邵麗 王曉 徐淑飛 陸川 滕振勇

摘要?[目的]基于QuEChERS 前處理方法，建立GC-MS快速篩查花生中44種農(nóng)藥殘留。[方法]樣品經(jīng)0.1%甲酸乙腈提取，提取液經(jīng)MgSO4、PSA和C18凈化后，通過(guò)GC-MS檢測(cè)。[結(jié)果]44種農(nóng)藥在0.01～1.00 μg/mL線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.996，方法的定量限（LOQ）均可達(dá)0.01 mg/kg，通過(guò)實(shí)際樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)，44種農(nóng)藥在0.01 mg/kg的加標(biāo)回收率為87.8%～124.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為2.9%～12.3%。[結(jié)論]該方法適用于花生中農(nóng)藥殘留的篩查檢測(cè)及定量分析。

關(guān)鍵詞?氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用;農(nóng)藥殘留;篩查;花生

中圖分類號(hào)?TS207.5+3?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼?A?文章編號(hào)?0517-6611（2021）09-0182-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.09.050

Abstract?[Objective]A method for the simultaneous screening of 44 pesticide residues in peanut was developed by combining QuEChERS and GC-MS.[Method]The samples were extracted with 0.1% acetonitrile acetate， then cleaned up with primary secondary amine （PSA）， anhydrous magnesium sulfate （MgSO4） and C18.Finally， the samples were detected by GC-MS.[Result]The 44 pesticides had good linearity at 0.01 - 1.00 μg/mL， the correlation coefficients were all greater than 0.996， and the limit of quantification （LOQ） of the method could reach 0.01 mg/kg.The average recoveries of the 44 pesticides at spiked levels of 0.01 mg/kg ranged from 87.8%-124.2%，respectively with relative standard deviations of 2.9%-12.3%.[Conclusion]This method is suitable for screening， detection and quantitative analysis of pesticide residues in peanuts.

Key words?GC-MS;Pesticide residues;Screening;Peanut

我國(guó)是世界花生生產(chǎn)大國(guó)，同時(shí)也是花生貿(mào)易大國(guó)，年出口花生仁（果）及其制品占世界貿(mào)易量的47%。我國(guó)花生行銷世界60多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，主要市場(chǎng)為歐洲、東南亞、中東和日本。隨著國(guó)際農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易的深入開(kāi)展，發(fā)達(dá)國(guó)家將農(nóng)藥殘留作為限制農(nóng)產(chǎn)品出口的技術(shù)性貿(mào)易壁壘，不斷提高對(duì)進(jìn)口產(chǎn)品的檢驗(yàn)檢疫標(biāo)準(zhǔn)，這對(duì)我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品出口產(chǎn)生了較大的影響。我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2763—2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[1]，花生涉及農(nóng)藥87種，農(nóng)藥多殘留分析要參考多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)項(xiàng)目，這些不同的標(biāo)準(zhǔn)不僅前處理方法不同，而且檢測(cè)所需的分析儀器也不同，涉及的樣品前處理有分散固相萃取、基質(zhì)固相分散輔助、加速溶劑萃取、凝膠滲透色譜、在線凈化[2-7];分析方法有液相色譜、氣相色譜和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等[8-10]。另外，傳統(tǒng)的分析方法操作復(fù)雜、耗時(shí)較長(zhǎng)，很難滿足對(duì)農(nóng)藥多殘留高效快速篩查與分析的需求。因此，如何提高實(shí)驗(yàn)室農(nóng)藥殘留檢測(cè)能力，并科學(xué)運(yùn)用農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)，減少人們?cè)谑秤眠^(guò)程中的農(nóng)藥殘留危害風(fēng)險(xiǎn)，開(kāi)發(fā)高靈敏度分析方法和更可靠、更高效的定性手段顯得更為迫切。

隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，快速檢測(cè)、篩查方法不斷被應(yīng)用到農(nóng)藥殘留檢測(cè)各個(gè)領(lǐng)域。陳溪等[11]建立QuEChERS法與液相色譜-三重四級(jí)桿復(fù)合線性離子阱質(zhì)譜技術(shù)快速篩查和確證大米中205種農(nóng)藥殘留;鄧慧芬等[12]通過(guò)優(yōu)化QuEChERS前處理方法并結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)建立了蔬菜中105種典型殺蟲(chóng)劑、殺菌劑、除草劑、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的多殘留測(cè)定方法;孟志娟等[13]建立了SinChERS-Nano柱凈化結(jié)合GC-MS/MS 檢測(cè)水果中常見(jiàn)的50種農(nóng)藥殘留的分析方法，能夠?qū)λ卸噢r(nóng)藥殘留進(jìn)行篩查分析;張建瑩等[14]通過(guò)液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜法快速篩查蘋(píng)果與生菜中248種農(nóng)藥殘留。目前有關(guān)花生中多種農(nóng)藥殘留分析檢測(cè)方面的文獻(xiàn)鮮見(jiàn)報(bào)道，該研究建立花生中農(nóng)藥殘留檢測(cè)統(tǒng)一的樣品前處理方法，利用氣相-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用，建立花生中多種農(nóng)藥殘留、高靈敏度、快速篩查方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)花生中農(nóng)藥殘留的快速定性、定量。

1?材料與方法

1.1?儀器

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（7890A-7895C，美國(guó)Agilent 公司）;均質(zhì)儀（美國(guó)Polytron Devices公司）;渦旋振蕩儀（德國(guó)IKA公司）;高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)艾本德公司）;高純水發(fā)生器（美國(guó)Millipore公司）;0.22 μm 有機(jī)濾膜。

1.2?試劑

甲醇、乙腈、甲酸均為色譜純（德國(guó)Merck公司）;無(wú)水MgSO4、NaCl均為分析純;試驗(yàn)用水為Milli-Q 超純水;N -丙基乙二胺吸附劑（PSA）、十八烷基鍵合硅膠吸附劑（C18）（美國(guó)Supeco公司）。44種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品均為100 μg/mL（壇墨質(zhì)檢），再用乙腈配成2.00 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（-18 ℃避光存放）。采用空白樣品基質(zhì)液稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，配制0.01、0.05、0.10、0.50、1.00 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液。

1.3?樣品處理

1.3.1?提取。準(zhǔn)確稱取5 g（精確至0.01 g）花生仁樣品于50 mL塑料離心管中，加入5 mL水浸潤(rùn)30 min，加入20 mL乙腈，渦旋振蕩1 min，8 000 r/min離心10 min。吸取10 mL上清液至干凈的50 mL離心管中，加入4 g MgSO4、1 g NaCl，渦旋振蕩1 min，8 000 r/min離心10 min。

1.3.2?凈化。移取2 mL上清液置于裝有凈化粉末的離心管中（300 mg MgSO4，150 mg PSA，50 mg C18），振蕩混勻3 min，8 000 r/min離心10 min，取凈化液1 mL，過(guò)有機(jī)濾膜后，GC-MS檢測(cè)。

1.4?色譜條件

進(jìn)樣口溫度250 ℃;柱流量1.0 mL/min;色譜柱為HP-5MS柱（30 m，0.32 mm×0.25 μm）（美國(guó)Agilent公司）;梯度升溫程序：70 ℃（2 min）—10 ℃/min—160 ℃—10 ℃/min—280 ℃（10 min）;進(jìn)樣量2 μL;不分流進(jìn)樣;流速1 mL/min。

