DOI：10.3969/j.issn.10001565.2024.02.007

摘" 要：為研究鎂依賴性蛋白磷酸酶 1A（protein phosphatase magnesium-dependent 1A，PPM1A）對(duì)胰腺癌細(xì)胞遷移、侵襲及上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transformation，EMT）的影響，采用生物信息學(xué)技術(shù)以及細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)分析PPM1A在胰腺癌中的表達(dá)情況，劃痕、Transwell、qRT-PCR、Western blot、細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PPM1A對(duì)胰腺癌細(xì)胞PANC-1遷移、侵襲及EMT標(biāo)志物表達(dá)水平的影響，生物信息學(xué)網(wǎng)站預(yù)測(cè)PPM1A的上游miRNA.結(jié)果表明，PPM1A在胰腺癌中低表達(dá)，抑制PANC-1細(xì)胞的遷移、侵襲和EMT進(jìn)程，miR-105-5p為PPM1A的潛在上游miRNA.說明PPM1A和miR-105-5p可能是治療胰腺癌新的靶點(diǎn).

關(guān)鍵詞：PPM1A;上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化;胰腺癌;遷移;侵襲

中圖分類號(hào)：R735.9""" 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A""" 文章編號(hào)：10001565（2024）02016409

PPM1A inhibits the migration， invasion and EMT process of PANC-1 pancreatic cancer cells

HUANG Jinping1， ZHANG Ronghua1， WANG Meimei1， XIONG Yanan1， ZHANG Guangling2

（1. Hebei Key Laboratory for Chronic Diseases， School of Basic Medicine， North China University of Science and Technology， Tangshan 063210， China; 2. Hebei Provincial Key Laboratory of Medical-Industrial Integration Precision Medicine， School of Clinical Medicine， North China University of Science and Technology， Tangshan 063210， China）

Abstract： To investigate the effects of protein phosphatase magnesium-dependent 1A （PPM1A） on the migration， invasion and epithelial-mesenchymal transformation （EMT） in pancreatic cancer（PC）， bioinformatics analysis and cellular immunofluorescence methods were used to study the expression of PPM1A. Wound healing， Transwell， qRT-PCR， Western blot and immunofluorescence tests were used to detect the effects of PPM1A on the migration and invasion of PANC-1 cells and the expression level of EMT

收稿日期：20230817;修回日期：20231107

基金項(xiàng)目：

河北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（H2021209026；H2023209047）；河北省人力資源和社會(huì)保障廳項(xiàng)目（C20210340）；河北省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（213777115D）；河北省財(cái)政廳項(xiàng)目（冀財(cái)預(yù)復(fù)［2020］397號(hào)）

第一作者：黃金平（1998—），女，華北理工大學(xué)在讀碩士研究生，主要從事胰腺癌分子機(jī)制研究.

E-mail：2185544026@qq.com

通信作者：熊亞南（1978—），女，華北理工大學(xué)副教授，主要從事胰腺癌分子機(jī)制研究.

E-mail：xiongyanan@ncst.edu.cn

章廣玲（1972—），女，華北理工大學(xué)教授，博士，主要從事胰腺癌分子機(jī)制研究.

E-mail：zhanggl@ncst.edu.cn

markers. The bioinformatics website predicts upstream miRNAs of PPM1A.The results showed that PPM1A was underexpressed in PC and inhibited the migration， invasion and EMT process of PANC-1 cells， miR-105-5p was a potential upstream miRNA of PPM1A， and PPM1A and miR-105-5p may be new targets for the treatment of pancreatic cancer.

Key words： PPM1A; epithelial-mesenchymal transformation; pancreatic cancer; migration; invasion

胰腺癌是一種致命的惡性腫瘤，在世界范圍內(nèi)預(yù)后很差.由于發(fā)病隱匿性和非特異性癥狀，80%的胰腺癌患者確診時(shí)已是晚期，5年生存率不到5%.盡管許多癌癥（如結(jié)腸癌和乳腺癌）的存活率正在不斷提高，但胰腺癌患者的年死亡率幾乎與發(fā)病率持平［1］.因此，為了提高胰腺癌患者的生存率，需要更深入地了解胰腺癌進(jìn)展的分子機(jī)制.目前，研究表明胰腺癌有63種相關(guān)基因突變，這些突變主要存在于12條信號(hào)通路中［2］.然而，針對(duì)這些途徑進(jìn)行胰腺癌治療仍存在挑戰(zhàn)，因此探索和開發(fā)其他關(guān)鍵性分子層面的胰腺癌治療方法仍然十分必要.

