許博文，李 娟，李 杰，張瀟瀟，吳靜遠(yuǎn)，曹璐暢，但文超

（1.中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京 100053；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 10002）

2018年全球癌癥研究預(yù)測，食管癌（esophagus cancer，EC）在惡性腫瘤中發(fā)病率居第9位，死亡率居 第6位［1］，我 國EC患 病 率 和 死 亡 率 排 全 球 第5位［2］。此外，因占位壓迫引起以進(jìn)行性吞咽困難為主的消化道癥狀及化放療的毒副反應(yīng)，顯著影響生存 質(zhì) 量［3］。既 往 研 究 證 實(shí)［4，5］，中 醫(yī) 藥 在 輔 助 治 療EC增效減毒，改善生存質(zhì)量，明顯延長無病生存期等發(fā)揮積極作用。因此，尋求中醫(yī)藥的協(xié)同治療，對豐富EC治療具有重大的臨床意義與實(shí)踐價(jià)值。

芪術(shù)郁靈湯［6］是筆者團(tuán)隊(duì)在中國中醫(yī)科學(xué)院名老中醫(yī)孫桂芝教授經(jīng)驗(yàn)方二術(shù)郁靈丹［7］的基礎(chǔ)上化裁形成，全方包括：黃芪、莪術(shù)、白術(shù)、郁金、威靈仙、石見穿。前期研究證實(shí)［8］，芪術(shù)郁靈湯可顯著改善EC術(shù)后臨床癥狀和生存質(zhì)量。即芪術(shù)郁靈湯在EC治療中存在很大的研究價(jià)值，但其分子生物學(xué)機(jī)制尚不清楚。

基于中藥復(fù)雜系統(tǒng)特性，可能存在協(xié)同或拮抗作用，若是采用單一的機(jī)制研究不能體現(xiàn)中醫(yī)藥治療疾病的整體性與多向性，也難以闡釋本方對EC的機(jī)制。本研究引入具備多向調(diào)節(jié)的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法，通過構(gòu)建各成分間網(wǎng)絡(luò)來分析其相互關(guān)系，充分關(guān)注網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，可系統(tǒng)闡述中藥復(fù)方的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制［9］，旨在探討芪術(shù)郁靈湯治療EC的分子生物學(xué)機(jī)制，為后續(xù)基礎(chǔ)與臨床研究提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 篩選芪術(shù)郁靈湯的活性成分與靶標(biāo)

在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫和分析平臺（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP，http：//tcmspw.com/tcmsp.php）檢索芪術(shù)郁靈湯各中藥的化學(xué)成分。據(jù)ADME原則，類藥性（drug likeness，DL）和口服利用度（oral bioavailability，OB）均是篩選藥物的關(guān)鍵參數(shù)［10］，數(shù)值越大功能越強(qiáng)，故定為OB≥30%且DL≥0.18 。并收集既往文獻(xiàn)研究中證實(shí)各中藥中具有抗EC活性的化合物，對篩選結(jié)果進(jìn)行補(bǔ)充與完善，獲得候選化合物。將候選化合物在DrugBank（https：//www.drugbank.ca/）中匹配靶點(diǎn)，并經(jīng)Uniprot（https：//www.uniprot.org/）校正為標(biāo)準(zhǔn)基因名稱。以Probability＝1為條件在SwissTargetPrediction（http：//www.swisstargetprediction.ch/）對候選化合物進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測，將兩者匯總?cè)ブ睾蟮玫剿幬锇袠?biāo)。

1.2 篩選食管癌靶點(diǎn)

在人類基因注釋數(shù)據(jù)庫（GeneCards，https：//www.genecards.org/）、在線人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫（Online Mendelian Inheritance in Man，OMIM，https：//omim.org/）、DrugBank、治 療 靶 點(diǎn) 數(shù) 據(jù) 庫（Therapeutic Target Database，TTD，http：//db.idrblab.net/ttd/）、DisGeNET（https：//www.disgenet.org/）等檢索“Esophagus cancer”。在GeneCards數(shù)據(jù)庫中，若靶點(diǎn)過多宜設(shè)定score大于中位數(shù)的目標(biāo)靶點(diǎn)作為潛在靶點(diǎn)［11］，匯總其余疾病數(shù)據(jù)庫后去除重復(fù)值，獲得疾病靶點(diǎn)。

