徐利亞 李瑞敏 魏紅立 侯文欣 崔瀟瑜 劉運其
摘要:目的:探討復(fù)方斑蝥膠囊中人參、山茱萸、女貞子和刺五加的鑒別方法。方法:用顯微鑒別的方法探討人參、山茱萸及女貞子的顯微特征;用薄層色譜的方法鑒別刺五加。結(jié)果:顯微鏡下人參、山茱萸、女貞子的顯微特征明顯,刺五加的薄層色譜斑點顯色清晰,分離度較好。結(jié)論:建立的方法準(zhǔn)確,重復(fù)性好,操作簡單,為復(fù)方斑蝥膠囊的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。
關(guān)鍵詞:復(fù)方斑蝥膠囊;顯微鑒別;薄層色譜;質(zhì)量控制
復(fù)方斑蝥膠囊主要由斑蝥、人參、黃芪、刺五加、山茱萸、女貞子等11味中藥組成,是一種抗癌藥物。具有破血消瘀、攻毒蝕瘡之功效,可用于治療原發(fā)性肝癌、肺癌、直腸癌[1]、婦科惡性腫瘤、惡性淋巴瘤等。人參味甘、微苦而性微溫,具有的“大補元氣、復(fù)脈固脫”之功效,刺五加益氣健脾,補腎安神[2];山茱萸補益肝腎,收澀固脫,女貞子滋補肝腎、明目烏發(fā),抗腫瘤。復(fù)方斑蝥膠囊可提高患者免疫力,激活抑癌基因,又能殺死癌細(xì)胞,有著雙重治療作用。本實驗增加了制劑中藥材原粉的顯微鑒別和刺五加的薄層色譜鑒別,以控制這幾味要的質(zhì)量,防止不法分子利用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)違法亂紀(jì)。
1、實驗儀器和材料
1.1 儀器
奧林巴斯顯微鏡(OLYMPUS BX53 DP21)、數(shù)控超聲波清洗器(天大天發(fā)KQ-600DE)、硅膠G板(青島海洋化工廠)。
1.2 試藥
復(fù)方斑蝥膠囊(重慶希爾安藥業(yè)有限公司,批號:200202-1;貴州益佰制藥股份有限公司,批號:200706;陜西方舟制藥有限公司,批號:200101 053)。刺五加對照藥材(中國食品藥品檢定研究院;批號:120991-201610)
2方法與結(jié)果
2.1 人參、山茱萸和女貞子的顯微鑒別
本研究采用顯微鑒別方法檢查復(fù)方斑蝥膠囊中人參、山茱萸和女貞子的質(zhì)量狀況。結(jié)果可見其相應(yīng)組織特征。詳見圖1。
取三個廠家的樣品,研細(xì),取適量置于載玻片上,滴加水合氯醛試液,酒精燈加熱透化,再蓋上蓋玻片,置顯微鏡下觀察,分別在正常光和偏振光下觀察并拍攝照片,白色背景為正常光下拍攝,黑色背景為偏振光下拍攝。
通過顯微鏡可明顯看到人參、山茱萸及女貞子的顯微特征,具體特征為:草酸鈣簇晶直徑20~68μm,棱角尖銳,偏光顯微鏡下呈五彩色(人參)[2]。纖維少數(shù),直徑9~40μm,紋孔點狀或“人”字狀,偏光顯微鏡下呈黃白色(山茱萸)[2,4]。外果皮表皮細(xì)胞段面觀呈類扁圓形或類多角形,外壁角質(zhì)層增厚,胞腔被伸入的外壁分隔成若干個不規(guī)則的小腔,內(nèi)含黃棕色物(女貞子)[2,4]。
2.2 刺五加的薄層色譜鑒別
取本品內(nèi)容物2.5g,加80 %甲醇50ml超聲提取30min , 濾過,濾液蒸干,殘渣加水15ml溶解,轉(zhuǎn)至分液漏斗中, 用乙醚提取2次,每次15ml,棄去乙醚液,再用三氯甲烷提取2次,每次10ml,合并三氯甲烷液蒸干,殘渣加甲醇1ml使溶解,作為供試品溶液。取刺五加對照藥材1g同法制成對照藥材溶液。按制劑處方取扣除刺五加外的其他藥材依法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法,吸取上述三種溶液各10μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9:4:1)為展開劑,展開, 取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上,顯相同顏色的熒光斑點。且陰性對照無干擾,斑點清晰,分離度符合要求,詳見圖2。
3 討論
人參、山茱萸、女貞子原粉入藥,顯微鏡下觀察這三味藥顯微特征明顯,可作一項鑒別對這三味藥進(jìn)行質(zhì)量控制。
刺五加的薄層鑒別中,提取溶劑考察過乙醇、甲醇、80%甲醇,經(jīng)實驗,80%甲醇提取效率最高,干擾斑點最少。展開劑考察了環(huán)己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇和三氯甲烷-甲醇,分離度及斑點清晰程度都不如以甲苯-乙酸乙酯-甲酸為展開劑展開的效果。在不同溫濕度條件下對薄層鑒別方法進(jìn)行了考察,結(jié)果標(biāo)明重現(xiàn)性較好。還試驗了不同廠家的薄層板,結(jié)果均能很好的呈現(xiàn)。
綜上所述,復(fù)方斑蝥膠囊中人參、山茱萸、女貞子顯微特征明顯,可建立鑒別項用于控制這三味藥的質(zhì)量。刺五加的薄層色譜斑點清晰,分離度符合要求。本研究中的兩種鑒別方法均可為復(fù)方斑蝥膠囊的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。
參考文獻(xiàn):
[1] 胡自康,李維,蘇春志,等.復(fù)方斑蝥膠囊聯(lián)合化療用于直腸癌根治術(shù)后患者的臨床療效[J].中國藥物經(jīng)濟學(xué).2019,(3):80-83.
中華人民共和國藥典[S].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社, 2020.216.