鎂依賴性蛋白磷酸酶 1A（protein phosphatase magnesium-dependent 1A，PPM1A），又稱PP2Cα，是一種常見的蛋白磷酸酶，是絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶PP2C家族中最具特征性的一員.人類的PPM1A基因位于14號(hào)染色體，位置在14q23.1［3］，作為一種具有抑癌功能的磷酸化激酶，PPM1A限制了Smad2/3處于激活狀態(tài)的持續(xù)時(shí)間，從而使TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中斷，腫瘤細(xì)胞惡性增殖得到抑制，并阻遏EMT進(jìn)程［4］.在體內(nèi)，PPM1A底物非常廣泛，可與多種蛋白結(jié)合使其去磷酸化［5］.上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transformation，EMT）是細(xì)胞失去上皮特征和完整性，獲得間充質(zhì)特征的過程.在癌癥中，該過程的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)性發(fā)生改變，從而促進(jìn)侵襲的發(fā)生［6］.在EMT期間，癌細(xì)胞逐漸失去其上皮細(xì)胞黏附特性并獲得間充質(zhì)表型以及遷移和侵襲能力［7］.EMT不是二元開關(guān)，而是通過一系列中間狀態(tài)進(jìn)行［8］.然而，PPM1A在胰腺癌進(jìn)程中發(fā)揮何種生物學(xué)功能至今尚未報(bào)道.因此本研究旨在評(píng)價(jià)PPM1A對(duì)胰腺癌細(xì)胞的遷移、侵襲及EMT的影響，探究其上游的具體調(diào)控miRNA，以初步揭示PPM1A在胰腺癌進(jìn)展中的功能和潛在作用機(jī)制.

1" 材料和方法

1.1" 主要材料

人正常胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞HPNE（上海富衡生物科技有限公司），人胰腺癌細(xì)胞 PANC-1、AsPC-1、BxPC-3、胎牛血清（FBS）、細(xì)胞凍存液（武漢普諾賽公司）；PPM1A過表達(dá)組質(zhì)粒pcDNA3.1、pcDNA3.1-PPM1A和PPM1A敲低組質(zhì)粒si-NC、si-PPM1A#1-3（通用生物（安徽）股份有限公司）；DMEM高糖培養(yǎng)基、1640細(xì)胞培養(yǎng)基、青霉素-鏈霉素和胰酶（北京中生奧邦生物科技公司）；Lipofectamine 2000、Trizol總RNA提取試劑（美國(guó) Invitrogen公司）；甲醇、氯仿（天津恒興化學(xué)試劑有限公司）；異丙醇、無水乙醇（西隴科學(xué)股份有限公司）；DEPC水、10×TBST、RIPA蛋白裂解液、一抗二抗稀釋液（北京莊盟國(guó)際生物基因科技有限公司）；ECL超敏發(fā)光液、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒、蛋白Marker、DAPI（北京聚合美生物科技有限公司）；10×電轉(zhuǎn)、10×電泳緩沖液、羊抗兔/鼠二抗（北京普利萊基因技術(shù)有限公司）；一步法10%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）SDS-PAGE凝膠快速試劑盒（北京博泰斯有限公司）；Matrigel基質(zhì)膠（北京索萊寶科技有限公司）；Transwell小室（美國(guó)Corning公司）.

1.2" 細(xì)胞培養(yǎng)

新培養(yǎng)瓶中加入3 mL含體積分?jǐn)?shù)10% FBS的完全培養(yǎng)基后放入溫箱預(yù)溫，將細(xì)胞從液氮中取出接種于培養(yǎng)瓶中，置于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)5% CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2～3 d傳代.