1.3 “中藥-化合物-靶點(diǎn)-疾病”構(gòu)建

以Venny（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/）對藥物與疾病靶點(diǎn)取交集獲得共同靶點(diǎn)，繪制韋恩圖，并在Cytoscape3.7.2 構(gòu)建“中藥-化合物-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)。以“節(jié)點(diǎn)”（Node）代表屬性類型，如中藥、化合物、靶點(diǎn)和疾病，“邊”（Edge）代表交互關(guān)系。采用Cytoscape內(nèi)置Network Analyzer分析網(wǎng)絡(luò)，重點(diǎn)關(guān)注連接度（Degree），連接度越大，涉及的生物功能越多，重要性也就越高，借以研究芪術(shù)郁靈湯較為重要的成分。

1.4 構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)

為探究候選基因間的交互作用，在STRING（https：//string-db.org/）構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（Protein-Protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)。并用BioGrid、InWeb_IM、OmniPath等數(shù)據(jù)庫進(jìn) 行PPI的挖掘分析，如果子網(wǎng)絡(luò)包含3至500種蛋白質(zhì)，則應(yīng)用分子復(fù)合物檢測算法（MCODE）來識別密集連接的網(wǎng)絡(luò)特征，篩選核心網(wǎng)絡(luò)模塊。

1.5 富集分析

借助Metascape（http：//metascape.org/）對候選基因行基因本位（gene ontology，GO）和京都基因與基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）分析。GO包括 分子功能（molecular function，MF）、生物過程（biological process，BP）和細(xì)胞組成（cellular component，CC），以詮釋抗腫瘤生物過程；KEGG則研究主要抗腫瘤信號通路。篩選20個(gè)具有顯著性差異的GO和KEGG，用R軟件對結(jié)果進(jìn)行可視化分析。基于顯著通路映射相關(guān)靶標(biāo)，構(gòu)建“基因-通路”網(wǎng)絡(luò)以進(jìn)一步篩選芪術(shù)郁靈湯治療EC關(guān)鍵靶基因。

2 結(jié)果

2.1 活性成分獲取

在TCMSP中檢索芪術(shù)郁靈湯各中藥成分，雖部分化合物OB和DL值不符合要求，通過查看化合物“Related Disease”，納入包含“Esophagus cancer”的化合物，共獲化合物黃芪22個(gè)、莪術(shù)5個(gè)、白術(shù)10個(gè)、郁金20個(gè)、威靈仙8個(gè)、石見穿4個(gè)。經(jīng)文獻(xiàn)補(bǔ)充可干預(yù)EC的化合物，黃芪有AstragalosideⅣ［12］，莪 術(shù) 有curcumol［13］，白 術(shù) 有atractylenolide I、atractylenolideⅡ、atractylenolideⅢ［14］和atractylodes macrocephala［15］，郁金有curcumin［16］，石見穿有ursolic acid［17］。

2.2 藥病靶點(diǎn)獲取

在DrugBank中共獲靶點(diǎn)353個(gè)；在SwissTargetPrediction中得到87個(gè)預(yù)測靶點(diǎn)，將所有靶點(diǎn)匯總后去重，共得到412個(gè)藥物靶點(diǎn)。在Genecards、OMIM、DrugBank、TTD、DisGeNET分 別 得 到3 526、3640、64、9、672個(gè)靶點(diǎn)，匯總并去除重復(fù)值，共獲得5884個(gè)疾病靶點(diǎn)。應(yīng)用Venny取交集，得到297個(gè)共同靶點(diǎn)，經(jīng)靶點(diǎn)映射，獲得47個(gè)有效化合物，見圖1、表1。

