張金龍 杜攀 張玉瑋 李廣華 張明娟

摘 要：本文對阿膠產(chǎn)品的質(zhì)量控制方法研究進(jìn)展進(jìn)行了文獻(xiàn)整理和分析，從驢皮成分鑒定和重金屬及有害元素2個風(fēng)險點考察質(zhì)量控制方法研究的動態(tài)。通過綜述為提升阿膠控制標(biāo)準(zhǔn)、降低產(chǎn)品風(fēng)險和加強市場監(jiān)管手段提供新的思路，促進(jìn)阿膠產(chǎn)業(yè)的良性發(fā)展。

關(guān)鍵詞：阿膠產(chǎn)品;質(zhì)量控制;研究進(jìn)展

Research Progress of Quality Control Methods for Ejiao Products

ZHANG Jinlong， DU Pan， ZHANG Yuwei， LI Guanghua*， ZHANG Mingjuan

（Liaocheng Inspection and Testing Center， Liaocheng 252000， China）

Abstract： In this paper， the research progress of quality control methods of Donkey-hide gelatin products was reviewed and analyzed. The research trends of quality control methods were investigated from two risk points of donkey skin composition identification and heavy metals and harmful elements. The review provides new ideas for improving the control standard of ejiao， reducing product risks and strengthening market supervision means， and promotes the benign development of ejiao industry.

Keywords： Ejiao products; quality control; research progress

1 阿膠產(chǎn)品概述

阿膠始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品[1]。2020年版《中國藥典》規(guī)定：“阿膠為馬科動物驢（Equus asinus L.）的干燥皮或鮮皮經(jīng)煎煮、濃縮制成的固體膠”[2]。阿膠味甘、性平，歸肺、肝、腎經(jīng)，具有補血滋陰、潤燥、止血的功效。阿膠作為補血潤燥的上品，己有2 500多年的藥用歷史，現(xiàn)收載于《中國藥典》2020年版一部。2002年，衛(wèi)生部公布阿膠既是食品又是藥品，為藥食同源。阿膠作為中藥材應(yīng)用于臨床疾病的治療，能制成食品、保健品，增強人體免疫力。

目前，市場上的阿膠產(chǎn)品有阿膠塊、阿膠粉、阿膠糕、阿膠膏、阿膠口服液和阿膠棗等，阿膠產(chǎn)品因其特有的養(yǎng)生保健功效而深受人們歡迎。但隨著我國經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，機械化進(jìn)程加速，驢的農(nóng)用功能逐漸被代替，驢的存欄量急劇減少。國家統(tǒng)計局發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，截至2019年末，國內(nèi)毛驢存欄量260.07萬頭;中國驢聯(lián)網(wǎng)監(jiān)測數(shù)據(jù)顯示，2019年驢屠宰量約為30萬頭。目前，國內(nèi)驢皮產(chǎn)量遠(yuǎn)不能滿足阿膠行業(yè)生產(chǎn)需求，中國成為世界最大的驢皮進(jìn)口國。2020年，國際活驢和驢皮運輸流通變得困難，同時我國多地活驢流通不暢，產(chǎn)銷環(huán)節(jié)脫節(jié)加劇，驢皮成本進(jìn)一步上漲。不法分子看到阿膠市場存在的巨大原料缺口，為謀求暴利，通過縮減驢皮使用量或添加牛皮、豬皮甚至工業(yè)皮革下腳料代替驢皮[3]，造成阿膠產(chǎn)品風(fēng)險居高不下，不利于行業(yè)良性發(fā)展。基于阿膠特殊的制作工藝，驢皮分子結(jié)構(gòu)被破壞、成分發(fā)生改變，導(dǎo)致阿膠鑒定困難。準(zhǔn)確測定產(chǎn)品中驢皮成分和重金屬等風(fēng)險指標(biāo)成為阿膠質(zhì)量控制的重點和難點[4]。

2 驢皮成分鑒別

驢皮成分的鑒別工作早期主要應(yīng)用生物學(xué)分離技術(shù)進(jìn)行鑒定。例如，李峰等[5]通過聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒別7種膠類;陳萍紅等[6]通過柱前衍生法測定阿膠氨基酸的種類及含量以區(qū)分阿膠和其他膠類。后期慢慢形成以高精密儀器分析鑒定驢皮成分，主要包括光譜法、色譜法和質(zhì)譜法。光譜法主要用于快速檢測;液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析成為目前我國測定阿膠制品中驢皮成分的標(biāo)準(zhǔn)方法;以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）技術(shù)為代表的多重PCR、熒光實時定量PCR、DNA條形碼等技術(shù)可通過特定靶標(biāo)分子的定位實現(xiàn)物種溯源，為驢皮成分的檢測提供新的方向。