1.3" 細(xì)胞轉(zhuǎn)染

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，分為si-NC組、si-PPM1A#1-3組、pcDNA3.1組、pcDNA3.1-PPM1A組，各組轉(zhuǎn)染步驟參照Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑說明書進(jìn)行.轉(zhuǎn)染終濃度為50 nmol/L，轉(zhuǎn)染4～6 h后換無雙抗含血清的培養(yǎng)液，用于后續(xù)細(xì)胞生物學(xué)特性研究以及qRT-PCR、Western blot等實(shí)驗(yàn).

1.4" qRT-PCR檢測(cè)PPM1A、上皮-間充質(zhì)標(biāo)志物的mRNA表達(dá)以及候選miRNA的表達(dá)

采用Trizol法提取細(xì)胞總RNA，通過Nanodrop測(cè)定RNA的質(zhì)量和濃度，mRNA使用聚合美轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄為cDNA.之后根據(jù)說明書使用qRT-PCR系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)，引物由上海生工合成.序列見表1.兩步法PCR擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)程序：95 ℃，30 s；95 ℃，5 s，40個(gè)循環(huán)；60 ℃，34 s.mRNA以GAPDH作為內(nèi)參，miRNA以U6作為內(nèi)參，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，使用2-ΔΔCt計(jì)算基因相對(duì)表達(dá)量.

1.5" Western blot檢測(cè)上皮-間充質(zhì)標(biāo)志物蛋白表達(dá)

細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h后，提取總蛋白，使用BCA檢測(cè)試劑盒測(cè)定細(xì)胞蛋白濃度，之后進(jìn)行蛋白變性.變性后上樣，進(jìn)行SDS-PAGE電泳、轉(zhuǎn)膜，脫脂奶粉室溫封閉2 h，然后與對(duì)應(yīng)抗體4 ℃過夜.第2天二抗孵育2 h后ECL顯色，拍照后通過Image J軟件分析條帶灰度值.

1.6" Transwell實(shí)驗(yàn)

將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基，以2×104個(gè)/孔接種于Transwell上層小室，下層小室加入650 μL含體積分?jǐn)?shù)20% FBS的DMEM培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h.次日，用鑷子夾出上層小室，吸凈上層小室中的培養(yǎng)液，生理鹽水洗3遍，棉簽輕拭上層小室.結(jié)晶紫染色5～10 min，生理鹽水洗3遍.顯微鏡下隨機(jī)選取視野進(jìn)行拍照，利用Image J軟件計(jì)算各組細(xì)胞遷移數(shù)，計(jì)算穿膜細(xì)胞數(shù)量的平均值.侵襲實(shí)驗(yàn)需要在上層小室接種細(xì)胞前30 min在Transwell小室上室中垂直滴加100 μL Matrigel基質(zhì)膠工作液，其余過程同遷移實(shí)驗(yàn)方法.

1.7" 劃痕實(shí)驗(yàn)

將PANC-1細(xì)胞按照2×105個(gè)/孔接種于6孔板中，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到50%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染換液后，用10 μL槍頭在孔內(nèi)均勻劃直線，PBS清洗細(xì)胞碎片，加入無血清的培養(yǎng)基后顯微鏡下拍照，隨后置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng).轉(zhuǎn)染后24 、48 h時(shí)在顯微鏡下觀察細(xì)胞遷移狀態(tài)，并拍照.計(jì)算各組細(xì)胞遷移率（遷移面積用Image J軟件測(cè)量），遷移率=（0 h劃痕寬度-24/48 h劃痕寬度）/0 h劃痕寬度×100%.

1.8" 細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)

將轉(zhuǎn)染24 h的細(xì)胞接種至共聚焦小皿，待細(xì)胞長(zhǎng)至50%即可開始固定，打孔，封閉，然后與對(duì)應(yīng)抗體4 ℃過夜.第2天二抗孵育45 min后利用DAPI對(duì)核進(jìn)行著色，在熒光顯微鏡下觀察并拍照，每分組留存多個(gè)視野圖像.

1.9" 生物信息學(xué)分析

利用美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）分析PPM1A在人體各組織中的表達(dá)，項(xiàng)目名稱HPA RNA-seq normal tissues，編號(hào)No.PRJEB4337.