圖1 韋恩圖Fig1 Venny diagram

表1 芪術(shù)郁靈湯活性成分Tab1 Active ingredients of Qizhu Yuling decoction

2.3 “中藥-化合物-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)圖

該網(wǎng)絡(luò)圖由351個(gè)節(jié)點(diǎn)和1121條邊組成，見圖2?；?合 物 度 值 排 名 前7為quercetin、kaempferol、GLY、ursolic acid、naringenin、formononetin、isorhamnetin，分別對應(yīng)164、60、59、55、38、32、31，這可能是芪術(shù)郁靈湯治療EC較為重要的活性成分。考慮到所獲候選靶點(diǎn)較多，選取度值≥9的靶點(diǎn)進(jìn)行展示，見表2。

圖2 “中藥-化合物-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)Fig2 Network diagram of"herb?compound?target?disease"

表2 候選靶點(diǎn)信息（Degree≥9）Tab2 Candidate target information（Degree≥9）

2.4 PPI網(wǎng)絡(luò)圖

為展示更為重要的PPI網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)，剔除21個(gè)游離節(jié)點(diǎn)，選取Drgree≥7進(jìn)行圖示，見圖3。該網(wǎng)絡(luò)中STAT3、MAPK1、TP53、MAPK3、AKT1、JUN、PIK3R1、SRC等存在較多的交互關(guān)系。

圖3 PPI網(wǎng)絡(luò)圖（Degree≥7）Fig3 PPI network diagram（Degree≥7）

PPI復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)中存在部分密度較高的區(qū)域稱為module，該區(qū)域內(nèi)的網(wǎng)絡(luò)具有較高的生物學(xué)意義。為更精確地分析芪術(shù)郁靈湯治療EC的作用機(jī)制，得到核心PPI網(wǎng)絡(luò)后，有必要通過MCODE進(jìn)一步識別其內(nèi)在module［11］，見圖4。根據(jù)Log10（P）值，保留module中3個(gè)最佳評分的生物學(xué)進(jìn)程對進(jìn)行功能描述，見表3。

表3 芪術(shù)郁靈湯治療EC的PPI網(wǎng)絡(luò)內(nèi)部潛在module功能描述（前3位）Tab3 Description of potential module function inside PPI network of Qizhu Yuling decoction in treatment of EC（top3）

圖4 芪術(shù)郁靈湯治療EC核心PPI網(wǎng)絡(luò)內(nèi)部潛在module網(wǎng)絡(luò)Fig4 Qizhu Yuling decoction in the treatment of EC core PPI network internal latent module network

2.5 氣泡圖

GO顯示共有2413個(gè)結(jié)果富集，其中2000個(gè)BP，133個(gè)CC，280個(gè)MF，KEGG富集119條通路。據(jù)neg.Log10（P）值排序，選擇20個(gè)用R語言繪制氣泡圖，見圖5。圖左側(cè)為富集名稱，氣泡顏色由紅到藍(lán)代表neg.Log10（P）值由大到小，氣泡越大代表該通路的基因計(jì)數(shù)越多，橫軸代表輸入基因占該通路基因的比率。

從圖5可知，涉及的主要GO有氧化應(yīng)激（oxidative stress）、細(xì)胞周期（cell cycle）、凋亡（apoptotic）、細(xì)胞死亡（cell death）、轉(zhuǎn)錄因子（transcription factor）、膜傳遞（membrane transmission）、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)（signal transduction）及受體的活性與結(jié)合（related receptor activity and binding）。KEGG主 要包括癌癥途徑（Pathways in cancer）、細(xì)胞凋亡（Apoptosis）、自 噬（Autophagy）、MAPK signaling pathway、NF-kappa B signaling pathway、PI3K-Akt signaling pathway等。

圖5 GO、KEGG氣泡圖Fig5 GO and KEGG bubble diagram

2.6 “基因-通路”網(wǎng)絡(luò)圖

基于顯著差異的KEGG及所映射的基因，構(gòu)建“基因-通路”網(wǎng)絡(luò)，見圖6。該網(wǎng)絡(luò)共有20條信號通路、138個(gè)基因和476條關(guān)系。從網(wǎng)絡(luò)中可知，AKT1、MAPK1、MAPK3、PIK3R1、RAF1、RELA具有較大的Degree，可能是芪術(shù)郁靈湯干預(yù)EC的關(guān)鍵靶基因。

