反相高效液相色譜法測(cè)定鹽酸奧洛他定片的含量

崔志紅，周慶英，王 穎，張健翔

（1.魯南制藥集團(tuán)股份有限公司，山東 臨沂 276006； 2.山東省臨沂市藥品檢驗(yàn)所，山東 臨沂 276001）

鹽酸奧洛他定為選擇性H1受體拮抗劑，對(duì)化學(xué)遞質(zhì)白三烯、凝血激肽、血小板活化因子的產(chǎn)生及游離均有抑制作用，對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)速激肽的游離也有抑制作用，用于治療過敏性鼻炎、蕁麻疹、濕疹、皮炎、癢疹、皮膚瘙癢癥、尋常型干癬、多形性滲出性紅斑伴發(fā)的瘙癢[1-2]。筆者擬建立一種測(cè)定鹽酸奧洛他定片中鹽酸奧洛他定含量的高效液相色譜法，使鹽酸奧洛他定和分解產(chǎn)物得以分離，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；UV2401型紫外-可見分光光度計(jì)（日本島津公司）；FA1104型電子天平（上海天平儀器廠）。鹽酸奧洛他定對(duì)照品（北京天衡藥物研究院，含量為100%，批號(hào)為060826）；鹽酸奧洛他定片（北京天衡藥物研究院，批號(hào)為 061101，061102，061103）；乙腈（色譜純，F(xiàn)isher Chemicals，批號(hào)為 063507）；蒸餾水（自制）；其他試劑為色譜純。所有試液使用前均經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[3]

色譜柱：Zorbax SB-C18柱（250 mm×4.5 mm，5μm，美國安捷倫公司）；流動(dòng)相：0.02 mol/L磷酸二氫鈉溶液（含0.2%辛烷基磺酸鈉，用濃磷酸調(diào) pH 至 3.0）-乙腈（65 ∶35）；流速：1.5 mL/min；檢測(cè)波長：210 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10μL。在此條件下，鹽酸奧洛他定的保留時(shí)間為9.29 min，理論板數(shù)約為9600。

2.2 溶液制備

精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的鹽酸奧洛他定對(duì)照品25 mg，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 mL含0.25 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于鹽酸奧洛他定12.5 mg），置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：精密稱取空白輔料適量（約相當(dāng)于鹽酸奧洛他定12.5 mg），置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液測(cè)定。結(jié)果空白輔料溶液在鹽酸奧洛他定主峰保留時(shí)間處不出峰，對(duì)鹽酸奧洛他定的含量測(cè)定無干擾。空白輔料、供試品溶液色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：稱取105℃干燥至恒重的鹽酸奧洛他定對(duì)照品約50 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，振搖使溶解，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻；分別精密量取 1，2，3，4，5，6，7 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL中分別含 0.05，0.10，0.15，0.20，0.25，0.30，0.35 mg的對(duì)照品溶液，分別精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜峰峰面積（A）。將峰面積（A）對(duì)相應(yīng)的質(zhì)量濃度（C）進(jìn)行回歸處理，得回歸方程 A=29.943 C+17.152，r=0.9999（ n=7）。結(jié)果表明，鹽酸奧洛他定質(zhì)量濃度在0.05～0.35 g/L范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取線性關(guān)系考察項(xiàng)下質(zhì)量濃度為0.20，0.25，0.30 mg的對(duì)照品溶液，按擬訂的色譜條件，每個(gè)質(zhì)量濃度連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果的 RSD分別為0.10%，0.10%，0.12% （n=5），表明方法精密度良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為061101）樣品，依法制備供試品溶液并測(cè)定峰面積，計(jì)算標(biāo)示含量。結(jié)果平均標(biāo)示百分含量為99.63%，RSD=0.55% （n=6）。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號(hào)為061101，含量為2.51%）20片，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于鹽酸奧洛他定12.5 mg），置100 mL量瓶中，平行制備6份，同時(shí)精密加入105℃干燥至恒重的鹽酸奧洛他定對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制備溶液，并依法測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，分別取10 μL注入液相色譜儀，按擬訂的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算標(biāo)示百分含量。結(jié)果批號(hào)為061101，061102，061103的3批樣品中，鹽酸奧洛他定的標(biāo)示百分含量分別為99.63%，99.22%，99.55%。

3 討論

以流動(dòng)相為溶劑，配制適當(dāng)質(zhì)量濃度的鹽酸奧洛他定對(duì)照品溶液，在200～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果最大吸收波長為206 nm，故選擇檢測(cè)波長為210 nm。試驗(yàn)中曾以C18柱為固定相，乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鈉為流動(dòng)相，通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相比例和水相的酸度進(jìn)行了一系列試驗(yàn)，結(jié)果表明該流動(dòng)相體系下主峰拖尾嚴(yán)重，理論板數(shù)低，主峰與最近雜質(zhì)峰的分離度較小。因此，加入離子對(duì)試劑辛烷基磺酸鈉，即以0.02 mol/L磷酸二氫鈉溶液（含0.2%辛烷基磺酸鈉，用濃磷酸調(diào)pH至3.0）-乙腈為流動(dòng)相，當(dāng)水相、有機(jī)相比例為65：35時(shí)，主峰保留時(shí)間適宜，柱效較高，最近雜質(zhì)峰能夠較好地分離，方法專屬性強(qiáng)，線性范圍寬，可以用于鹽酸奧洛他定片的含量測(cè)定。

[1]孫晉瑞，孫 倩，于 靜 .奧洛他定[J].齊魯藥事，2006，25（10）：636-638.

[2]徐維盛，牛長群.鹽酸奧洛他定中有關(guān)物質(zhì)的HPLC測(cè)定[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2007，38（12）：870-871.

[3]梁 偉，周 輝，劉東陽，等.HPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)定量測(cè)定人血漿中奧洛他定濃度[J]. 質(zhì)譜學(xué)報(bào)，2006，27（4）：193-197.