賴(lài)麗雅 廖志東 賴(lài)駿威 鄭渝蘭 謝運(yùn)紅 曹浩林

[摘要]目的探究細(xì)胞蠟塊聯(lián)合癌胚抗原（CEA）、甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1（TTF-1）、上皮鈣黏素（E-cadherin）在肺腺癌胸腔積液病理診斷中的臨床價(jià)值。方法選擇2020年1月至2021年7月在梅州市中醫(yī)醫(yī)院進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)診斷且有病理診斷結(jié)果的100例患者的胸腔積液標(biāo)本作為研究對(duì)象。所有胸腔積液均行細(xì)胞涂片，剩余胸腔積液沉渣制成細(xì)胞蠟塊，行CEA、TTF-1、E-cadherin免疫組織化學(xué)染色。根據(jù)病理結(jié)果將研究對(duì)象分為3組：惡性組（n=35）、可疑組（n=34）、良性組（n=31）。比較各組TTF-1、CEA、E-cadherin表達(dá)陽(yáng)性率，比較各單一指標(biāo)、聯(lián)合指標(biāo)診斷效能。結(jié)果惡性組TTF-1、CEA、E-cadherin表達(dá)陽(yáng)性率較良性組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）?？梢煞蜗侔㏕TF-1、CEA、E-cadherin表達(dá)陽(yáng)性率較可疑癌高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。TTF-1、CEA、E-cadherin聯(lián)合診斷的診斷效能較單一指標(biāo)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。免疫細(xì)胞化學(xué)與細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)聯(lián)合診斷的陽(yáng)性率高于單一免疫細(xì)胞學(xué)、細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)檢測(cè)（P<0.05）。結(jié)論細(xì)胞蠟塊聯(lián)合CEA、TTF-1、E-cadherin在肺腺癌胸腔積液病理診斷中，具有較高的診斷效能。

[關(guān)鍵詞]細(xì)胞蠟塊;CEA;TTF-1;E-cadherin;肺腺癌;胸腔積液

[中圖分類(lèi)號(hào)]R734.2

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]2095-0616（2022）12-0130-04

肺癌是世界上最為常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，早期臨床癥狀較少或較輕，約75%的患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于晚期[1-2]。胸腔積液是晚期非小細(xì)胞肺癌最常見(jiàn)的臨床表現(xiàn)之一?，F(xiàn)階段，國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)胸腔積液診斷技術(shù)有諸多的研究報(bào)道，但是尚未形成統(tǒng)一觀點(diǎn)，在鑒別胸腔積液性質(zhì)上仍然存在諸多爭(zhēng)議[3-4]。傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)檢查只能確診肺癌，并不能明確病灶位置。然而，細(xì)胞蠟塊切片可多次切片，能夠融合免疫組織化學(xué)技術(shù)與細(xì)胞蠟塊切片技術(shù)，而且可實(shí)現(xiàn)組織學(xué)活檢，有利于明確肺癌病情發(fā)展分型、明確病灶位置，有助于臨床制訂個(gè)體化治療。該種檢查方法可應(yīng)用于不易獲取組織標(biāo)本的肺癌患者中[5]。本研究采用細(xì)胞蠟塊切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，觀察癌胚抗原（CEA）、甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子（1TTF-1）、上皮鈣黏素（E-cadherin），目的在于鑒別胸腔積液的性質(zhì)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2020年1月至2021年7月在梅州市中醫(yī)醫(yī)院進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)診斷且有病理診斷結(jié)果的100例患者胸腔積液的標(biāo)本。根據(jù)病理結(jié)果將研究對(duì)象分為三組：惡性組（n=35）、可疑組（n=34）、良性組（n=31）。惡性組男21例，女14例;年齡26～88歲，平均（56.53±5.75）歲;9例小細(xì)胞肺癌，26例肺腺癌?？梢山M男20例，女14例;年齡27～87歲，平均（55.86±6.46）歲;26例肺腺癌，8例可疑病例（包括1例重癥肺炎、2例非霍奇金淋巴瘤、5例肺腺癌）。良性組男19例，女12例;年齡28～87歲，平均（56.93±5.74）歲;11例肺結(jié)核，20例肺炎。三組患者一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)相關(guān)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，參與研究者均知情同意。