圖6 “基因-通路”網(wǎng)絡(luò)圖Fig6 "Gene?pathway"network diagram

3 討論

研究表明，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)聯(lián)合中醫(yī)藥治療腫瘤有明確療效［18］。食管癌歸屬中醫(yī)“噎膈”范疇，《景岳全書·噎膈》載：“噎膈……必以憂愁思慮，積勞積郁……蓋憂思過則氣結(jié)，氣結(jié)則施化不行……氣不行則噎膈病于上”。外因責(zé)之飲食不節(jié)、七情內(nèi)傷；內(nèi)因責(zé)之脾腎漸虛，屬局部癌毒實(shí)邪而全身消耗虛弱的疾病。由情志失調(diào)、脾胃虛弱，致氣機(jī)失衡，痰瘀互結(jié)，“噎膈”而生［19］，治以理氣扶正，化痰消癥。芪術(shù)郁靈湯是在二術(shù)郁靈丹基礎(chǔ)上重視調(diào)暢氣機(jī)，增加理氣扶正藥物，減少活血?jiǎng)┖臍庵住?/p>

本方以黃芪、莪術(shù)為君，甘緩行氣、破血消積、益氣扶正而不助邪。郁金、白術(shù)為臣，疏肝健脾，助君藥益氣活血。威靈仙、石見穿為佐，共奏軟堅(jiān)散結(jié)、去腐生新之功。且君藥現(xiàn)代藥理學(xué)研究有明確的抗EC作用，如黃芪有效成分［20］可調(diào)控AKT信號通路誘導(dǎo)人食道癌HCE-4細(xì)胞凋亡；莪術(shù)提取物［21］可激活Caspase-9、Caspase-3和PARP，抑制Bcl-2，誘導(dǎo)人食管癌TE-8細(xì)胞凋亡。

3.1 潛在有效成分

本研究預(yù)測槲皮素（quercetin）、山柰酚（kaempferol）、glycine（甘氨酸）、ursolic acid（熊果酸）、naringenin（柚皮素）、formononetin（刺芒柄花素）、isorhamnetin（異鼠李素）等為干預(yù)EC的主要活性成分。

Quercetin通過下調(diào)Bcl-2蛋白與上調(diào)Bax蛋白表達(dá)，誘導(dǎo)EC細(xì)胞凋亡［22］，也呈劑量依賴性地抑制EC細(xì)胞增殖、侵襲、遷移及血管新生［23］，還能誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生保護(hù)性自噬，以增強(qiáng)對腫瘤抑制作用［24］。Kaempferol顯著抑制人食管鱗癌Eca-109細(xì)胞增殖和凋亡［25］，誘導(dǎo)發(fā)生G0/G1期阻滯，參與調(diào)控細(xì)胞周期。此外，Kaempferol對腫瘤糖酵解具有明顯的抑制作用，還抑制表皮生長因子受體（EGFR）活性，是 治 療EC有 效 候 選 化 合 物［26］。Glycine的 衍 生 物N-異喹啉-3-羧酸-L-甘氨酸芐酯在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中能提高細(xì)胞內(nèi)活性氧水平，從而發(fā)揮抗EC作用［27］。體外研究發(fā)現(xiàn)，ursolic acid對食道癌KYSE150細(xì)胞有增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用，下調(diào)周期相關(guān)蛋白（CyclinD1）mRNA表達(dá)水平，誘導(dǎo)G0/G1阻滯［28］。Formononetin通過AKT通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制人食 管 癌HCE-4細(xì) 胞 增 殖［29］。Isorhamnetin能 下 調(diào)bcl-2，c-myc和H-ras的表達(dá)，上調(diào)Bax，c-fos和p53的表達(dá)對人食道鱗癌Eca-109細(xì)胞發(fā)揮明確的抑制增殖和凋亡作用，還干預(yù)G2/M期阻滯，但目前缺少體內(nèi)研究［30］。而naringenin暫無相關(guān)臨床或?qū)嶒?yàn)研究，可能是芪術(shù)郁靈湯干預(yù)EC的新發(fā)現(xiàn)，有待進(jìn)一步探究。

