李 惠， 王學(xué)紅， 馬臻棋， 馬文霞， 楊麗萍

1 青海大學(xué)， 西寧 810016； 2 青海大學(xué)附屬醫(yī)院 消化內(nèi)科， 西寧 810001

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是代謝綜合征的肝表現(xiàn)，常合并肥胖、血脂異常及胰島素抵抗(IR)，疾病譜包括單純性脂肪肝(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及其相關(guān)肝纖維化、肝硬化和肝細(xì)胞癌。NAFLD也是西方國(guó)家常見(jiàn)的慢性肝病，預(yù)計(jì)到2030年NAFLD將成為肝移植最常見(jiàn)的適應(yīng)證[1-3]。NAFLD可導(dǎo)致肝病殘疾和死亡，還與代謝綜合征 (metabolic syndrome,MetS)、2型糖尿病(T2DM)、動(dòng)脈硬化性心血管疾病及結(jié)直腸腫瘤等密切相關(guān)[2]。研究[4]顯示從1997年—2014年，NAFLD發(fā)病率增加了5倍，其中18～39歲的年輕人增長(zhǎng)率最高(7倍)，表明NAFLD發(fā)病率顯著增加且逐漸年輕化。當(dāng)前認(rèn)為NAFLD是與遺傳-環(huán)境-代謝應(yīng)激相關(guān)且無(wú)過(guò)量飲酒史、肝細(xì)胞脂肪變性和脂質(zhì)貯積為特征的臨床病理綜合征[5]。至今NAFLD的發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明，經(jīng)典的“雙重打擊學(xué)說(shuō)”[6]認(rèn)為肥胖和IR會(huì)造成脂質(zhì)在肝細(xì)胞中堆積，為肝細(xì)胞承受的“第一次打擊”，繼之出現(xiàn)氧化應(yīng)激、線(xiàn)粒體功能障礙、脂質(zhì)過(guò)氧化等進(jìn)一步促進(jìn)肝細(xì)胞炎癥反應(yīng)；目前廣為認(rèn)可的“多重打擊學(xué)說(shuō)”[7]是在“雙重打擊學(xué)說(shuō)”的基礎(chǔ)上，先天免疫調(diào)節(jié)紊亂、自噬、營(yíng)養(yǎng)元素、腸-肝軸、表觀遺傳學(xué)也是影響NAFLD向NASH發(fā)展的重要因素。研究[8]證明腸道菌群-代謝物，腸-肝軸之間存在一定程度聯(lián)系，并且參與NAFLD的發(fā)生發(fā)展。作為腸-肝軸重要組成部分，腸道菌群通過(guò)增加宿主能量攝入、調(diào)節(jié)膽堿及膽汁酸代謝、激活模式識(shí)別受體等機(jī)制促發(fā)炎癥反應(yīng)，促使NAFLD發(fā)生發(fā)展；短鏈脂肪酸(short chain fatty acids,SCFA)是腸道菌群分解碳水化合物或氨基酸的代謝物，包括乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、異丁酸、異戊酸、異己酸等，其中乙酸、丙酸、丁酸的含量較高。正常菌群每日可產(chǎn)生50～100 mmol/L的SCFA，為腸道上皮細(xì)胞提供能量，其可通過(guò)降低結(jié)腸pH、抑制病原體生長(zhǎng)、促進(jìn)水鈉吸收等途徑參與腸道免疫穩(wěn)態(tài)的調(diào)控[9]。多項(xiàng)研究[10-11]表明，SCFA影響NAFLD的進(jìn)展，具體機(jī)制尚不清楚。越來(lái)越多證據(jù)[12-14]表明，SCFA在維持腸道和代謝方面發(fā)揮重要作用。本研究初步探討SCFA腸道代謝與NAFLD發(fā)病機(jī)制的關(guān)系，為NAFLD的后續(xù)防治及臨床診斷提供新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 通過(guò)前瞻性研究方法，選取2020年7月—2021年7月在青海大學(xué)附屬醫(yī)院臨床診斷為NAFLD的患者共90例，其中NAFL組30例(有病理組織學(xué)診斷患者10例)、NASH組30例(有病理組織學(xué)診斷患者22例)、非酒精性脂肪性肝纖維化30例(有病理組織學(xué)診斷患者30例)，90例患者均行Fibroscan檢測(cè)。分組依據(jù)參照《非酒精性脂肪性肝病診療指南》[15]中臨床分型標(biāo)準(zhǔn)，并選取同期健康體檢者40例作為對(duì)照組。同時(shí)選取NASH組高?；颊?6例(合并高血壓、糖尿病、高脂血癥、冠心病、肺氣腫、肺心病等)進(jìn)行隨訪，脫失病例6例，最終納入NASH高危患者10例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)居住青海地區(qū)10年以上；(2)年齡18～65歲；(3)無(wú)飲酒史或過(guò)去12個(gè)月每周飲用乙醇量男性<210 g，女性<140 g；(4)合并并發(fā)癥者(高血糖、高血脂、高血壓、高尿酸等)；(5)肝臟影像學(xué)表現(xiàn)符合彌漫性脂肪肝的影像學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)；(6)肝活組織檢查組織學(xué)改變符合脂肪性肝病的病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)。以上符合1～4項(xiàng)和第5或第6中任何一項(xiàng)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)既往有慢性病毒肝炎感染、有嚴(yán)重的自身免疫性疾病、肝豆?fàn)詈俗冃?、全胃腸外營(yíng)養(yǎng)、長(zhǎng)期不規(guī)律口服藥物(抗生素、中藥、藏藥等)者；(2)既往有大量飲酒史者(過(guò)去12個(gè)月每周飲用乙醇量男性≥210 g，女性≥140 g)；(3)臨床病理資料不完整者。

