王明金 王愛民 劉春花 張旭 李勇軍 王永林 林昌虎

【摘 要】 目的：建立蓖麻葉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法，對提升蓖麻葉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進行研究。方法：采用顯微鑒別方法鑒別蓖麻葉粉末顯微特征，建立薄層色譜法對蓖麻葉進行定性鑒別;參考《中國藥典》（2015版）通則，對蓖麻葉水分、總灰分、水溶性浸出物進行研究。結(jié)果：顯微特征明顯，葉表皮細胞呈不規(guī)則形狀，氣孔平軸式，直徑21～23 μm;導(dǎo)管多為螺紋，直徑3～42 μm;草酸鈣簇晶較多，直徑9～39 μm，有的簇晶排列成行;晶鞘纖維多，直徑8～14 μm;纖維散在，直徑7～23 μm，壁厚，紋孔明顯。薄層色譜結(jié)果表明主斑點清晰，分離度好，與對照藥材在相同位置處顯示相同顏色的斑點。11批蓖麻葉水分含水量平均值為13.85%;總灰分平均值為13.0%;水溶性浸出物平均值為18.0%。結(jié)論：該方法穩(wěn)定、簡便可靠，且重現(xiàn)性好，能為蓖麻葉的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 蓖麻葉;顯微鑒別;薄層色譜法;水溶性浸出物;質(zhì)量控制

【中圖分類號】R284.1 【文獻標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2021）08-0040-05

Abstract：Object To establish a quality standard methods of Ricini Folium.Methods The microscopic characteristics of Ricini Folium powder were identified by means of microscopic identification， thin layer chromatography （TLC） method was established for the qualitative identification of Ricini Folium.According to the general rules of Chinese pharmacopoeia （2015 edition）， the water content， total ash content and water-soluble extractives of Ricini Folium were studied.Result Leaf epidermal cells are irregular in shape， and stomata type is plane axis with diameter size of 21 to 23 μm.Spiral vessels with 3 to 42 μm in diameter are observed.Calcium oxalate clusters are numerous with 9 to 39 μm in diameter， some of them are arranged in rows.There are many crystal sheath fibers with a diameter of 8 to 14 μm and the fibers are scattered with thick walls and obvious pits.The results of TLC showed that the main spots were clear with well resolution， and the spots color and Rf value were consistent with the reference herb.The average moisture content of 11 Ricini folium is 13.85%; The average value of total ash is 13.0%; The average value of water soluble extract is 18.0%.Conclussin The method is stable， simple， reliable， and reproducible， which can provide basis for improvement of the quality control of Ricuni Folium.

Key words：Ricini Folium; Microscopic Identification; Thin-layer Chromatography （Tlc）;Water-soluble Extras; Quanity Control

蓖麻葉為大戟科植物蓖麻 Ricinus communis L.的新鮮或干燥的葉。蓖麻為一年生粗壯草本或草質(zhì)灌木，高達5米;小枝、葉和花序通常被白霜，莖多液汁 [1-2]。蓖麻葉味苦、辛，性平，小毒，具有清熱解毒、拔毒消腫、祛風(fēng)除濕的功效，主要用于治療風(fēng)濕麻痹、咳嗽痰喘、子宮下垂、癰瘡腫毒等，為貴州少數(shù)民族用藥[3]。據(jù)報道，蓖麻葉中含有含有生物堿、揮發(fā)油、萜類等成分[4-8]。蓖麻資源豐富，除了《中國藥典》收載的蓖麻子和蓖麻油[9]，蓖麻葉也具有良好的藥用價值和應(yīng)用前景。但是目前關(guān)于蓖麻葉的質(zhì)量控制方法尚不完善，僅收載于《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003版中，質(zhì)量控制項目簡單，僅有性狀鑒定。因此，本研究采用顯微鑒別法、薄層色譜（TLC）對蓖麻葉進行定性研究，同時檢查項增加水分、總灰分以及浸出物，為完善蓖麻葉的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 50i顯微鏡及DS-Fi2顯微成像系統(tǒng)（日本尼康公司）; REPROSTAR3薄層數(shù)碼成像系統(tǒng)（瑞士CAMAG）;EL204電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司];AE240十萬分之一電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）;CQ250A-TS超聲波清洗機（250 W，頻率40 kHz，上海躍進醫(yī)用光學(xué)器械廠）;DK-98-Ⅱ型水浴鍋（天津泰斯特有限公司）;WP-ΜP-II-20實驗室超純水機（四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司）。

1.2 試藥 水合氯醛（AR，國藥集團化學(xué)試劑有限公司），丙三醇（AR，天津市致遠化學(xué)試劑有限公司）;氫氧化鉀、無水乙醇、甲醇、乙醚購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司，三氯甲烷、乙酸乙酯購自上海申博化工有限公司，硫酸購自重慶川東化工（集團）有限公司，環(huán)己烷、磷鉬酸、香蘭素購自天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，石油醚購自科安隆博華（天津）醫(yī)藥化學(xué)有限公司，乙酸丁酯購自國營重慶無機化學(xué)試劑廠，以上試劑均為分析純;三乙胺（AR，國藥集團化學(xué)試劑有限公司）;