利用3個(gè)生物信息學(xué)網(wǎng)站：miRWalk（http：//mirwalk.umm.uniheidelberg.de/）、 TargetScan（https：//www.targetscan.org/）和miRDB（http：//mirdb.org/）預(yù)測(cè)PPM1A的上游 miRNA，取交集得到21個(gè)PPM1A的潛在上游miRNA.

利用生物信息學(xué)網(wǎng)站Kaplan-Meier Plotter（https：//kmplot.com/analysis/）將4個(gè)miRNA 對(duì)于胰腺癌患者預(yù)后情況的影響進(jìn)行分析.

1.10" 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用Prism8.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，所有實(shí)驗(yàn)均獨(dú)立重復(fù)3次，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，2個(gè)獨(dú)立樣本間的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，2個(gè)以上分組之間通過單因素方差分析進(jìn)行比較，以Plt;0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2" 結(jié)果

2.1" PPM1A的生物信息學(xué)分析

HPA RNA-seq normal tissues項(xiàng)目采用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)分析了代表27種不同組織的95 個(gè)人類組織樣本，以確定所有蛋白質(zhì)編碼基因的組織特異性.結(jié)果表明，PPM1A在胰腺等多種組織中均有表達(dá)（圖1）.

2.2" PPM1A在胰腺癌細(xì)胞中低表達(dá)

免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與正常胰腺上皮細(xì)胞HPNE組相比，胰腺癌細(xì)胞系PANC-1、AsPC-1、BxPC-3中熒光強(qiáng)度較低（圖2）.結(jié)果提示PPM1A在胰腺癌細(xì)胞中呈低表達(dá).

2.3" PPM1A siRNA 及 pcDNA3.1-PPM1A有效轉(zhuǎn)染PANC-1細(xì)胞

qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出，與si-NC組相比，轉(zhuǎn)染si-PPM1A#1-3后PANC-1細(xì)胞中3組PPM1A的表達(dá)水平顯著降低（Plt;0.05，Plt;0.01，Plt;0.01）（圖3a），其中si-PPM1A#2組PPM1A的表達(dá)水平降低最為顯著，因此選取si-PPM1A#2進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn).與pcDNA3.1組相比，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-PPM1A后PANC-1細(xì)胞中PPM1A的表達(dá)水平顯著升高（Plt;0.0001）（圖3b）.以上結(jié)果提示PPM1A siRNA及pcDNA3.1-PPM1A有效轉(zhuǎn)染至PANC-1細(xì)胞.

與si-NC組相比，*Plt;0.05，**Plt;0.01；與pcDNA3.1組相比，####Plt;0.000 1

2.4" PPM1A抑制胰腺癌細(xì)胞PANC-1遷移及侵襲能力

通過Transwell實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞PANC-1的遷移及侵襲能力，結(jié)果顯示，與si-NC組相比，si-PPM1A組穿過基底膜的細(xì)胞數(shù)量明顯增加，即抑制PPM1A的表達(dá)后胰腺癌細(xì)胞PANC-1的遷移及侵襲能力顯著增加（Plt;0.05，Plt;0.01）；相反，與pcDNA3.1組相比，pcDNA3.1-PPM1A組穿過基底膜的細(xì)胞數(shù)量明顯減少，即過表達(dá)PPM1A后胰腺癌細(xì)胞PANC-1的遷移及侵襲能力顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.01，Plt;0.05）（圖4a）.劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在劃痕24 h和48 h后分別與相應(yīng)對(duì)照組相比，si-PPM1A組細(xì)胞的遷移面積顯著增加（Plt;0.000 1，Plt;0.001），pcDMA3.1-PPM1A組的細(xì)胞遷移面積顯著降低（Plt;0.001，Plt;0.000 1）（圖4b）.以上結(jié)果提示PPM1A可抑制胰腺癌細(xì)胞PANC-1的遷移及侵襲能力.

a、a′.PANC-1細(xì)胞中敲低或過表達(dá)PPM1A后遷移、侵襲代表圖像及統(tǒng)計(jì)；b、b′.PANC-1細(xì)胞中敲低或過表達(dá)PPM1A后的遷移面積及統(tǒng)計(jì)；