1.2 資料采集 所有研究對(duì)象采集病史，編號(hào)后記錄姓名、年齡、飲酒情況，計(jì)算BMI，進(jìn)一步采集糞便標(biāo)本，標(biāo)本編號(hào)后置于-80 ℃冰箱保存。Fibroscan檢查所有研究對(duì)象受控衰減參數(shù)(CAP)和肝臟硬度值(LSM)。全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組標(biāo)本的ALT、AST、GGT、糖化血紅蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、TG、TC、尿酸(UA)、TBil、DBil、IBil、Alb、Glb、ALP、膽汁酸(TBA)、凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)。全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)健康組及非酒精性脂肪性肝纖維化組三型前膠原肽(PⅢP N-P)、四型膠原(Ⅳ-C)、透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)，與SCFA聯(lián)合分析對(duì)非酒精性脂肪性肝纖維化診斷價(jià)值。

1.3 SCFA水平檢測(cè) (1)GC-MS 檢測(cè)方法。色譜條件：色譜柱 Agilent HP-INNOWAX 毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm ID×0.25 μm)；分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量1 μL，分流比10∶1。進(jìn)樣口溫度250 ℃；離子源溫度230 ℃；傳輸線(xiàn)溫度250 ℃，四極桿溫度150 ℃。程序升溫起始溫度90 ℃；然后以10 ℃/min升溫至120 ℃；再以5 ℃/min升溫至150 ℃；最后以25 ℃/min 升溫至250 ℃維持 2 min。載氣為氦氣，載氣流速1.0 mL/min。MS 條件：電子轟擊電離(EI)源， SIM 掃描方式，電子能量 70 eV。(2)主要試劑。磷酸(國(guó)藥)，乙醚(國(guó)藥)，乙酸(sigma≥ 99.5%)，丙酸(sigma>99.0%)，丁酸(sigma>99.0%)，異丁酸(sigma>99.0%)，戊酸(sigma>98.0%)，異戊酸(sigma>99.0%)，己酸(阿拉丁≥99.5%)，異己酸(sigma>98%)。(3)主要儀器平臺(tái)。Thermo TRACE 1310-ISQ LT 氣-質(zhì)聯(lián)用儀(Thermo，美國(guó))；渦旋儀(QL-866)；冷凍離心機(jī)(湘儀，H1850R)。(4)標(biāo)準(zhǔn)品配置。量取乙酸、丙酸、丁酸、異丁酸、戊酸、異戊酸、己酸純標(biāo)準(zhǔn)品適量，用乙醚配制成0.02、0.1、0.5、2、5、10、50、100、250、500 μg/mL 10個(gè)混合標(biāo)準(zhǔn)濃度梯度。母液及工作標(biāo)準(zhǔn)溶液均保存于 0 ℃。(5)樣品前處理。取適量樣本，加50 μL 15%磷酸，再加125 μg/mL的內(nèi)標(biāo)(異己酸)溶液100 μL和乙醚400 μL勻漿1 min，于4 ℃ 12 000 r/min心10 min，取上清上機(jī)測(cè)試。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 入選的90例患者中男56例，女34例，平均年齡(49.82±10.95)歲；健康對(duì)照組40例，其中男23例，女17例，平均年齡(49.10±10.85)歲。各組性別、年齡一般基線(xiàn)資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均>0.05)(表1)。

