田 原，邸 陽，姜 巖，姜恩魁△

(1.遼寧醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院生理教研室，錦州 121001;2.遼寧醫(yī)學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)中心，錦州 121001)

芹菜素(apigenin)是一種來源廣泛的植物黃酮，是芹菜中的主要生物活性成分，分子式C15H10O5，分子量270，熔點(diǎn)347.5℃，具有抗突變、抗氧化、鎮(zhèn)靜、抗焦慮、抗菌、抗炎、抗腫瘤、降壓和舒張血管等多種藥理作用。目前，女性絕經(jīng)期導(dǎo)致雌激素減少引起的相關(guān)婦科疾病的預(yù)防和治療已成為當(dāng)今婦產(chǎn)科研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)問題。臨床主要采用激素替代治療，但激素替代治療有造成乳腺癌及血栓性疾病的危險(xiǎn)。因此從天然植物中尋找一種更安全可靠的藥品更顯示出重要性。研究表明芹菜素是一種植物雌激素，具有雌激素樣作用，能參與內(nèi)分泌和生殖的調(diào)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)主要探討芹菜素在生殖軸中的作用部位及作用結(jié)果，觀察芹菜素對正常雌性大鼠生殖激素的影響，為芹菜素臨床應(yīng)用提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組

健康成年雌性SD大鼠 48只，體質(zhì)量220～250g，由遼寧醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為3組，每組16只。

1.2 儀器與試劑

儀器:電熱恒溫干燥箱(湖北省黃石市醫(yī)療器械廠);RTZ-10A型嬰兒秤(無錫市蘅器廠);MP200A型電子天平(上海精科天平);離心機(jī)(北京醫(yī)療儀器修理廠);FT-631自動(dòng)計(jì)算125I放免測量儀(國營二六一廠)。試劑:GnRH、FSH、LH、E2、P放免試劑盒，二甲基亞砜(DMSO)，芹菜素(Api，美國Sigma公司)。

1.3 動(dòng)物處理

受試大鼠，自由食水，自然光照周期，隔離飼養(yǎng)一周，經(jīng)陰道涂片確定性周期，在情期施加處理因素。用20%氨基甲酸乙酯(1.0～1.2 g/kg)麻醉，于無菌操作下暴露顱骨，于前囟前端旁開2 mm處進(jìn)針3～4 mm深進(jìn)行側(cè)腦室注射。人工腦脊液組(對照組):人工腦脊液10μl;二甲基亞砜組(空白組):二甲基亞砜5μl+人工腦脊液5μl;芹菜素組:10-9mol/L芹菜素5μl+人工腦脊液5μl。常規(guī)縫皮，消毒，放回籠中飼養(yǎng)。在注藥后第3天進(jìn)行樣本采集。

1.4 樣本采集

在大鼠清醒狀態(tài)下斷頭，取血。血液經(jīng)肝素抗凝后10000×g離心5 min后取上清液，經(jīng)真空冷凍干燥后密封，存放于-40℃冰箱中待測。

1.5 激素含量的測定

利用放免分析方法按藥盒說明測定血漿中促性腺激素釋放激素(gonadotropin-releasing hormone，GnRH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH)、黃體生成素(luteinizing hormone，LH)、雌二醇(estradiol，E2)、孕酮(progesterone，P)的含量。

1.6 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果

二甲基亞砜組與人工腦脊液組相比，各激素含量沒有明顯差異，表明二甲基亞砜作為溶劑對實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒有影響。芹菜素組與人工腦脊液組相比，促性腺激素釋放激素(gonadotropin-releasing hormone，GnRH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH)和黃體生成素(luteinizing hormone，LH)的含量增加，差異有顯著性(P＜0.05)，而雌二醇(estradiol，E2)和孕酮(progesterone，P)的含量明顯減少，差異有顯著性(P＜0.01，表1)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明側(cè)腦室注射芹菜素后卵巢分泌功能受到明顯抑制，而下丘腦和腺垂體的功能不受抑制，甚至分泌激素的含量有所增加。

