周良星 鐘雷 袁俊光 陳宇航 曹雙俊 劉建高 江坤生

[1 新希望六和股份有限公司,四川成都 610063; 2 廣東德寧水產(chǎn)科技有限公司,廣東佛山 528300; 3 廣東省水產(chǎn)高效健康養(yǎng)殖(德寧)工程技術(shù)研究中心,廣東佛山 528300; 4 華南農(nóng)業(yè)大學(xué),廣東廣州 510642]

膽堿是水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)必需的一種物質(zhì),其分子式為(CH3)3N(CH2)2OH。在飼料中,常用的膽堿添加形式是以玉米芯粉為載體的氯化膽堿粉劑,通常氯化膽堿含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為50%或60%。膽堿的生理功能主要包括:作為磷脂的組成成分,參與構(gòu)成和維持細(xì)胞結(jié)構(gòu);作為副交感神經(jīng)遞質(zhì)——乙酰膽堿的合成前體,參與機(jī)體神經(jīng)傳遞活動(dòng);作為肝臟脂肪代謝必需物質(zhì),促進(jìn)肝臟脂肪以脂蛋白的形式轉(zhuǎn)運(yùn),防止脂肪在肝臟過(guò)度積聚,具有預(yù)防脂肪肝的重要生理功能;提供甲基,合成激素、蛋氨酸、核酸、肉堿等物質(zhì),參與機(jī)體代謝活動(dòng)[1]。水產(chǎn)動(dòng)物自身合成的膽堿有限,遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足其生長(zhǎng)的需求,而且會(huì)受到飼料中蛋氨酸、甜菜堿等甲基供體的影響,因此在實(shí)際生產(chǎn)中必須通過(guò)外源進(jìn)行補(bǔ)充[2-3]。飼料中膽堿不足會(huì)導(dǎo)致水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)性能及其對(duì)飼料的利用效率下降,并伴隨器官病變退化等癥狀,這在黃鱔[4]、草魚[5]、斑點(diǎn)叉尾魚回[6]、羅非魚[7]等品種中已有相關(guān)發(fā)現(xiàn)。

近年來(lái),由于商業(yè)配合飼料的全面使用,我國(guó)大口黑鱸(Micropterussalmoides)的養(yǎng)殖產(chǎn)量逐年攀升,在2020年已達(dá)61.9萬(wàn)t[8]。但大口黑鱸在飼喂配合飼料的過(guò)程中易患糖脂代謝綜合征,具體表現(xiàn)為生長(zhǎng)性能下降,飼料利用率下降,肝臟腫大,肝纖維化、壞死[9]。有研究表明,適量添加氯化膽堿可改善羅非魚[10]、龍膽石斑[11]、軍曹魚[12]等魚類的脂質(zhì)代謝并提高其生長(zhǎng)性能。目前,有關(guān)大口黑鱸配合飼料中膽堿添加水平的報(bào)道較少,且大多限于幼魚階段。為此,本研究以大口黑鱸成魚為研究對(duì)象,探討不同氯化膽堿添加量對(duì)大口黑鱸(體質(zhì)量在40～160 g)生長(zhǎng)性能、飼料利用率及形體指標(biāo)的影響,以期為大口黑鱸飼料的配制提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼料

以秘魯超級(jí)魚粉、雞肉粉、去皮豆粕、棉籽蛋白為蛋白源,羅非魚油和大豆油為脂肪源,木薯淀粉為淀粉源,外源添加蘇氨酸、DL-蛋氨酸、L-賴氨酸鹽酸鹽,配制基礎(chǔ)飼料(原料全部購(gòu)自廣州希望飼料有限公司)。在基礎(chǔ)飼料中分別添加0(對(duì)照組)、3 000、6 000 mg/kg的氯化膽堿(純度50%,廣州希望飼料有限公司)制成3組膨化飼料,具體飼料配方見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)組成(干物質(zhì)) 單位:%

所有飼料原料經(jīng)粉碎后過(guò)80目篩(篩網(wǎng)孔徑0.180 mm),充分混合均勻,經(jīng)飼料膨化機(jī)用孔徑3.0 mm模板制成膨化飼料,于95 ℃條件下烘干后,置于-18 ℃冰箱儲(chǔ)藏備用。

1.2 試驗(yàn)魚及養(yǎng)殖管理

試驗(yàn)在廣東德寧水生生物研究中心杏壇養(yǎng)殖基地進(jìn)行。試驗(yàn)用大口黑鱸購(gòu)自養(yǎng)殖基地附近的苗種場(chǎng),購(gòu)買后在5.0 m×5.0 m×1.8 m(長(zhǎng)×寬×高)的池塘網(wǎng)箱中暫養(yǎng)2周。養(yǎng)殖水源來(lái)自附近東海河,經(jīng)處理后水中氨氮含量低于0.2 mg/L,亞硝酸鹽含量低于0.1 mg/L,溶解氧高于5.0 mg/L,pH為7.5～8.3。暫養(yǎng)期間,每日于7:00和17:00各投喂1次對(duì)照組飼料(見(jiàn)表1),表觀飽食投喂,待試驗(yàn)魚適應(yīng)養(yǎng)殖環(huán)境。