表1 4組研究對(duì)象人口學(xué)資料比較

2.2 生化指標(biāo)比較 NAFL組、NASH組、非酒精性脂肪性肝纖維化組BMI、FPG、TG、DBil、CAP均明顯高于健康對(duì)照組，IBil、Alb、APTT均明顯低于健康對(duì)照組(P值均<0.05)；非酒精性脂肪性肝纖維化組BMI、HbA1c、ALT、AST、GGT、TBA、LSM明顯高于NAFL組(P值均<0.05)；非酒精性脂肪性肝纖維化組BMI、TBil、DBil、IBil均低于NASH組(P值均<0.05)，Alb、LSM均高于NASH組(P值均<0.05)；NASH組BMI、HbA1c、ALT、AST、GGT、LSM均高于NAFL組(P值均<0.05)(表2)。

表2 4組研究對(duì)象臨床生化指標(biāo)比較

2.3 各組SCFA水平測(cè)定 非酒精性脂肪性肝纖維化組戊酸、己酸含量顯著高于健康對(duì)照組，NAFL組戊酸、己酸含量顯著低于健康對(duì)照組(P值均<0.05)；非酒精性脂肪性肝纖維化組戊酸、己酸含量顯著高于NAFL組(P值均<0.05)；非酒精性脂肪性肝纖維化組戊酸含量顯著高于NASH組(P<0.05)；NASH組己酸含量顯著高于NAFL組(P<0.05)(表3)。

表3 4組研究對(duì)象SCFA水平測(cè)定

2.4 疾病嚴(yán)重程度與SCFA的相關(guān)性 相關(guān)分析顯示疾病嚴(yán)重程度與丁酸、戊酸、己酸顯著正相關(guān)(r值分別為0.238、0.531、0.510，P值分別為0.024、<0.001、<0.001)，與乙酸、丙酸、異丁酸、異戊酸無(wú)相關(guān)性(P值均>0.05)。

2.5 NASH組高危患者治療前后對(duì)比分析

2.5.1 臨床指標(biāo)比較 NASH組高?；颊?0例治療后HbA1c、FPG、TG、TC、ALT、AST、GGT、TBA、PT、UA、CAP、LSM均明顯低于治療前(P值均<0.05)(表4)。

表4 治療前后臨床指標(biāo)比較

2.5.2 治療前后SCFA指標(biāo)比較 NASH組高?；颊?0例治療后乙酸、丙酸含量均高于治療前(P值均<0.05)；異丁酸含量低于治療前(P<0.05)(表5)。

表5 治療前后SCFA水平比較

2.6 SCFA診斷非酒精性脂肪性肝纖維化患者ROC曲線(xiàn)下面積(AUC) 由圖1得出戊酸診斷非酒精性脂肪性肝纖維化的AUC為0.842(95%CI：0.747～0.938)，最佳界值為141.42 μg/g，靈敏度86.7%，特異度70%；己酸診斷非酒精性脂肪性肝纖維化的AUC為0.819(95%CI：0.718～0.920)，最佳界值為6.93 μg/g，靈敏度70%，特異度85%；PⅢP N-P診斷非酒精性脂肪性肝纖維化的AUC為0.881(95%CI：0.802～0.960)，最佳界值為68.06 ng/mL，靈敏度73.3%，特異度90%；Ⅳ-C診斷非酒精性脂肪性肝纖維化的AUC為0.803(95%CI：0.699～0.907)，最佳界值為60.12 ng/mL，靈敏度80%，特異度75%；HA診斷非酒精性脂肪性肝纖維化的AUC為0.703(95%CI：0.572～0.834)，最佳界值為104.46 ng/mL，靈敏度80%，特異度67.5%。

2.7 腸道內(nèi)主要微生物數(shù)量及其代謝產(chǎn)物 腸道內(nèi)主要菌屬為擬桿菌屬、真桿菌屬、雙歧桿菌屬、瘤胃球菌屬、消化鏈球菌屬等8種，大部分菌屬主要發(fā)酵產(chǎn)物為乙酸、丁酸(表6)。

圖1 SCFA及PⅢP N-P、Ⅳ-C、HA、LN診斷非酒精性脂肪性肝纖維化ROC曲線(xiàn)