與si-NC組相比，*Plt;0.05，**Plt;0.01，***Plt;0.001，****Plt;0.000 1；與pcDNA3.1組相比，#Plt;0.05，##Plt;0.01，###Plt;0.001，####Plt;0.000 1

2.5" PPM1A抑制胰腺癌細(xì)胞PANC-1的EMT進(jìn)程

qRT-PCR結(jié)果表明，與si-NC組相比，si-PPM1A組上皮樣細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin、β-catenin表達(dá)水平降低（Plt;0.000 1，Plt;0.01），而間質(zhì)樣細(xì)胞標(biāo)志物Vimentin、ZEB1、ZEB2表達(dá)水平升高（Plt;0.01，Plt;0.001，Plt;0.01，）；與pcDNA3.1組相比，pcDNA3.1-PPM1A組上皮樣細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin、β-catenin表達(dá)水平升高（均Plt;0.05），而間質(zhì)樣細(xì)胞標(biāo)志物Vimentin、ZEB1、ZEB2表達(dá)水平降低（均Plt;0.05）（圖5a-e）.免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與si-NC組相比，si-PPM1A組間質(zhì)樣細(xì)胞標(biāo)志物ZEB2的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)；與pcDNA3.1組相比，pcDNA3.1-PPM1A組間質(zhì)樣細(xì)胞標(biāo)志物ZEB2的熒光強(qiáng)度減弱（圖5f）.Western blot實(shí)驗(yàn)得到與上述實(shí)驗(yàn)相似趨勢(shì)結(jié)果，以上結(jié)果差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Plt;0.05）（圖5g-k）.以上結(jié)果提示PPM1A可抑制PANC-1細(xì)胞中的EMT進(jìn)程.

a-e.E-cadherin、β-catenin、Vimentin、ZEB1、ZEB2的mRNA表達(dá)；f.免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)EMT標(biāo)志物ZEB2蛋白表達(dá)；g-k.EMT標(biāo)志物的蛋白表達(dá)及量化；

與si-NC組相比，*Plt;0.05，**Plt;0.01，***Plt;0.001，****Plt;0.000 1；與pcDNA3.1組相比，#Plt;0.05，##Plt;0.01，###Plt;0.001，####Plt;0.000 1

2.6" PPM1A上游miRNAs的篩選

為了確定PPM1A在胰腺癌發(fā)展過程中發(fā)揮的分子作用機(jī)制，利用3個(gè)生物信息學(xué)網(wǎng)站miRWalk、TargetScan和miRDB共同預(yù)測(cè)PPM1A的上游miRNAs，取交集得到21個(gè) PPM1A的潛在上游miRNAs（圖6a）.物種保守性分析網(wǎng)站ECR Browser對(duì)上述21個(gè) miRNAs進(jìn)行更深層次篩選（圖6b）.結(jié)果得出miR-381-3p、miR-539-3p、miR-105-5p、miR-654-5p在多種哺乳動(dòng)物內(nèi)物種保守性較高，其可能為PPM1A的上游miRNAs.

2.7" miR-105-5p是PPM1A的潛在上游miRNA

利用生物信息學(xué)網(wǎng)站Kaplan-Meier Plotter分析4個(gè)miRNAs對(duì)于胰腺癌患者預(yù)后情況的影響.結(jié)果提示，在胰腺癌患者中，miR-105-5p高表達(dá)患者相較低表達(dá)患者預(yù)后較差，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）（圖7a）.qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與HPNE細(xì)胞相比，PANC-1、AsPC-1和BxPC-3細(xì)胞中4個(gè)miRNAs的相對(duì)表達(dá)水平均顯著升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Plt;0.05）（圖7b-e）.綜上所述，4個(gè)miRNAs中，miR-105-5p作為 PPM1A的潛在上游miRNA，在多種哺乳動(dòng)物中物種保守性較高，高表達(dá)時(shí)胰腺癌患者預(yù)后較差，且在PANC-1細(xì)胞中具有較高表達(dá)水平，因此后續(xù)可選擇miR-105-5p進(jìn)行與PPM1A、胰腺癌相互作用關(guān)系的研究.

