷和防止Nisin耐受菌株的出現(xiàn)具有重要意義。

目前文獻報道的乳酸菌細菌素較多，但大多抑菌譜較窄，抑菌范圍集中在革蘭氏陽性菌、陰性菌或兩類都能抑制，但對真核微生物不具有抑菌作用。本研究從中國傳統(tǒng)發(fā)酵泡菜中篩選出1 株可產(chǎn)生廣譜抑菌活性細菌素的植物乳桿菌。為深入研究細菌素特性，通過多種分離方法從發(fā)酵液中分離純化，并確定其抑菌特性，分析細菌素的抑菌效果，旨在為開發(fā)一種用于食品防腐的對常見食源性致病菌、腐敗菌有廣譜抑菌效果的細菌素奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

分離產(chǎn)細菌素乳酸菌的泡菜樣品購自江蘇省徐州市云龍區(qū)多處農(nóng)貿(mào)市場；用于檢測抑菌活性的參考菌株部分購自中國普通微生物菌種保藏管理中心，部分由徐州工程學院江蘇省重點建設(shè)實驗室保存。

柱層析填充材料DEAE Sepharose Fast Flow、Sephadex G-15 美國Pharmacia公司；胰化蛋白胨、酵母提取物 英國Oxoid公司；細菌基因組DNA提取試劑盒、膠回收試劑盒、聚合酶鏈式反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）試劑盒 寶生物工程（大連）有限公司；蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶、脂肪酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶 上海源葉生物科技有限公司。其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

MRS（Man-Rogosa-Sharpe）培養(yǎng)基用于產(chǎn)細菌素供試菌株培養(yǎng)；LB（Luriae Bertani）培養(yǎng)基用于指示細菌菌株培養(yǎng)；馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potato dextrose agar，PDA）培養(yǎng)基用于酵母菌培養(yǎng)。均為實驗室配制。

1.2 儀器與設(shè)備

GeneAmp 9700 PCR儀 美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司；JS-680D凝膠成像系統(tǒng) 上海培清科技有限公司；3k15冷凍離心機 德國Sigma公司；UV-2450紫外-可見光分光光度計 日本島津公司；DYY-6B凝膠水平電泳儀 北京市六一儀器廠；AKTA蛋白純化系統(tǒng)美國GE Healthcare公司；1260半制備高效液相色譜儀、Zorbax SB-C18高效液相色譜半制備柱（9.4 mm×250 mm，5 μm） 美國安捷倫公司；CascadaTMAN超純水系統(tǒng) 美國PALL公司。

1.3 方法

1.3.1 產(chǎn)細菌素菌株的篩選鑒定

菌株篩選：適量泡菜汁涂布于含有1% CaCO3的MRS瓊脂平板中，在35 ℃培養(yǎng)2～4 d。觀察周圍是否有透明圈。挑取產(chǎn)生透明圈的112 株菌劃線純化后，過氧化氫酶活性檢測為陰性及革蘭氏染色為陽性的菌株共82 株，初步認為是乳酸菌株并保存。從初步分離的菌株中篩選產(chǎn)細菌素菌株。以金黃色葡萄球菌為指示菌，瓊脂平板打孔擴散法測定產(chǎn)菌素菌株的抑菌活性[16]。初步分離的乳酸菌在MRS培養(yǎng)基中35 ℃發(fā)酵24 h，8 000 r/min、4 ℃離心10 min，收集上清液并用0.22 μm濾膜過濾，濾液以4 mol/L NaOH溶液調(diào)整至pH 6.0～7.0，80 ℃加熱15 min，滅活發(fā)酵液中的蛋白酶防止對菌株所產(chǎn)細菌素降解。得到發(fā)酵無細胞上清液（cell-free supernatants，CFS），檢測得到11 株菌CFS有抑菌活性，再以蛋白酶K處理CFS，有7 株菌抑菌活性受到抑制，挑選1 株抑菌活性較強的菌株深入研究。

菌株形態(tài)特征及生理生化特征觀察：參照文獻[17]方法。

16S rDNA基因擴增測序與系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建：根據(jù)實驗室已有的16S rDNA基因通用引物，對分離的產(chǎn)細菌素乳酸菌菌株P(guān)CR擴增16S rDNA，擴增產(chǎn)物委托蘇州泓迅生物科技股份有限公司測序并通過BLAST在GenBank中進行同源性比較，利用MEGA軟件中的Neighbor-Joining構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.3.2 菌體生長動力學及細菌素的產(chǎn)生