正式試驗(yàn)開(kāi)始前,對(duì)試驗(yàn)魚進(jìn)行24 h饑餓處理,之后挑選健康活潑、規(guī)格均勻的大口黑鱸1 500尾,經(jīng)稱量,其初始體質(zhì)量為(44.87±0.15)g,將試驗(yàn)魚隨機(jī)分成3組,每組設(shè)5個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)100尾魚。試驗(yàn)網(wǎng)箱的規(guī)格為2.0 m×2.0 m×1.8 m(長(zhǎng)×寬×高)。

正式試驗(yàn)期間,根據(jù)表1的飼料配方,每日于7:00和17:30各投喂1次飼料(表觀飽食投喂)。光照為自然光源,水溫為28.6～32.4 ℃,水體氨氮含量為0.05～0.20 mg/L,亞硝酸鹽含量為0.05～0.10 mg/L,溶解氧為4.54～8.41 mg/L,pH為8.0～8.4。觀察并記錄大口黑鱸攝食、健康及死亡情況,試驗(yàn)周期為60 d。

1.3 樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束后,對(duì)試驗(yàn)魚進(jìn)行停飼24 h處理,然后對(duì)全部網(wǎng)箱進(jìn)行稱重計(jì)數(shù)。每個(gè)網(wǎng)箱隨機(jī)抽取3尾魚,測(cè)定魚的體長(zhǎng)、體質(zhì)量,將魚解剖后取出其內(nèi)臟團(tuán),稱取內(nèi)臟和肝臟質(zhì)量,用于計(jì)算臟體比和肝體比,對(duì)分離的肝臟拍照并統(tǒng)計(jì)肝臟發(fā)白(白肝)的比例。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

采用以下公式計(jì)算成活率(RS,%)、日攝食率(RDF,%/d)、增重率(RWG,%)、特定生長(zhǎng)率(RSG,%/d)、飼料系數(shù)(CF)、肥滿度(K,g/cm3)、臟體比(IV,%)、肝體比(IL,%)、白肝比例(RW,%)等指標(biāo)。

RS=100×Nt/N0

(1)

RDF=Wd/(Wt+W0)×2/t×100

(2)

RWG=(Wt-W0)/W0×100

(3)

RSG=(lnWt-lnW0)/t×100

(4)

CF=Wd/(Wt-W0)

(5)

K=100×Wt/Lt3

(6)

IV=Wv/Wt×100

(7)

IL=WL/Wt×100

(8)

RW=NW/N×100

(9)

式(1)～(9)中,N0和Nt分別為試驗(yàn)魚開(kāi)始和結(jié)束時(shí)的數(shù)量,Wt和W0分別為試驗(yàn)終末和初始時(shí)魚的平均體質(zhì)量(g),t為試驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)(d),Wd為總投飼量(g),Lt為試驗(yàn)魚的終末體長(zhǎng)(cm),WL為試驗(yàn)魚肝臟質(zhì)量(g),WV為試驗(yàn)魚內(nèi)臟質(zhì)量(g),NW為解剖發(fā)現(xiàn)有白肝的數(shù)量,N為解剖的肝數(shù)量。

1.5 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)表示,采用SPSS 18.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA),若差異顯著,采用Duncan’s多重比較法分析試驗(yàn)結(jié)果的差異顯著性,設(shè)P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

由表2可見(jiàn),各試驗(yàn)組間日攝食率和成活率均無(wú)顯著差異(P>0.05),日攝食率隨著氯化膽堿添加量的增加有下降趨勢(shì)。在生長(zhǎng)性能方面,隨著氯化膽堿添加量的增加,大口黑鱸終末體質(zhì)量、增重率和特定生長(zhǎng)率升高,其中3 000 mg/kg組和6 000 mg/kg組的增重率和特定生長(zhǎng)率與對(duì)照組相比均顯著提高(P<0.05),6 000 mg/kg組的增重率和特定生長(zhǎng)率較3 000 mg/kg組有所提高,但組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。在飼料利用方面,隨著氯化膽堿添加量的增加,大口黑鱸的飼料系數(shù)有下降的趨勢(shì),但組間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。

表2 氯化膽堿不同添加水平對(duì)大口黑鱸生長(zhǎng)、飼料利用效率的影響

從表3可見(jiàn),隨著氯化膽堿添加量的增加,大口黑鱸的臟體比、肝體比和肥滿度有下降趨勢(shì),但均無(wú)顯著性差異(P>0.05),而3 000 mg/kg和6 000 mg/kg兩個(gè)試驗(yàn)組之間也沒(méi)有顯著差異(P>0.05)。與對(duì)照組相比,兩個(gè)氯化膽堿添加組的白肝比例均有所下降,但組間無(wú)明顯差異(P>0.05)。