3" 討論

胰腺癌是一類高度惡性的消化系統(tǒng)腫瘤.作為中國(guó)致死人數(shù)排名第6的惡性腫瘤，其在早期病情較為隱匿，超過80%的患者在就診時(shí)已進(jìn)展為胰腺癌晚期，錯(cuò)失手術(shù)切除治愈的機(jī)會(huì)［9］.因此，作為很難及時(shí)發(fā)現(xiàn)、容易轉(zhuǎn)移、預(yù)后較差的惡性腫瘤，更早地診斷胰腺癌可能為患者的治療提供極大的幫助，改善患者的生存質(zhì)量并提高生存期.對(duì)胰腺癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制探究或可為該難題尋找攻克方法提供研究思路.

PPM1A作為一種常見的蛋白磷酸酶，能夠在很多種疾病的發(fā)生發(fā)展中起到關(guān)鍵調(diào)控因子作用，包括癌癥.本研究首先通過生物信息學(xué)分析以及免疫熒光實(shí)驗(yàn)得出PPM1A在胰腺癌中呈現(xiàn)低表達(dá).為了進(jìn)一步探討PPM1A在胰腺癌中的生物學(xué)功能，通過Transwell和劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，PPM1A可顯著抑制胰腺癌細(xì)胞PANC-1的遷移和侵襲，相關(guān)文獻(xiàn)表明EMT的激活可顯著促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲性表型，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞更快地侵入周圍正常組織［10］.而qRT-PCR實(shí)驗(yàn)和Western blot實(shí)驗(yàn)則表明PPM1A可抑制胰腺癌細(xì)胞PANC-1的EMT進(jìn)程.由以上結(jié)果推測(cè)PPM1A可能在胰腺癌中起到抑癌效果，或許臨床上在使用針對(duì)靶基因的分子療法時(shí)可考慮按照針對(duì)或結(jié)合使用PPM1A的方向?qū)σ认侔┻M(jìn)行抑制與治療.雖然關(guān)于PPM1A在疾病中發(fā)揮的作用已有相關(guān)報(bào)道［11］，但其在癌癥中的確切作用仍有爭(zhēng)議.相關(guān)文獻(xiàn)表明，PPM1A在肝細(xì)胞癌中促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲［12］，而在三陰性乳腺癌中則相反［13］.

MicroRNAs（miRNAs）是一組調(diào)節(jié)基因表達(dá)的內(nèi)源性非編碼RNA.miRNAs表達(dá)的改變涉及一系列生物過程的基因譜發(fā)生變化，導(dǎo)致許多人類疾病.由于循環(huán)中的miRNAs在人體體液中具有高穩(wěn)定性，因此被認(rèn)為是診斷和疾病預(yù)后有希望的生物標(biāo)志物［14］.與健康細(xì)胞中的miRNAs相比，人類癌癥中的miRNAs存在差異表達(dá)［15］.在機(jī)體中，PPM1A對(duì)于胰腺癌抑制功能的最終實(shí)現(xiàn)離不開上游miRNAs的調(diào)控，因此，本研究通過生物信息學(xué)方法對(duì) PPM1A上游miRNAs進(jìn)行預(yù)測(cè)與篩選，并對(duì)其在胰腺癌細(xì)胞PANC-1中的表達(dá)水平進(jìn)行分析.結(jié)果得出miR-381-3p、miR-539-3p、miR-105-5p、miR-654-5p在多種哺乳動(dòng)物內(nèi)物種保守性較高，并通過對(duì)這4個(gè)miRNAs對(duì)胰腺癌患者預(yù)后情況的影響作出生存曲線，得出miR-105-5p高表達(dá)患者的預(yù)后較差.因此，后續(xù)課題組將對(duì)miR-105-5p與PPM1A的靶向關(guān)系進(jìn)一步確定并將其在胰腺癌發(fā)生發(fā)展作用的分子機(jī)制進(jìn)行探究.

綜上所述，PPM1A抑制胰腺癌細(xì)胞PANC-1的遷移侵襲和EMT進(jìn)程，并進(jìn)一步預(yù)測(cè)了PPM1A的上游miR-105-5p，提示PPM1A可能是治療胰腺癌的潛在靶點(diǎn).

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（責(zé)任編輯：趙藏賞）