培養(yǎng)至對數(shù)期的種子液按照1%接種量接種于裝有100 mL MRS培養(yǎng)基的250 mL錐形瓶中，培養(yǎng)基pH 5.8，35 ℃發(fā)酵24 h，每3 h取樣，測定OD600nm并繪制菌株生長曲線。同時按照1.3.1節(jié)方法制備CFS，以金黃色葡萄球菌為指示菌，檢測抑菌活性。抑菌活性單位的定義[18]：以金黃色葡萄球菌為指示菌，樣品經(jīng)最大稀釋后，打孔檢測仍產(chǎn)生清晰抑菌圈的最大稀釋倍數(shù)倒數(shù)作為1 個抑菌活性單位。

1.3.3 細菌素的制備及部分純化

篩選到的菌株在MRS培養(yǎng)基培養(yǎng)至對數(shù)期后，以1%的接種量接于100 mL MRS液體培養(yǎng)基中，35 ℃培養(yǎng)24 h，離心收集上清液，通過20%～80%飽和度硫酸銨鹽析，并透析至檢測不到硫酸銨。

透析后的粗抗菌液離子交換層析純化。以pH 6.5、20 mmol/L磷酸緩沖溶液平衡DEAE Sepharose Fast Flow層析柱，透析完全的樣品直接上樣，以含0～1.0 mol/L NaCl的磷酸緩沖液線性梯度洗脫，洗脫速率1 mL/min，2 mL/管收集，檢測波長280 nm。對收集的各洗脫峰檢測抑菌活性。

合并有抑菌活性的洗脫液并用超濾法濃縮后上樣于Sephadex G-15凝膠柱，用20 mmol/L pH 6.8磷酸緩沖液洗脫，流速為1 mL/min，2 mL/管收集，檢測波長280 nm。收集各峰對應(yīng)組分，抑菌活性檢測。

將經(jīng)過Sephadex G-15純化后的活性峰用Zorbax SB-C18色譜柱反相高效液相色譜（reversed phase-high performance liquid chromatography，RP-HPLC）純化，流動相為0.1%三氟乙酸（trifluoroacetic acid，TFA）溶液和80%乙腈溶液，采用線性梯度，64 min內(nèi)0.1% TFA溶液為100%～20%，80%乙腈溶液為0%～80%；流速10 mL/min，柱溫25 ℃，214 nm檢測，手動接收吸收峰樣品，濾紙片法檢測抑菌活性。

1.3.4 細菌素的分子測定與抑菌活性檢測

純化后的細菌素分子大小用12%的Tricine十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）測定。電泳結(jié)束后，將凝膠一分為二切開，一半染色，另一半經(jīng)充分洗滌脫去SDS后，覆蓋LB培養(yǎng)基做抑菌活性檢測。

1.3.5 細菌素抗菌譜測定

采用瓊脂平板打孔擴散法檢測細菌素的抗菌譜[19]。具體方法如下：制備對應(yīng)不同指示菌的瓊脂培養(yǎng)基平板，并在平板上涂布150 μL培養(yǎng)至對數(shù)期并稀釋到106CFU/mL的指示菌菌液，表面晾干后在培養(yǎng)基上打孔。將100 μL純化后的細菌素加入到不同指示菌對應(yīng)的培養(yǎng)基平板孔中，在不同指示菌的最適作用溫度下培養(yǎng)1～5 d，檢查平板抑菌圈情況，測定抑菌圈直徑大小。

1.3.6 酶、溫度和pH值對細菌素抑菌活性的影響

將部分純化的細菌素樣品分別與蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、脂肪酶、α-淀粉酶及β-淀粉酶在37 ℃孵育2 h。所有酶終質(zhì)量濃度5 mg/mL。酶處理后，樣品70 ℃加熱10 min，使酶失活。

探究溫度對細菌素抑菌活性的影響，將細菌素分別置于37、60、80、100、121 ℃等不同溫度下處理10～30 min。

探究pH值對細菌素抑菌活性的影響，將細菌素樣品使用HCl或NaOH將pH值調(diào)整至2、3、4、5、6、7、8、9，在室溫孵育4 h。

上述分析均采用部分純化的細菌素樣品。用瓊脂孔擴散法以金黃色葡萄球菌為指示菌進行抑菌活性分析，以未處理的細菌素為對照。

1.3.7 對金黃色葡萄球菌的抑制模式分析

為分析細菌素對金黃色葡萄球菌的抑菌模式做液體抑菌實驗。在2 支試管中分別接種金黃色葡萄球菌，37 ℃、180 r/min振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期，測定其OD600nm達到約0.5，向其中一支試管中添加部分純化的細菌素，使其濃度達到最低抑菌濃度，另一支試管添加相同體積的無菌水作對照，在37 ℃條件下繼續(xù)培養(yǎng)至26 h。每間隔1～5 h測定菌體OD600nm值，繪制金黃色葡萄球菌生長曲線。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