2.1 光譜法

通過光譜技術(shù)依次獲取綜合信息，結(jié)合多變量數(shù)據(jù)分析手段處理光譜數(shù)據(jù)，可獲得更高效和直觀的效果。許長華等[7]借助傅立葉變換處理紅外光譜數(shù)據(jù)，通過提高譜圖分辨率，獲取目標(biāo)物的微觀結(jié)構(gòu)信息，可直觀、有效地鑒別阿膠。陳棟華等[8]通過分析差示掃描量熱法在不同溫度下4種膠的特征曲線，可鑒別驢、黃牛、水牛和豬皮膠4種膠。高鳳偉等[9]通過近紅外光譜技術(shù)結(jié)合Fisher判別對驢皮膠、豬皮膠、牛皮膠進(jìn)行了識別研究，并構(gòu)建識別模型，可實現(xiàn)100%識別3種膠材，對阿膠產(chǎn)品的快速識別與鑒別摻雜有積極意義。

2.2 色譜法

翟乙娟等[10]通過圓二色譜分析法測定阿膠、鹿角膠和龜甲膠的蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)，建立標(biāo)準(zhǔn)圖譜區(qū)分3種膠劑。王曉坤等[11]通過高效液相色譜法構(gòu)建阿膠水溶性成分的指紋圖譜作為阿膠的評價指標(biāo)。王翠芬等[12]采用柱前衍生化-高效液相色譜法測定阿膠中L-羥脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸、谷氨酸和精氨酸的含量，該方法操作簡單高效、結(jié)果準(zhǔn)確。

2.3 質(zhì)譜法

張貴鋒等[13]通過高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)比較酶切處理后的阿膠、牛皮膠和豬皮膠中多肽組成的差異，檢測樣品膠中特征多肽的序列可鑒別樣品膠的種類，此方法可用于追溯樣品膠的來源。沙小梅等[14]通過高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)研究阿膠的特征性多肽在經(jīng)酶催化的18O上的標(biāo)記情況，18O標(biāo)記聯(lián)合液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)可用于明膠的含量檢測。程顯隆等[15]采用串聯(lián)四級桿質(zhì)譜的多反應(yīng)檢測法結(jié)合統(tǒng)計學(xué)方法尋找阿膠、黃明膠、新阿膠、龜甲膠和鹿角膠的特征離子，確定各膠類的專屬性特征肽，建立不同膠類的鑒別方法。

2.4 蛋白組學(xué)及其他方法

房芳等[16]結(jié)合shotgun蛋白質(zhì)全譜分析對阿膠、新阿膠、黃明膠的熱穩(wěn)定特征肽進(jìn)行篩查和鑒定，找到3種膠類的特征肽段，并發(fā)現(xiàn)了其中不含羥脯氨酸的熱穩(wěn)定特異性肽段分布規(guī)律。此外，通過該方法還發(fā)現(xiàn)了馬皮特征肽，可鑒定阿膠中是否加入馬皮膠，為阿膠驢皮成分鑒別提供技術(shù)支持。王若光等[17]通過激光解析/離子化-飛行時間質(zhì)譜技術(shù)研究阿膠水溶性蛋白/肽，獲得可用蛋白及多肽9個，可生成阿膠蛋白質(zhì)/肽成分質(zhì)量指紋圖，有望作為阿膠數(shù)字化質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。葛正華[18]采用分級過濾分離法用濾紙、半透膜對膠劑中大分子蛋白質(zhì)、還原糖、氨基酸和無機鹽及不溶性物質(zhì)進(jìn)行分離，并進(jìn)行含量測定，得到不同樣品各組分含量有較大差異的結(jié)論，為膠劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供思路。汪冰等[19]采用空間排阻色譜法對40批阿膠樣品圖譜主成分進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)不同企業(yè)的產(chǎn)品中蛋白質(zhì)及多肽的相對分子質(zhì)量分布有規(guī)律性，可為分析阿膠中蛋白質(zhì)及多肽提供依據(jù)。王一村等[20]采用微滴式數(shù)字PCR方法測定DNA含量與DNA絕對拷貝數(shù)間，發(fā)現(xiàn)這2種參數(shù)與阿膠質(zhì)量均呈線性關(guān)系，可用來評價阿膠產(chǎn)品質(zhì)量，并進(jìn)行純度鑒定和定量檢測。