青島海洋硅膠G板（青島海洋化工廠分廠）;煙臺江友黃海硅膠HSG板（煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司）;青島鼎康硅膠G板（青島鼎康硅膠有限公司）。

11批的蓖麻葉（批號：20170816、20170816、20170901、20170902、20180701、20180715、20180720、20180722、20180726、20180801、20180803），分別產(chǎn)自貴州貞豐，貴州貞豐，貴州平塘，貴州安順，貴州鎮(zhèn)寧，貴州金沙，貴州興義，貴州興義，貴州金沙，貴州盤州，貴州關(guān)嶺。所有藥材經(jīng)貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院張旭副教授鑒定為大戟科植物蓖麻Ricinus communis L.[JP+1]的干燥葉，以來自鎮(zhèn)寧的樣品（批號：20180701）為對照藥材，代表性標(biāo)本保存于貴州醫(yī)科大學(xué)貴州省藥物制劑重點實驗室。[JP]

2 實驗方法

2.1 顯微鑒別 蓖麻葉粉碎，過4號篩，挑去少許粉末置載玻片上，滴加蒸餾水、水合氯醛試液（必要時加熱透化），蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察，記錄拍照。

2.2 薄層色譜鑒別 取本品粉末1 g，加無水乙醇10 mL，冷浸20 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取蓖麻葉對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各1 μL，分別點于同一硅膠G板上，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇（25∶4∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。

2.3 水分、總灰分、水溶性浸出物測定取本品粉末（過二號篩）2 g，精密稱定，照《中國藥典》（2015版）通則0832水分測定法（第二法 烘干法）測定[10]102。

取本品粉末2 g，照《中國藥典》（2015版）通則2302 灰分測定法（總灰分測定法）測定[10]204，根據(jù)殘渣重量，計算本品中總灰分的含量（%）。

取本品粉末（過二號篩）2 g，精密稱定，置100 mL的錐形瓶中，精密加水50 mL，照《中國藥典》（2015版）通則2201浸出物測定法（水溶性浸出物測定法 熱浸法）測定[10]202，以干燥品計算本品中水溶性浸出物的含量（%）。

3 實驗結(jié)果

3.1 顯微鑒別結(jié)果 經(jīng)過對多批蓖麻葉進行粉末鑒別試驗，對其特有的結(jié)構(gòu)進行總結(jié)，其粉末顯微結(jié)構(gòu)如圖1所示，本品粉末為深綠色。葉表皮細胞呈不規(guī)則形狀，氣孔呈平軸式，直徑21～23 μm;導(dǎo)管多為螺紋，直徑3～42 μm;草酸鈣簇晶較多，直徑9～39 μm，有的簇晶排列成行;晶鞘纖維多，直徑8～14 μm;纖維散在，直徑7～23 μm，壁厚，紋孔明顯。

3.2 薄層鑒別結(jié)果

3.2.1 系統(tǒng)適用性試驗 照上述2.2的方法對蓖麻葉進行薄層色譜鑒別。結(jié)果如圖2所示，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置處，顯相同顏色的斑點。

3.2.2 耐用性試驗

3.2.2.1 不同品牌硅膠G板考察結(jié)果 為了評價該方法的實用性和可靠性，按擬定色譜條件，分別考察青島海洋硅膠G板、煙臺江友黃海硅膠HSG板和青島鼎康硅膠G板的展開效果。結(jié)果如圖3所示，上述三種品牌硅膠G薄層色譜板均能較好的對斑點進行分離。

3.2.2.2 不同展開溫度的考察 按擬定色譜條件，分別在20℃、25℃、35℃下展開，相對濕度為50%下展開，考察不同溫度對展開的影響。結(jié)果如圖4所示，不同溫度下供試品色譜中，各個斑點清晰，溫度在20～35℃均能較好的鑒別蓖麻葉，說明溫度對該方法的展開結(jié)果影響不大。

3.2.2.3 不同展開濕度的考察 按擬定色譜條件，分別在濕度30%、50%、70%下展開，考察不同相對溫度對展開的影響。結(jié)果如圖5所示，各斑點顯示清晰，相對濕度在30%～70%之間均能較好的鑒別蓖麻葉，說明相對濕度對該方法下的試驗結(jié)果影響不大。

3.2.3 穩(wěn)定性試驗 每天制備一份供試品溶液，連續(xù)3 d，室溫保存，在第4天再分別制備一份供試品溶液和對照藥材溶液，將不同放置時間的供試品溶液點于同一硅膠G板上，展開，顯色，以考察供試品溶液的穩(wěn)定性。對穩(wěn)定性考察結(jié)果如圖6所示，供試品溶液在室溫下放置72 h穩(wěn)定性良好。