3 討論

3.1 芹菜素對卵巢功能的影響

大量相關(guān)研究表明女性卵泡的內(nèi)膜細(xì)胞和顆粒細(xì)胞共同參與雌激素的合成。卵泡內(nèi)膜細(xì)胞在黃體生成素(luteinizing hormone，LH)作用下產(chǎn)生的雄烯二酮和睪酮，通過擴(kuò)散進(jìn)入顆粒細(xì)胞，顆粒細(xì)胞在卵泡刺激素(follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH)的作用下使芳香化酶活性增強(qiáng)，進(jìn)而使雄烯二酮轉(zhuǎn)變?yōu)榇仆?，睪酮轉(zhuǎn)變?yōu)榇贫?。即由?nèi)膜細(xì)胞生成雄激素，再由顆粒細(xì)胞生成雌激素，稱為雌激素合成的雙重細(xì)胞學(xué)說。

Tab.1 Effect of apigenin on the levels of reproductive hormones in the plasma of female rat(，n=16)

Tab.1 Effect of apigenin on the levels of reproductive hormones in the plasma of female rat(，n=16)

DMSO:Dimethyl sulfoxide;Api:Apigenin*P＜0.05，**P＜0.01 vs control

Group GnRH(pg/ml) FSH(mIU/ml) LH(mIU/ml) E2(pg/ml) P(ng/ml)Control 2.397±0.030 1.275±0.029 0.594±0.076 8.667±0.144 10.133±0.808 DMSO 2.368±0.106 1.975±0.411 0.581±0.019 9.063±0.904 9.400±0.529 Api 3.179±0.218* 2.150±0.507* 0.860±0.055** 5.365±0.266** 5.625±0.793**

本次研究提示，芹菜素在人類的胎盤和卵巢微粒體中抑制雄烯二酮的芳香化和睪酮向雌激素轉(zhuǎn)化[1]。Le Bai JC依靠高壓液相色譜法和放射性的血流量探測儀，研究證實(shí)不同的黃酮類化合物對人類胎盤的芳香酶和17β-羥類固醇脫氫酶都有抑制效應(yīng)，其中芹菜素是更有效的抑制劑。實(shí)驗(yàn)顯示7位上的羥基是最重要的抵抗17β-羥類固醇脫氫酶活性的結(jié)構(gòu)[2]。芳香化酶是合成雌激素的關(guān)鍵酶，因此推測芹菜素對雌二醇(estradiol，E2)及孕酮(progesterone，P)分泌的抑制是通過抑制芳香化酶的活性實(shí)現(xiàn)的[3]。

3.2 芹菜素對下丘腦和腺垂體的影響

芹菜素是一種植物性雌激素，其雌激素樣作用，主要是通過雌激素受體起作用的，雌激素受體在全身分布廣泛，尤其是在下丘腦-腺垂體-卵巢軸上。Brainholt等人研究發(fā)現(xiàn)芹菜素能夠增加靶器官的雌激素受體的數(shù)量[5]，因此側(cè)腦室注射芹菜素后可能使大鼠體內(nèi)雌激素受體的活性和濃度相對增加，反饋?zhàn)饔糜谙虑鹉X和垂體，促進(jìn)GnR H、FSH和LH的分泌。但并不排除芹菜素通過其他方式直接作用于下丘腦和垂體而影響激素的分泌。

女性的生殖功能是由下丘腦-腺垂體-卵巢軸的共同調(diào)節(jié)下完成的，生殖軸中任何激素含量的改變都將影響生殖功能。本研究采用在體的方式，應(yīng)用低濃度芹菜素處理觀察生殖軸各級細(xì)胞內(nèi)分泌功能的變化。結(jié)果表明，低濃度芹菜素對生殖軸的各級細(xì)胞內(nèi)分泌功能均有影響。

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