表6 腸道內(nèi)主要微生物數(shù)量及其代謝產(chǎn)物

3 討論

NAFLD的發(fā)病機(jī)制與遺傳、環(huán)境、生活方式、高脂飲食(HFD)、肥胖、血脂代謝紊亂、糖尿病及MetS等多種因素有關(guān)[16]。NAFLD也是肝細(xì)胞癌的主要危險(xiǎn)因素之一，預(yù)計(jì)將成為全球最常見(jiàn)的慢性肝病[17]。目前在治療NAFLD的全球流行及其相關(guān)代謝和肝臟并發(fā)癥方面存在巨大挑戰(zhàn)，NAFLD的早期診斷及干預(yù)治療至關(guān)重要，目前的治療方法有節(jié)制飲食、調(diào)整飲食結(jié)構(gòu)并增加運(yùn)動(dòng)的生活方式、減重和代謝治療(內(nèi)鏡和外科手術(shù))、藥物治療、相關(guān)并發(fā)癥的治療，效果并不顯著，并且多數(shù)NAFLD患者早期無(wú)癥狀，在進(jìn)展為肝硬化之前，疾病可能保持沉默。NAFLD患者在初次就診時(shí)發(fā)現(xiàn)的最常見(jiàn)癥狀為肝區(qū)輕微疼痛和疲勞，或根據(jù)偶然的影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)脂肪肝，所以目前缺乏行之有效的針對(duì)性診斷、治療方案[18-20]。

腸道菌群失調(diào)在NAFLD及相關(guān)代謝紊亂中發(fā)揮重要作用。肝臟與胃腸道同為消化系統(tǒng)重要組成部分，由于肝臟與腸道特殊的解剖生理關(guān)系，腸道微生物通過(guò)肝-腸循環(huán)，在肝損傷、慢性纖維化、炎癥及腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用[21-22]。SCFA是具有1～6個(gè)碳原子的有機(jī)脂肪酸，由腸道內(nèi)微生物發(fā)酵膳食纖維產(chǎn)生，產(chǎn)生SCFA的腸道微生物主要包括厭氧類(lèi)桿菌、真桿菌、鏈球菌、雙歧桿菌和乳酸桿菌，受發(fā)酵底物、細(xì)菌種類(lèi)等因素的影響，產(chǎn)生SCFA的種類(lèi)、數(shù)量不同，在腸道內(nèi)發(fā)揮的作用也不相同[23-24]。由此可見(jiàn)SCFA的形成與上述腸道微生物密切相關(guān)，進(jìn)一步的研究[25]表明SCFA是飲食和腸道菌群在腸道微環(huán)境中相互作用的結(jié)果，是介導(dǎo)飲食、腸道菌群、宿主之間的信號(hào)因子，在機(jī)體免疫系統(tǒng)、代謝系統(tǒng)及內(nèi)分泌系統(tǒng)等方面發(fā)揮重要作用。有研究[26]表明，SCFA與腸易激綜合征、肝癌、結(jié)直腸癌、NAFLD等消化系統(tǒng)疾病有著密切聯(lián)系。