納入標(biāo)準(zhǔn)：通過(guò)臨床癥狀、纖支鏡等檢查確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：1病歷資料不完整者;2有乳腺癌、結(jié)腸癌、宮頸癌等惡性腫瘤病史者;3檢測(cè)到的癌細(xì)胞數(shù)量較少者。全部受檢者均滿(mǎn)足上述病例選擇標(biāo)準(zhǔn)，且都經(jīng)我院病理醫(yī)師診斷。

1.2標(biāo)本來(lái)源

全部受檢者的胸腔積液抽取均由經(jīng)驗(yàn)豐富的超聲科醫(yī)師在B超定位引導(dǎo)下完成操作，經(jīng)脫落細(xì)胞學(xué)檢查后取剩余100ml標(biāo)本，經(jīng)離心、包埋、切片、免疫組織化學(xué)染色。

1.3胸腔積液細(xì)胞蠟塊制備方法

1取約12ml癌性胸腔積液至離心管，置入離心機(jī)離心，棄上清;2加入4%甲醛，震蕩;3靜置30min，離心，棄上清，顯微鏡擦鏡紙包埋沉渣，4%甲醛固定，取材，脫水，制成石蠟細(xì)胞塊。

1.4免疫組織化學(xué)染色

采集標(biāo)本，切片，免疫組織化學(xué)檢查采用SP法，每例均標(biāo)記癌胚抗原（CEA）、甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1（TTF-1）、上皮鈣黏素（E-cadherin），染色步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作，實(shí)施顯色、脫水、復(fù)染及封固等處理后，以PBS液作為陰性對(duì)照。

1.5結(jié)果判定

傳統(tǒng)細(xì)胞涂片法及細(xì)胞蠟塊法[6-8]：根據(jù)光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞異型性、核分裂象數(shù)量、細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核比例等綜合判斷結(jié)果，有惡性腫瘤細(xì)胞、核異質(zhì)、未見(jiàn)癌細(xì)胞。陽(yáng)性：細(xì)胞膜、細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)可觀察到明顯變?yōu)辄S色或者棕褐色，著色細(xì)胞數(shù)占比>20%;陰性：細(xì)胞膜、細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)可觀察到輕微著色，或者無(wú)細(xì)胞著色，而且著色細(xì)胞占比≤20%。

1.6觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

1不同組別免疫細(xì)胞化學(xué)染色情況：比較TTF-1、CEA、E-cadherin表達(dá)陽(yáng)性率。2不同標(biāo)志物對(duì)惡性胸腔積液的診斷效能（靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、診斷準(zhǔn)確度）：真陽(yáng)性為a，假陽(yáng)性為b，假陰性為c，真陰性為d。靈敏度=a/（a+c）×100%，特異度=d/（b+d）×100%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=a/（a+b）×100%，陰性預(yù)測(cè)值=d/（c+d）×100%，診斷準(zhǔn)確度=（a+d）/總例數(shù)×100%。3對(duì)100標(biāo)本進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)與細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)比較。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。以病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，用受試者操作特征（ROC）曲線來(lái)進(jìn)行3種免疫標(biāo)志物對(duì)肺腺癌診斷效果的評(píng)價(jià)，計(jì)算靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、診斷準(zhǔn)確度以及曲線下面積（AUC），P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同組別免疫細(xì)胞化學(xué)染色情況

TTF-1細(xì)胞核著色，表現(xiàn)為棕黃色，CEA、E-cadherin細(xì)胞質(zhì)著色，表現(xiàn)為棕黃色。惡性組TTF-1、CEA、E-cadherin表達(dá)陽(yáng)性率較良性組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。可疑組中，26例可疑肺腺癌TTF-1、CEA、E-cadherin均呈高表達(dá)，8例可疑癌僅1例表達(dá)CEA，TTF-1、E-cadherin均無(wú)表達(dá)，可疑肺腺癌TTF-1、CEA、E-cadherin表達(dá)陽(yáng)性率較可疑癌高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2不同標(biāo)志物對(duì)惡性胸腔積液的診斷效能