2 結(jié)果與分析

2.1 產(chǎn)細菌素菌株篩選鑒定

經(jīng)反復篩選選擇菌株Hlh32作為深入研究出發(fā)菌株。該菌株在MRS培養(yǎng)基平板上進行平板劃線35 ℃培養(yǎng)，菌落為圓形、凸起、表面光滑、白色。在25～40 ℃菌體可以生長，pH 4.5～7.0和NaCl 10%條件下菌株可生長。鏡檢及生理生化實驗顯示，菌株革蘭氏陽性、棒桿狀、無芽孢、過氧化氫酶陰性、明膠液化陰性、硝酸鹽還原陰性、吲哚實驗陰性。菌株16S rDNA序列BLAST同源性比對發(fā)現(xiàn)其與植物乳桿菌菌株（Lactobacillus plantarum）（MH571418）同源性高達99.5%，在系統(tǒng)發(fā)育樹中位于同一分支（圖1）。結(jié)合菌株的形態(tài)和生理生化特征，認為Hlh32為植物乳桿菌。近年來，Lv Xinran[16]、Wang[20]、Liu Hui[21]等也從植物乳桿菌發(fā)酵液中分離得到細菌素，但菌株來源不同其細菌素特性有所不同，因此從不同來源的樣品中分離產(chǎn)細菌素菌株對豐富產(chǎn)細菌素資源、尋求更有應(yīng)用價值的細菌素具有重要意義。

圖1 基于16S rDNA的菌株Hlh32系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.1 Phylogenetic tree of strain Hlh32 based on 16S rDNA gene sequence

2.2 菌株生長動力學及細菌素的產(chǎn)生

圖2 植物乳桿菌Hlh32生長動力學及細菌素的合成Fig.2 Growth kinetics and bacteriocin production of Hlh32

如圖2所示，植物乳桿菌Hlh32呈現(xiàn)典型的細菌生長曲線特性，0～3 h處于延遲期；3～9 h OD600nm快速升高，處于對數(shù)生長期；9～24 h菌體逐漸從對數(shù)生長期過渡到穩(wěn)定期。細菌素BacH32的合成從接種6 h開始，6～18 h BacH32抑菌活性急劇上升，18～24 h BacH32抑菌活性增加變得緩慢，21 h達到最大抑菌活性1 850 AU/mL且對應(yīng)OD600nm也達到最高。24 h抑菌活性略有下降?？梢钥闯鯞acH32從指數(shù)期開始合成，穩(wěn)定期到達最大抑菌活性，由此判斷植物乳桿菌Hlh32合成的BacH32屬于初級代謝產(chǎn)物且最佳培養(yǎng)時間為21 h，這與Yi Lanhua[22]、Perumal[23]等報道的細菌素合成曲線一致。而Lü Xin等[7]報道的干酪乳桿菌TN-2在發(fā)酵18 h后才開始產(chǎn)生細菌素，72 h達到最大抑菌活性。由此推測不同菌株其合成細菌素的機制不同。

2.3 細菌素BacH32的純化

圖3 植物乳桿菌Hlh32所產(chǎn)細菌素DEAE Sepharose Fast Flow洗脫曲線Fig.3 Elution curve of bacteriocin Hlh32 on DEAE Sepharose Fast Flow gel

如圖3所示，離子交換層析洗脫得到5 個洗脫峰，但只有洗脫峰3（對應(yīng)NaCl濃度0.18～0.28 mol/L）對指示菌有顯著抑菌活性。在該分離條件下，實現(xiàn)了蛋白組分與雜質(zhì)分子的初步分離，展現(xiàn)了該色譜分離的良好純化效果。

圖4 植物乳桿菌Hlh32所產(chǎn)細菌素Sephadex G-15洗脫曲線Fig.4 Elution curve of bacteriocin Hlh32 on Sephadex G-15 gel

如圖4所示，分子篩凝膠過濾層析分離出5 個洗脫峰，對每個洗脫峰打孔檢測抑菌活性，顯示最大的洗脫峰4，即對應(yīng)收集管35～40 管具有抑菌活性。通過洗脫圖譜看出，分子篩層析分離效率高，可以將其和大多數(shù)雜蛋白分開。