眾多研究[27-28]表明NAFLD促進(jìn)了T2DM及其并發(fā)癥的發(fā)展，而T2DM加劇了NAFLD的嚴(yán)重程度及脂代謝紊亂，已被越來(lái)越多的人所認(rèn)識(shí)。另外有研究[29]顯示超重/肥胖也與NAFLD息息相關(guān)，即肥胖與NAFL、NASH、相關(guān)肝硬化和肝細(xì)胞癌相關(guān)。一項(xiàng)基于健康人群NAFLD患病率及危險(xiǎn)因素調(diào)查結(jié)果[30]顯示NAFLD組超重或肥胖、T2DM、血脂異常、尿酸升高、血黏度異常、肝損傷的發(fā)生率均高于對(duì)照組，存在顯著差異。本研究結(jié)果顯示NAFL組、NASH組、非酒精性脂肪性肝纖維化組BMI、FPG、TG、DB、CAP均高于健康組，IBil、Alb、APTT低于健康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與眾多研究結(jié)果基本一致。此外本研究還表明非酒精性脂肪性肝纖維化組及NASH組相關(guān)肝功能指標(biāo)較NAFL組升高，可以推測(cè)兩組患者可能存在更加嚴(yán)重的肝損傷；另外，非酒精性脂肪性肝纖維化組的LSM較NAFL組、NASH組均高，說(shuō)明LSM具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值，在評(píng)估肝纖維化程度方面表現(xiàn)良好，與Eddowes、Vuppalanchi等[31-32]研究結(jié)果一致。基于之前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，NAFLD患者確實(shí)存在不同程度的腸道菌群紊亂，假設(shè)NAFLD患者的腸道菌群代謝產(chǎn)物也因此受到影響，進(jìn)一步利用GC-MS進(jìn)行代謝組學(xué)分析。本研究選擇糞便SCFA進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)非酒精性脂肪性肝纖維化組戊酸、己酸含量顯著高于對(duì)照組，NAFL組戊酸、己酸含量顯著低于對(duì)照組(P值均<0.05)；非酒精性脂肪性肝纖維化組戊酸、己酸含量顯著高于NAFL組，非酒精性脂肪性肝纖維化組戊酸含量顯著高于NASH組(P值均<0.05);NASH組己酸含量顯著高于NAFL組(P值均<0.05)。各組間乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸、異戊酸含量無(wú)顯著性差異(P值均>0.05)。據(jù)此可以推測(cè)戊酸、己酸可能促進(jìn)NAFLD 病程進(jìn)展，機(jī)制可能是通過(guò)肝-腸循環(huán)，促進(jìn)肝損傷、慢性纖維化、炎癥的發(fā)生發(fā)展，但本研究中NAFL組戊酸、己酸含量卻低于健康對(duì)照組，推測(cè)可能與疾病初步進(jìn)展，機(jī)體戊酸、己酸含量尚未產(chǎn)生明顯變化有關(guān)，另外程靖等[33]利用HFD小鼠誘導(dǎo)NAFLD模型并檢測(cè)其SCFA的變化，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組糞便乙酸、丙酸和總SCFA水平明顯降低，與本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致，推測(cè)可能與實(shí)驗(yàn)檢測(cè)誤差及樣本量偏小相關(guān)。本研究進(jìn)一步分析疾病嚴(yán)重程度與SCFA的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)疾病嚴(yán)重程度與丁酸、戊酸、己酸顯著正相關(guān)，與前文研究結(jié)果相對(duì)應(yīng)。

目前臨床針對(duì)NAFLD患者缺乏特異性藥物，本研究基于臨床現(xiàn)狀，選取NASH組高?；颊?0例治療干預(yù)(服水飛薊賓膠囊 105 mg/次、3 次/d及每日晨起進(jìn)行有氧運(yùn)動(dòng) 1 h)3個(gè)月后隨訪并檢測(cè)血清學(xué)指標(biāo)及糞便SCFA含量的差異。本研究結(jié)果顯示NASH患者治療后HbA1c、FPG、TG、TC、ALT、AST、GGT、TBA、PT、UA、CAP、LSM均明顯低于治療前(P值均<0.05)，治療前后ALP、TBil、DBil、IBil、Alb、Glb、APTT差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均>0.05)。NASH患者10例治療后乙酸、丙酸含量均高于治療前(P值均<0.05)，治療后異丁酸含量低于治療前(P<0.05)，治療前后丁酸、異戊酸、戊酸、己酸差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均>0.05)，Pingitore等[11]研究表明乙酸鹽可減輕NASH小鼠的肝臟脂肪變性和炎性浸潤(rùn)，并降低血清中TG、游離脂肪酸和膽固醇的水平；丙酸可通過(guò)抑制β細(xì)胞凋亡而增強(qiáng)葡萄糖刺激的胰島素釋放，與本研究結(jié)果一致，推測(cè)乙酸、丙酸可能通過(guò)參與脂肪代謝相關(guān)基因的表達(dá)，通過(guò)腸-肝軸減少腸道黏膜通透性，減少內(nèi)毒素的移位，可能對(duì)NAFLD患者肝臟存在一定程度的保護(hù)作用，此外，本研究結(jié)果顯示異丁酸含量低于治療前，推測(cè)異丁酸可能參與NASH的發(fā)生發(fā)展，目前異丁酸對(duì)NAFLD研究較少，缺乏相應(yīng)文獻(xiàn)支持，期待更進(jìn)一步的研究。另有研究[34]表明，丁酸產(chǎn)生的益生菌能糾正HFD引起的小鼠腸肝免疫失調(diào)和減輕脂肪性肝炎，本研究結(jié)果顯示治療前后丁酸無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，需要更進(jìn)一步的研究證實(shí)。此外，本研究結(jié)果中HbA1c、FPG、TG、TC、ALT、AST、GGT、TBA、PT、UA、CAP、LSM等臨床指標(biāo)治療后均明顯低于治療前，乙酸、丙酸含量均高于治療前，推測(cè)乙酸、丙酸對(duì)肝臟的保護(hù)作用可能進(jìn)一步導(dǎo)致血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)的降低。