2.2.4 樣品鑒別結(jié)果 以鎮(zhèn)寧（批號20180701）為對照藥材，照建立的薄層色譜鑒別方法對所收集的10批蓖麻葉鑒別結(jié)果如圖7所示，供試品色譜中，在與對照藥材相同位置處，顯示相同顏色的斑點。

3.3 水分、總灰分、水溶性浸出物測定結(jié)果 照2.3項下方法測定水分、總灰分、水溶性浸出物，分別計算結(jié)果，結(jié)果見表1。11批干蓖麻葉水分平均含量范圍為9.69%～13.8%，平均值為13.85%;總灰分含量范圍為8.53%～12.12%，平均值為10.39%;水溶性浸出物含量范圍為16.34%～24.48%，平均值為20.51%。

3 討論與小結(jié)

3.1 顯微鑒別方法的考察 中藥鑒定方法有傳統(tǒng)鑒定方法和新技術(shù)方法，性狀鑒定、來源鑒定、理化鑒定、顯微鑒定是傳統(tǒng)中藥鑒定的主要四類方法，其中顯微鑒定是目前中藥鑒別的主要方法之一[11-12]。中藥顯微鑒定是應(yīng)用顯微技術(shù)對中藥進行分析或鑒定，即應(yīng)用顯微鏡對中藥材的組織、細胞或內(nèi)含物等特征進行鑒別的一種鑒別方法[13]。此次試驗鑒定的為蓖麻葉，屬于葉類中藥，大部分根、莖、葉、花、果實、根皮、莖皮類均可采用粉末制片法[14]，因此采用粉末制片法對蓖麻葉進行顯微鑒定，該方法簡單、快速，能清晰有效地觀察到蓖麻葉粉末中的特征顯微結(jié)構(gòu)，能有效的鑒定蓖麻葉。

3.2 提取條件及展開系統(tǒng)的考察 薄層色譜法是在合適大小的玻璃板上，將硅膠、氧化鋁、聚酰胺鍵等吸附劑制成的固定相均勻的鋪在板上，然后將樣品溶液點于薄層板上，在適當(dāng)?shù)恼归_容器中用合適的展開溶劑展開，當(dāng)展開到適當(dāng)距離時取出，顯色，最后將所得色譜圖同標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)按同法所得的色譜圖比較，用于定性、定量試驗[15-16]。此次試驗通過對不同提取方法、提取溶劑、提取時間等因素的考察，確定最佳提取條件為本品粉末1 g，加無水乙醇10 mL，冷浸20 min，濾過，取濾液作為供試品溶液，該方法簡單易行。同時考察了不同展開劑和檢視方法，確定以石油醚-乙酸乙酯-甲醇（25∶4∶0.1）為最終的展開系統(tǒng)，以磷鉬酸試液為顯色劑，結(jié)果顯示分離度好，斑點清晰。同時對不品牌的薄層色譜板、不同溫度、不同濕度，穩(wěn)定性進行考察，結(jié)果顯示該方法可靠、穩(wěn)定，最終用于11批樣品的鑒定，均能較好的鑒定各批蓖麻葉藥材。

3.3 小結(jié) 本研究所建立的蓖麻葉質(zhì)量控制方法具有簡便、穩(wěn)定和可靠的特點，顯微鏡下觀察到氣孔為平軸式，導(dǎo)管為螺紋，草酸鈣簇晶存在于葉肉薄壁細胞中，晶鞘纖維多，纖維散在，同時測量了各組織的直徑，以上特征均可作為鑒定蓖麻葉粉末特征的依據(jù);薄層色譜結(jié)果顯示主斑點顯示清晰，且各斑點之間分離度良好，在相同位置與對照藥材顯示相同顏色的斑點，由此進一步說明所建立的方法穩(wěn)定、可靠、重現(xiàn)性好，適用于蓖麻葉的鑒別;水分、總灰分、浸出物結(jié)果顯示11批蓖麻葉水分平均含量范圍9.69%～13.8%，平均含量為13.85%;總灰分平均含量范圍為8.53%～12.12%，平均含量為10.39%;浸出物平均含量范圍為16.34%～24.48%，平均含量為20.51%。因此可暫定水分、總灰分、浸出物分別不得超過15%、13%、18%。11批蓖麻葉的水分、總灰分、浸出物含量存在差異可能與藥材的不同產(chǎn)地、不同氣候氣候、采收時間有關(guān)。綜上，本實驗較為系統(tǒng)的研究了蓖麻葉質(zhì)量控制方法，并且該方法穩(wěn)定、簡便可靠，能為蓖麻葉的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

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（收稿日期：2020-10-07 編輯：程鵬飛）