表3 氯化膽堿不同添加水平對(duì)大口黑鱸形體指標(biāo)和肝臟顏色的影響

3 討論

膽堿能夠促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng),其主要機(jī)理被認(rèn)為是膽堿在水產(chǎn)動(dòng)物肝臟膽堿脫氫酶的作用下釋放出活性甲基,參與機(jī)體的合成代謝[13]。在本研究中,對(duì)照組大口黑鱸的增重率和特定生長(zhǎng)率均為最低,隨著飼料中氯化膽堿添加量的增加,試驗(yàn)組大口黑鱸的增重率和特定生長(zhǎng)率也隨之提高,飼料系數(shù)隨之降低,表明膽堿具有促進(jìn)大口黑鱸生長(zhǎng)的作用。這在對(duì)其他魚類的研究中有相似的發(fā)現(xiàn)。例如,楊代勤等[4]發(fā)現(xiàn),隨著飼料中膽堿添加量的增加,黃鱔的增重率增加,飼料系數(shù)下降,并且在氯化膽堿添加量達(dá)0.8%時(shí)有顯著差異(P<0.05);王廣軍等[14]的研究表明,在軍曹魚飼料中添加3 000 mg/kg的膽堿對(duì)于降低飼料系數(shù)、提高增重率和成活率效果顯著(P<0.05);Jiang等[15]發(fā)現(xiàn),團(tuán)頭魴的增重率隨著膽堿添加量的增加而顯著提高(P<0.05)。本研究中,大口黑鱸的飼料配方中是以膽堿含量較高的魚粉、雞肉粉等作為主要蛋白源的。有研究表明,魚粉、雞肉粉中的膽堿含量分別高達(dá)2 953 mg/kg[16]、5 980 mg/kg[17],但因膽堿在飼料原料中為結(jié)合態(tài)的有機(jī)堿,其生物學(xué)效價(jià)只有87.42%[16]。這說(shuō)明飼料原料中的膽堿不能完全被魚類利用,天然膽堿的生物利用率值得被關(guān)注;同時(shí),加工工藝也會(huì)導(dǎo)致飼料原料中膽堿含量的較大差異[15]。因此,配制飼料時(shí),在計(jì)算飼料原料中膽堿含量的同時(shí)也應(yīng)考慮原料中膽堿的生物學(xué)效價(jià)。

周越等[18]對(duì)大口黑鱸的研究表明,飼料中添加氯化膽堿(2 100 mg/kg)可顯著提高大口黑鱸(體質(zhì)量為20.14～93.71 g)的增重率和特定生長(zhǎng)率(P<0.05)。本研究中,添加氯化膽堿(6 000 mg/kg)組大口黑鱸的生長(zhǎng)表現(xiàn)和飼料利用率均為最優(yōu),但與周越等[18]研究中氯化膽堿的適宜添加量有所差異,分析其原因,可能是飼料營(yíng)養(yǎng)組成的差異造成的。本研究中試驗(yàn)飼料的粗脂肪含量接近于商業(yè)飼料的粗脂肪含量(12.81%～13.55%),高于相關(guān)研究(9.81%～10.02%)[18],因此對(duì)于膽堿的需求也相應(yīng)會(huì)增加。有研究表明,增加高脂飼料的膽堿能夠明顯提升武昌魚的生長(zhǎng)性能,而低脂飼料的提升效果則不明顯[19]。此外,同一種魚類在不同生長(zhǎng)階段,其自身的生長(zhǎng)及代謝、合成能力等會(huì)有差異,從而導(dǎo)致對(duì)膽堿的需求量不同[13]。研究表明,羅非魚幼魚期(56.63～231.21 g)的最適膽堿需求量為625.42 mg/kg[20],而在成魚期(220.25～512.87 g)的最適膽堿需求量為506.43 mg/kg[21]。因此,不同規(guī)格的大口黑鱸,其最適膽堿需求量亦有差異。

大口黑鱸在養(yǎng)殖過(guò)程中易出現(xiàn)因糖脂代謝障礙誘發(fā)的疾病,表現(xiàn)為肝臟發(fā)白(白肝)、代償性腫大、肝體指數(shù)增加等[22-23]。膽堿可通過(guò)調(diào)節(jié)糖異生、糖氧化代謝、脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)等途徑改善動(dòng)物的糖脂代謝[24-25]。相關(guān)研究表明,在飼料中添加適量的膽堿后,石斑魚[26]、草魚[27]、異育銀鯽[28]的肝體比和臟體比下降,脂質(zhì)代謝得到改善。本試驗(yàn)結(jié)果表明,在飼料中添加膽堿,大口黑鱸的白肝比例和肝體比均有一定的下降,這證實(shí)了在飼料中添加膽堿可改善大口黑鱸的糖脂代謝,并在一定程度上改善大口黑鱸肝臟的表觀健康狀況。

4 結(jié)論

本研究表明,在飼料中添加適宜的氯化膽堿可以顯著改善大口黑鱸(體質(zhì)量為40～160 g)的生長(zhǎng)。以生長(zhǎng)性能作為評(píng)價(jià)指標(biāo),氯化膽堿(飼料級(jí),50%)在大口黑鱸配合飼料中的推薦添加量為6 000 mg/kg。