TTF-1、CEA、E-cadherin聯(lián)合診斷的診斷效能較單一指標(biāo)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其中，三者聯(lián)合診斷惡性胸腔積液靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、診斷準(zhǔn)確度分別為98.90%、100%、100%、87.50%、98.98%。見(jiàn)表2～3。

2.3免疫細(xì)胞化學(xué)與細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)比較

免疫細(xì)胞化學(xué)與細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)聯(lián)合診斷的陽(yáng)性率為81.00%，高于單一免疫細(xì)胞學(xué)、細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)檢測(cè)的79.00%、56.00%（P<0.05）。見(jiàn)表4。TTF-1、CEA在腺癌細(xì)胞中的表達(dá)（IHC×400）見(jiàn)圖1～2。

3討論

胸腔積液發(fā)生與癌細(xì)胞的繁殖有緊密聯(lián)系，而且與新生血管形成有關(guān)。胸腔積液患者盡早診斷病變性質(zhì)有助于制訂個(gè)體化治療方案，進(jìn)而有助于提高其預(yù)后效果[9-10]?？梢?jiàn)，探究有效診治技術(shù)鑒別胸腔積液性質(zhì)尤為重要[11]。

目前，臨床主要采用細(xì)胞學(xué)涂片檢驗(yàn)，其操作方便，但受到檢驗(yàn)操作者技術(shù)的影響，不同檢驗(yàn)操作者水平不同，涂片技術(shù)差異，導(dǎo)致細(xì)胞涂片厚度不一致，細(xì)胞重疊，結(jié)構(gòu)比較模糊，難以遮掩癌細(xì)胞，增加臨床醫(yī)師診斷難度。細(xì)胞蠟塊技術(shù)既能夠檢測(cè)出惡性腫瘤細(xì)胞，而且可以重復(fù)多次取標(biāo)本。

HE染色細(xì)胞不存在變性及皺縮，能夠展開(kāi)免疫組織化學(xué)標(biāo)記，提高診斷準(zhǔn)確性，明確病灶原發(fā)部位，但是研究較少[12-13]。目前大部分對(duì)TTF-1、CEA和E-cadherin的研究是在肺腺癌組織蠟塊中，而在肺腺癌胸腔積液細(xì)胞蠟塊中研究甚少，且對(duì)三種標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)的研究目前空白。

本研究結(jié)果顯示，可疑肺腺癌TTF-1、CEA、E-cadherin表達(dá)陽(yáng)性率較可疑癌高（P<0.05）。其中，CEA能存在于消化系統(tǒng)癌及正常消化管組織中，并且人類(lèi)血清中也存在微量CEA，其屬于一種具有人類(lèi)胚胎抗原決定簇的酸性糖蛋白[14]。由于鱗癌和間皮原性細(xì)胞含有CEA，因此，免疫組織化學(xué)染色中CEA是鑒別間皮瘤、鱗癌及轉(zhuǎn)移性腺癌的常見(jiàn)指標(biāo)。TTF-1是診斷肺癌最常用的免疫組織化學(xué)標(biāo)志物之一，其在大部分甲狀腺癌中都有表達(dá)，在60%～90%的肺腺癌、90%的小細(xì)胞肺癌中表達(dá)，而在其他部位肺癌中很少表達(dá)[15-16]。E-cadherin的缺失，是上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要信號(hào)標(biāo)識(shí)，E-cadherin分子表達(dá)水平的降低有利于惡性腫瘤細(xì)胞脫落侵入細(xì)胞間質(zhì)。本研究結(jié)果顯示，免疫細(xì)胞化學(xué)與細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)聯(lián)合診斷的陽(yáng)性率為81.00%，較單一免疫細(xì)胞學(xué)、細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)檢測(cè)檢出的陽(yáng)性率高（P<0.05）。

綜上所述，細(xì)胞蠟塊聯(lián)合CEA、TTF-1、E-cadherin在肺腺癌胸腔積液病理診斷中，具有較高的診斷效能。

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（收稿日期：2021-09-26）