3 重金屬元素分析

阿膠元素的分析測定方法主要包括原子吸收分光光度法、X射線熒光光譜法、等離子體發(fā)射光譜法等。電感耦合等離子質(zhì)譜法（Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry，ICP-MS）因元素覆蓋范圍廣泛、靈敏度高、定量和半定量分析快及精度和準(zhǔn)確度好等優(yōu)點成為元素分析的首選。該技術(shù)既可用于阿膠中常量元素的分析，又可用于微量重金屬有害元素的分析。籍國霞等[21]用微波消解串聯(lián)電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定阿膠中14種元素，測定了阿膠中鐵、鋅、錳、鋇和鍶5種微量元素及鍶、砷、鎘、鈀、銅和汞6種重金屬元素;其中，鍶元素由皮革處理過程中引入，該元素的的確定有助于反查煉膠用皮的來源。孫大贏[22]采用微波消解和電感耦合等離子體質(zhì)譜法檢測阿膠中鉛、鎘、砷、汞、銅和鉻6種元素的含量，此方法準(zhǔn)確、靈敏，可快速檢測阿膠中的有害元素。徐清等[23]采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法對多批次龜甲及混偽品、龜甲膠藥材中鉻、砷、鎘、汞、鉛和銅6種元素進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示鉻和鉛元素超過限量標(biāo)準(zhǔn)，為重金屬元素的污染情況提供了依據(jù)。此外，YANG等[24]建立離子色譜法（Ion Chromatography，IC）通過在線預(yù)處理-富集元素的方法，測定了阿膠中六價鉻離子的含量，該方法有助于溯源煉膠用皮。

4 藥品阿膠質(zhì)量控制方法研究現(xiàn)狀

隨著國家對藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)把控越來越嚴(yán)格，阿膠藥材標(biāo)準(zhǔn)也在不斷完善。1977年版《中國藥典》將阿膠收錄在中草藥及其制品部分;1985年版《中國藥典》將阿膠收錄在藥材部分，均只有性狀、鑒別、水分、灰分和重金屬及砷鹽的檢查項目;2000年版《中國藥典》將阿膠收錄在“成方及單味制劑”，新增檢查項“測定揮發(fā)性堿性物質(zhì)”;2005年版《中國藥典》將其調(diào)整到藥材及飲片部分;增加了薄層鑒別、水不溶物、總氮含量測定項，2010年版《中國藥典》修訂了薄層色譜鑒別和水不溶物的測定，增加重金屬及有害元素檢測及阿膠中L-羥脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸和脯氨酸的含量測定;2015年版《中國藥典》中的檢驗項目增加高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法鑒別驢皮源成分，對阿膠進(jìn)行定性鑒別;2020年版《中國藥典》中新增高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法定量測定驢皮源特征多肽的含量。但由于膠類中藥的基質(zhì)復(fù)雜、外觀性狀與內(nèi)在質(zhì)量的相關(guān)性不夠明確、活性成分不夠清晰等原因，檢驗方法復(fù)雜、成本高昂，但隨著技術(shù)的進(jìn)步，藥典方法還會有進(jìn)一步完善及提高。

5 結(jié)語

阿膠基于藥食同源的特性，越來越受消費者和市場的喜愛，人們對其生產(chǎn)工藝和質(zhì)量要求也越來越嚴(yán)格。阿膠作為驢皮水解加工形成的復(fù)雜多元體系，質(zhì)控難度主要是成分組成和分子質(zhì)量分布范圍廣，導(dǎo)致其質(zhì)量評價難度較大。目前，我國缺少簡單、高效的阿膠質(zhì)量評價方法，因此應(yīng)用多種分析技術(shù)和方法對阿膠產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行分析，以保障阿膠產(chǎn)品的功效和安全成為亟待解決的難題。在驢皮成分的定性鑒別和定量分析上，目前采用的特征性肽的鑒別方法可行，有較強的專屬性。隨著2020版《中國藥典》的實施，阿膠市場的混亂現(xiàn)狀會有較大改觀，整個阿膠產(chǎn)業(yè)會更規(guī)范，實現(xiàn)良性發(fā)展。

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