3.2 潛在基因靶標(biāo)

本研究預(yù)測AKT1、MAPK1、MAPK3、PIK3R1、RAF1、RELA可能是芪術(shù)郁靈湯干預(yù)EC的潛在基因靶標(biāo)。

AKT信號通路調(diào)控惡性腫瘤的增殖與分化，AKT1是關(guān)鍵基因，磷酸化AKT1（p-AKT1）可致EC患者局部無進(jìn)展生存期（LPFS）明顯縮短，是LPFS獨(dú)立預(yù)后因素，故可測定p-AKT1的表達(dá)來預(yù)測EC局部復(fù)發(fā)的概率［31］。同樣，p-AKT1也與患者總生存期（OS）降低有關(guān)［32］。TRIM27作為EC增殖因子，能增強(qiáng)AKT活化，促進(jìn)EC中PI3K/AKT通路激活，以抑制凋亡［33］。也有研究發(fā)現(xiàn)δ樣配體4（DLL4）能通過激活PI3K/AKT/E-鈣黏蛋白途徑而促進(jìn)EC細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移，沉默DLL4能夠通過減少AKT磷 酸 化 而 抑 制EC的 生 長、轉(zhuǎn) 移［34］。Liu等［35］也認(rèn)為EC的發(fā)生與AKT異常激活有關(guān)，發(fā)現(xiàn)黃腐酚在EC中能夠直接靶向AKT1/2，以APT競爭的方式抑制AKT激酶活性，降低CyclinD1的表達(dá)，并 提 高cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、Bax、細(xì)胞色素C水平，促進(jìn)凋亡，抑制EC的生長。

MAPK1、MAPK3是MAPK通 路 中 重 要 的 蛋白激酶與調(diào)控因子，調(diào)控MAPK1/3可降低EC細(xì)胞的增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移。MicroRNA-574-3p是EC患者術(shù)后預(yù)后指標(biāo)，在EC組織中miRNA-574-3p可結(jié)合MAPK1并下調(diào)其表達(dá)，并由此抑制PI3K-Akt、快速活化Raf/MEK/ERK通路，抑制EC細(xì)胞增殖與侵襲［36］。也有研究發(fā)現(xiàn)miRNA-490-3p能夠降解MAPK1，但miRNA-490-3p在EC組織中表達(dá)降低，而 致MAPK1誘 導(dǎo) 細(xì) 胞 增 殖、抑 制 凋 亡［37］。Zhu等［38］則發(fā)現(xiàn)食管鱗癌中多存在19p染色體缺失，19p染色體上的基因DIRAS通過MAPK3/1發(fā)揮信號調(diào)節(jié)作用，以誘導(dǎo)凋亡與抑制侵襲。

PIK3R1在正常組織中表達(dá)豐富，但在腫瘤中卻表達(dá)降低。在探索中國人群中食管鱗癌潛在生物標(biāo)記物的DNA甲基化譜中［39］，筆者發(fā)現(xiàn)PIK3R1的診斷價(jià)值頗高，僅次于PRDM16，即在晚期EC中發(fā)揮早期診斷作用。

RAF1對于腫瘤也具有重要影響，Zhou等［40］發(fā)現(xiàn)食管鱗癌中的PAQR3下調(diào)可促進(jìn)RAF1表達(dá)，磷酸化ERK，調(diào)控轉(zhuǎn)錄以參與腫瘤增殖與分化；當(dāng)上調(diào)PAQR3，可降低EC中RAF1水平，抑制腫瘤生長。Koinuma等［41］發(fā)現(xiàn)在食管鱗癌中RAF1可與Opa相互作用蛋白5（OIP5）相互作用，增加OIP5蛋白穩(wěn)定性，促進(jìn)細(xì)胞生長，導(dǎo)致患者不良預(yù)后。