圖5 植物乳桿菌Hlh32產(chǎn)細菌素的HPLCFig.5 HPLC chromatogram of bacteriocin Hlh32

最后采用制備型RP-HPLC法對細菌素深度純化，洗脫曲線如圖5所示。得到多個洗脫峰，說明通過前面的兩種柱層析技術(shù)還不能完全將雜質(zhì)分開，制備液相分離效率較高。選擇較大的洗脫峰，通過濾紙片法檢測抑菌活性，保留時間28.4 min的收集峰P4具有明顯抑菌活性。

2.4 細菌素分子質(zhì)量測定結(jié)果

圖6 純化BacH32的Tricine SDS-PAGE分析及直接抑菌檢測結(jié)果Fig.6 Tricine SDS-PAGE analysis and antimicrobial activity of the purified bacteriocin

如圖6所示，在凝膠檢測平板上得到顯著抑菌條帶，該抑菌條帶對應(yīng)位置的凝膠上顯示相對單一的染色條帶，對照標準分子質(zhì)量蛋白，BacH32分子質(zhì)量約為6.7 kDa。通過凝膠分離原位抑菌檢測方法，能夠清楚、容易地顯示抑菌純化物位置，不需要通過額外的鑒定步驟，不僅簡化了實驗操作，而且有助于準確判斷純化細菌素分子質(zhì)量，使得結(jié)果更加直觀。本研究BacH32分子質(zhì)量在目前所報道的大部分細菌素分子質(zhì)量范圍內(nèi)，但比有些文獻報道的細菌素分子質(zhì)量大，如An Yu等[10]報道的植物乳桿菌細菌素M1-UVs300為3.4 kDa，Barbosa等[24]從意大利香腸中發(fā)現(xiàn)的植物乳桿菌MBSa4產(chǎn)生的細菌素2.3 kDa，Ahn等[25]從麥芽中發(fā)現(xiàn)的乳桿菌HW01產(chǎn)生的細菌素為6.0 kDa。將細菌素BacH32與其他植物乳桿菌細菌素分子質(zhì)量相比較未發(fā)現(xiàn)相同大小的細菌素，推測本研究的BacH32可能為新型的細菌素。

2.5 細菌素BacH32抑菌譜

如表1所示，BacH32對所有指示菌都具有不同程度的抑菌活性，但BacH32對于革蘭氏陽性菌的抑制活性顯著高于革蘭氏陰性菌。對于革蘭氏陽性菌中的金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌、表皮葡萄球菌抑菌活性最強，其次對于蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、單核細胞性李斯特菌也表現(xiàn)出了良好的抑菌活性。對革蘭氏陰性菌的抑制作用稍弱，對于銅綠假單胞菌和傷寒沙門氏菌的抑菌活性強于大腸桿菌和副溶血性弧菌的抑菌活性。除此之外，BacH32對真菌類菌株也顯示了良好的抑制能力。對白色念珠菌、假絲酵母及釀酒酵母都有一定的抑制活性。整體顯示，BacH32具有廣譜抑菌活性，而目前應(yīng)用于商業(yè)化生產(chǎn)的Nisin[25-26]主要抑制革蘭氏陽性細菌，因此其在使用中需要配合其他抗菌劑。近年來，具有良好的廣譜抑菌活性的細菌素較少，具備抑制單獨一類細菌的較多，如De Kwaadsteniet等[27]對革蘭氏陰性菌有抑制作用，但對革蘭氏陽性菌無活性；而Lee[28]、Hwanhlem[29]等報道的細菌素只對革蘭氏陽性的食品腐敗菌和食源性致病菌有抑制作用，而對革蘭氏陰性菌無效果。食品容易受到不同種類的腐敗菌和致病菌的污染，開發(fā)具有廣譜抑菌活性的細菌素更具有實際應(yīng)用價值。BacH32對本實驗供試菌株革蘭氏陽性菌、陰性菌及真核微生物均表現(xiàn)出抑菌活性，具有較好的開發(fā)天然食品防腐劑的潛力。

表1 細菌素BacH32的抗菌譜Table 1 Antimicrobial spectrum of bacteriocin BacH32

2.6 酶、溫度和pH值對BacH32抑菌活性的影響

BacH32在經(jīng)過蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等蛋白水解酶處理后，完全喪失抑菌活性（表2），而其抑菌活性不會受到脂肪酶和淀粉酶的作用，表明分子中不含有脂肪鏈或淀粉糖鏈結(jié)構(gòu)，這與Gao Yurong[30]、Wen[31]等報道的細菌素特性一致。細菌中發(fā)現(xiàn)的還有一類抗菌物質(zhì)——脂肽，其主要來源于芽孢桿菌，分子中多含由幾個非普通的氨基酸構(gòu)成的環(huán)狀多肽，大都不能被蛋白酶降解，同時分子中含有脂肪酸鏈[28]。而本研究BacH32容易被不同蛋白酶降解，沒有脂類或碳水化合物，故可以判斷本研究植物乳桿菌Hlh32菌株產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)是細菌素類。細菌素的蛋白質(zhì)特性使它可在人和動物的胃腸道中降解，因此可以在食品中用作天然防腐劑。