1.5?質(zhì)譜條件

離子源采用 EI 離子化方式;離子源溫度230 ℃;四級(jí)桿溫度150 ℃;采集模式為SIM離子檢測(cè)。

2?結(jié)果與分析

2.1?樣品前處理方法的優(yōu)化

丙酮、乙腈、甲醇通常用QuEChERS方法樣品前處理提取溶劑，乙腈在提取農(nóng)藥極性范圍和選擇性上明顯優(yōu)于其他2種溶劑，并且乙腈能有效減少油脂等對(duì)農(nóng)藥的干擾，因此采用乙腈溶液作為提取溶劑[15]。

常用的鹽析劑包括MgSO4、MgCl2、NaCl、NaSO4。該研究分別對(duì)此進(jìn)行了分析比較，結(jié)果表明，MgSO4和NaCl共同使用時(shí)，提取效率最高。另外，QuEChERS方法在凈化過(guò)程中，

常用PSA、GCB、C18除去樣品基質(zhì)中的有機(jī)酸、色素、脂肪等，因此在凈化過(guò)程中添加PSA和C18吸附劑用于吸附花生樣品中的脂肪酸、氨基酸、脂肪等有機(jī)物。同時(shí)通過(guò)參考AOAC 2007.01方法[16]，確定加入無(wú)水MgSO4 300 mg、PSA 150 mg、C18 50 mg時(shí)，44種農(nóng)藥的平均回收率為87.8%～124.2%。

2.2?色譜條件的優(yōu)化

2.2.1?進(jìn)樣量的選擇。

試驗(yàn)分別選擇進(jìn)樣1、2、3 μL，發(fā)現(xiàn)進(jìn)樣量2 μL時(shí)，色譜峰型較好，并且檢測(cè)限能達(dá)到 GB 2763—2019中規(guī)定的農(nóng)藥殘留限量。44種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在SIM模式下的總離子流圖見(jiàn)圖1。

2.3?方法學(xué)驗(yàn)證

用空白花生樣品基質(zhì)液作為溶劑制備標(biāo)準(zhǔn)工作曲線溶液，上機(jī)進(jìn)行測(cè)定，以目標(biāo)物的質(zhì)量濃度x（μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積y為縱坐標(biāo)繪制工作曲線。結(jié)果顯示，44種農(nóng)藥在0.01～1.00 μg/mL線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.996。GB 2763—2019中規(guī)定的農(nóng)藥殘留最低限量標(biāo)準(zhǔn)為0.01 mg/kg，該研究的重點(diǎn)在于快速篩查花生中的目標(biāo)化合物，所以對(duì)待測(cè)化合物進(jìn)行0.01 mg/kg加標(biāo)水平的回收試驗(yàn)，平行測(cè)定6次，方法的回收率為84.8%～124.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為2.9%～10.2%（表1），精密度和準(zhǔn)確度符合相關(guān)要求。

2.4?實(shí)際花生樣品中44種農(nóng)藥殘留的分析檢測(cè)

將建立的方法用于市場(chǎng)上購(gòu)買的5種花生仁中44種農(nóng)藥殘留的快速篩查分析，發(fā)現(xiàn)有2種農(nóng)藥疑是陽(yáng)性，對(duì)其進(jìn)行譜庫(kù)檢索進(jìn)一步判定，結(jié)果顯示在5個(gè)實(shí)際樣品中有1個(gè)樣品檢出了多效唑、腈苯唑，其測(cè)定值分別為0.14、0.13 mg/kg。

3?結(jié)論

該研究結(jié)合QuEChERS前處理方法，建立了GC-MS快速篩查花生中44種農(nóng)藥殘留，該方法優(yōu)化了GC-MS分析參數(shù)及QuEChERS方法，通過(guò)加標(biāo)回收試驗(yàn)對(duì)方法的線性范圍、方法定量限作出了限定，該方法滿足GB 2763—2019中規(guī)定的農(nóng)藥殘留最低限量標(biāo)準(zhǔn)。該研究提高了花生中農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法定性的準(zhǔn)確性和定量水平以及檢測(cè)效率，為花生的風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)提供了一種有力的技術(shù)手段。

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