RELA是NF-κB通路的關(guān)鍵組成，RELA能激活增殖或遷移相關(guān)基因表達(dá)以促使EC進(jìn)展，即RELA過表達(dá)將促進(jìn)EC細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移，有研究通過抑制RELA表達(dá)證實(shí)能降低EC的增殖與轉(zhuǎn)移［42］。在對EC的早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移研究中發(fā)現(xiàn)，RELA能增強(qiáng)mixed-lineage leukemia2（MLL2）誘導(dǎo)的EC細(xì)胞啟動(dòng)遷移相關(guān)的基因表達(dá)程序，而敲低MLL2可使轉(zhuǎn)移性EC細(xì)胞明顯減少，證實(shí)了MLL2和RELA是早期EC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵靶標(biāo)［43］。

3.3 富集分析

依據(jù)研究結(jié)果，預(yù)測芪術(shù)郁靈湯主要通過MAPK通 路、NF-κB通 路 和PI3K-Akt通 路 及 其 交互作用共同發(fā)揮拮抗EC增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、及復(fù)發(fā)，提高患者預(yù)后的作用。

MAPK通路參與腫瘤細(xì)胞分化、增殖、死亡等活動(dòng)。FAT1作為腫瘤抑制因子，是EC的重要突變基因之一，F(xiàn)AT1可中斷MAPK通路，解除對EMT的調(diào)控，從而影響EC的進(jìn)展［44］。上調(diào)miRNA-134可降低叢狀蛋白A1表達(dá)，以抑制MAPK通路，促進(jìn)凋亡［45］；miR-148a通過ERK/MAPK通路和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）直接靶向MAP3K9，抑制EC細(xì)胞的增殖和侵襲［46］。

NF-κB通路是連接癌癥與炎癥的主要傳導(dǎo)途徑，經(jīng)典機(jī)制是由細(xì)胞暴露于炎性細(xì)胞因子（如TNF-α和IL-1）或響應(yīng)于炎性信號（如LPS）而產(chǎn)生的［47］。NF-κB除能抑制腫瘤細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移，還能干預(yù)炎癥［48］，即對伴有食管炎的EC，干預(yù)NF-κB途徑可同時(shí)針對腫瘤和腫瘤相關(guān)性炎癥，且RELA在EC中 高 表 達(dá)［49］。NF-κB還 有 助 于TNF-α誘 導(dǎo)EMT，完成血管生成和轉(zhuǎn)移。

PI3K-Akt通路可刺激EC增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移，其激活可促進(jìn)EC進(jìn)展［50］。磷酸酶和張力蛋白同源物（PTEN）是PI3K/AKT/mTOR通路主要負(fù)調(diào)控因子，與大多數(shù)mTOR通路表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，PTEN表達(dá)缺失的患者總生存率明顯降低［51］。此外，miR-302a被證實(shí)與EC細(xì)胞的生存能力和侵襲有關(guān)，miR-302a的過表達(dá)可抑制MAPK與PI3K/Akt通路中蛋白的磷酸化，影響EC細(xì)胞的增殖和侵襲［52］。有學(xué)者認(rèn)為EC中失調(diào)的MAPK和PI3K通路通過多種機(jī)制激活，相關(guān)基因的激活或失活突變、擴(kuò)增和過表達(dá)，將為EC靶向治療提供相關(guān)依據(jù)［53］。

本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)初步探討芪術(shù)郁靈湯對EC的作用機(jī)制，其有效化合物如槲皮素、山柰酚、甘氨酸、熊果酸參與調(diào)節(jié)EC多數(shù)靶標(biāo)，且在潛在 靶 標(biāo) 中，AKT1、MAPK1、MAPK3、PIK3R1和RELA等顯示出良好協(xié)同拮抗作用。同時(shí)也預(yù)測MAPK、NF-κB和PI3K-Akt通 路 及 其 交 互 作 用 在EC的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后上，均發(fā)揮一定的優(yōu)勢作用。經(jīng)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的挖掘，本研究能為臨床上芪術(shù)郁靈湯用于EC的合理應(yīng)用提供科學(xué)證據(jù)，也為開展后續(xù)基礎(chǔ)研究或新藥研發(fā)提供依據(jù)。