表2顯示，BacH32在37、60 ℃和80 ℃處理30 min ，抑菌活性幾乎保持不變，在121 ℃處理15 min，相對抑菌活性仍能保持74.5%。BacH32表現(xiàn)出良好的熱穩(wěn)定性。若將BacH32添加到食品中，對食品進行常規(guī)的巴氏殺菌或短時間的121 ℃滅菌，BacH32都可保持良好的活性。與文獻報道的細菌素相比[4,25,32]，本研究的BacH32在熱穩(wěn)定性方面更有優(yōu)勢。

植物乳桿菌Hlh32細菌素具有較好的pH值穩(wěn)定性，pH 2.0～9.0范圍，抑菌活性逐漸降低，在pH 7.0以下，相對抑菌活性都在93%以上，在pH值達到9.0時，抑菌活性顯著降低，但相對抑菌活性仍接近80%。本研究BacH32在酸性條件下穩(wěn)定性更好，這與Lv Xinran[16]、Castro[33]、Wayah[34]等報道的細菌素pH值穩(wěn)定性相類似；但相比于Zhu Xuan[35]、Zhang Ying[36]等報道的細菌素pH值穩(wěn)定性好。BacH32在酸性條件（pH 2～7）及堿性條件（pH 8～9）的優(yōu)良的穩(wěn)定性使其在食品防腐方面有更好更廣的應(yīng)用。

2.7 細菌素BacH32對金黃色葡萄球菌的抑制模式

圖7 細菌素BacH32對金黃色葡萄球菌的抑制作用Fig.7 Bacteriostatic effect of BacH32 on S. aureus

如圖7所示，實驗2 支試管在不添加BacH32之前（即培養(yǎng)3 h之前），生長曲線基本一致，在3 h時其中一支試管添加BacH32，隨后兩者生長曲線完全不同。不添加BacH32的金黃色葡萄球菌快速生長，進入指數(shù)期，到8 h后生長逐漸緩慢進入穩(wěn)定期，在培養(yǎng)到第26小時達到最大生長量，OD600nm為2.325。添加BacH32的指示菌3 h后即出現(xiàn)生長抑制，OD600nm隨后進入緩慢下降階段，培養(yǎng)26 h，OD600nm幾乎為0。表明BacH32不僅完全抑制了菌體的生長，而且使前期現(xiàn)存的菌體細胞裂解，說明BacH32對金黃色葡萄球菌有強烈的抑制作用。具有相似抑制作用的還有Lü Xin[7]、Abramsb[37]、Todorov[38]等報道的細菌素。

3 結(jié) 論

從泡菜中分離篩選得到1 株產(chǎn)細菌素的乳酸菌菌株Hlh32。通過菌體形態(tài)、生理生化實驗及16S rDNA基因序列比對分析確定該菌株為植物乳桿菌。采用兩種柱層析技術(shù)及RP-HPLC制備液相分離得到電泳純的BacH32，其分子質(zhì)量與文獻報道的植物乳桿菌來源的細菌素不同。抑菌實驗顯示BacH32對常見的食源性腐敗菌、致病菌如大腸桿菌、銅綠假單胞菌、傷寒沙門氏菌、副溶血性弧菌、蠟樣芽孢桿菌、單核細胞性李斯特菌、藤黃微球菌、金黃色葡萄球菌等革蘭氏陰性菌與革蘭氏陽性菌都具有抑菌活性，其中對革蘭氏陽性菌抑菌活性高于革蘭氏陰性菌，并且對供試菌株白色念珠菌、假絲酵母及釀酒酵母都有一定的抑制活性。多種蛋白酶分別處理BacH32，其抑菌活性完全喪失，表明純化的抗菌物質(zhì)是細菌素。穩(wěn)定性研究表明，BacH32在較高的溫度、酸性、中性環(huán)境下能保持很高的穩(wěn)定性，抗逆性較強。以上整體特性與文獻報道的細菌素相比，存在一定差異，由此推斷本研究從泡菜中分離的植物乳桿菌Hlh32所產(chǎn)生的BacH32可能為一種新的細菌素，其在食品防腐方面具有較好的優(yōu)勢，有潛力進一步開發(fā)為天然食品添加劑。