目前研究表明，在進(jìn)展至非酒精性脂肪性肝纖維化之前，NAFL與NASH是可逆的，一旦進(jìn)展為肝硬化則不可逆，可能進(jìn)一步發(fā)展為肝癌，目前臨床對(duì)于非酒精性脂肪性肝纖維化的診斷依賴(lài)于影像學(xué)檢查，如腹部彩超、CT、MRI等，肝穿刺活檢仍然是目前確診非酒精性脂肪性肝纖維化的金標(biāo)準(zhǔn)。超聲作為篩查手段，具有無(wú)創(chuàng)、簡(jiǎn)易、價(jià)格低等優(yōu)點(diǎn)，但只能檢測(cè)出>30%的脂肪變性，且不能做出定量評(píng)估，存在局限性；CT可以精確檢測(cè)出脂肪變，但此方法針對(duì)輕度脂肪變較為敏感，加之具有電離輻射，具有一定局限性；MRI雖無(wú)輻射，但其對(duì)脂肪肝診斷尚缺乏大量臨床試驗(yàn)，且價(jià)格昂貴，不宜多次重復(fù)檢測(cè)；肝穿刺活檢為有創(chuàng)性檢查且脂肪變不均勻會(huì)有取材誤差，還存在禁忌證等限制；臨床常用血清肝纖維化四項(xiàng)檢查一般耗時(shí)較長(zhǎng)等特點(diǎn)，臨床亟需一種無(wú)創(chuàng)、簡(jiǎn)便、價(jià)格低廉的方法。

本研究基于SCFA及PⅢP N-P、Ⅳ-C、HA、LN對(duì)非酒精性脂肪性肝纖維化診斷繪制ROC曲線(xiàn)，可以看出戊酸、己酸、PⅢP N-P、Ⅳ-C、HA對(duì)非酒精性脂肪性肝纖維化診斷價(jià)值較高，血清肝纖四項(xiàng)作為評(píng)估肝纖維化程度的可靠指標(biāo)在臨床廣泛應(yīng)用，本研究得出PⅢP N-P、Ⅳ-C、HA三者診斷價(jià)值較高，但LN診斷能力有限，推測(cè)可能PⅢP N-P、Ⅳ-C、HA早期明顯升高，HA后期才顯著增高有關(guān)，還可能與樣本量偏少，代表性不足有關(guān)，期待后續(xù)更大樣本量的研究。本研究進(jìn)一步對(duì)比戊酸、己酸與PⅢP N-P、Ⅳ-C、HA對(duì)非酒精性脂肪性肝纖維化診斷價(jià)值，可以看出戊酸、己酸診斷價(jià)值劣于PⅢP N-P，但優(yōu)于Ⅳ-C、HA，推測(cè)戊酸、己酸可以作為非酒精性脂肪性肝纖維化的輔助診斷指標(biāo)，進(jìn)一步根據(jù)約登指數(shù)最大值對(duì)應(yīng)的檢驗(yàn)變量值(戊酸為141.42 μg/g、己酸為6.93 μg/g、PⅢP N-P為68.06 ng/ml、Ⅳ-C為60.12 ng/mL、HA為104.46 ng/mL)作為診斷臨界值，期待可以為臨床非酒精性脂肪性肝纖維化的診斷提供一定的參考價(jià)值。

綜上所述，NAFLD患者存在生化指標(biāo)及腸道菌群代謝產(chǎn)物SCFA的異常，說(shuō)明SCFA代謝狀態(tài)的改變可以影響疾病進(jìn)程。腸道菌群代謝產(chǎn)物SCFA在NAFLD早期診斷和治療中具有重要的作用和應(yīng)用前景。但是由于本實(shí)驗(yàn)樣本量偏少，后續(xù)還需要進(jìn)一步開(kāi)展更大樣本的研究，進(jìn)一步探討SCFA腸道代謝與NAFLD發(fā)病機(jī)制的關(guān)系。

倫理學(xué)聲明：本研究2019年8月1日通過(guò)青海大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，批號(hào)為P-SL-201958，患者及家屬均簽署知情同意書(shū)。

利益沖突聲明：本研究不存在研究者、倫理委員會(huì)成員、受試者監(jiān)護(hù)人以及與公開(kāi)研究成果有關(guān)的利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：李惠、王學(xué)紅、馬臻棋參與研究的思路設(shè)計(jì)，修改文章關(guān)鍵內(nèi)容；馬文霞、楊麗萍參與研究數(shù)據(jù)的獲取過(guò)程。