張鎖峰等

摘 要：以‘白靈6號(hào)為供試菌株，通過對(duì)各處理的菌落直徑、菌絲生長(zhǎng)速率和菌絲生長(zhǎng)指數(shù)進(jìn)行比較，探討7種碳源對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響。研究結(jié)果表明：白靈菇有較廣的碳源譜，從生長(zhǎng)速率來看蔗糖、麥芽糖和可溶性淀粉是最優(yōu)的選擇，從生長(zhǎng)指數(shù)分析，果糖、葡糖糖和蔗糖菌絲生長(zhǎng)效果較好，分別為16.43、12.34和12.02，結(jié)合市場(chǎng)價(jià)格，最佳碳源選擇蔗糖。對(duì)菌落直徑、長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分、生長(zhǎng)指數(shù)進(jìn)行偏相關(guān)分析，結(jié)果表明：無控制變量時(shí)，長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分與菌落直徑顯著負(fù)相關(guān)，與菌絲生長(zhǎng)指數(shù)顯著正相關(guān)；在控制變量分別為菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分和菌落直徑時(shí)，菌落直徑與菌絲生長(zhǎng)指數(shù)顯著正相關(guān)，菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分與菌絲生長(zhǎng)指數(shù)顯著正相關(guān)。

關(guān)鍵詞：白靈菇；碳源；生長(zhǎng)速率；菌絲生長(zhǎng)指數(shù)

中圖分類號(hào)：S646 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 論文編號(hào)：2014-0478

Abstract： In this experiment， Pleurotus nebrodensis ‘No.6 as the tested materials， we compared the colony diameter， mycelia growth rate and mycelia growth index among the various processing， to study the effects of seven carbon sources on the growth of Pleurotus nebrodensis hypha. The results showed： Pleurotus nebrodensis had a broader spectrum of carbon sources， and the sucrose， maltose and soluble starch was the optimal choice from the growth rate， and fructose， glucose and sucrose for the hypha growth effect was good from the analysis of the growth index， 16.43， 12.34 and 12.02， respectively. Combined with the market price， the best carbon source selection was sucrose. We conduct partial correlation analysis on the colony diameter， growth scores， and growth index， the results showed： when there was no control variables， the growth scores was negatively correlated with the colony diameter， and positively related to the mycelia growth index； when the control variables were the colony growth scores and the colony diameter， the colony diameter and the colony growth score was respectively positively related to the colony growth index.

Key words： Pleurotus nebrodensis； Carbon Sources； Growth Rate； Mycelia Growth Index

0 引言

白靈菇，學(xué)名白靈側(cè)耳，屬擔(dān)子菌亞門（EnmycopHyta）、擔(dān)子菌綱（Basidiomycetes）、傘菌目（Agaricales）、側(cè)耳科（Pleurotaceae）、側(cè)耳屬（Pleurotus）[1]，是南歐、北非、中亞內(nèi)陸地區(qū)春末夏初發(fā)生的品質(zhì)極為優(yōu)良的一種大型肉質(zhì)傘菌。在中國(guó)僅分布于新疆干旱的沙漠戈壁里，故又有“天山神菇”、“西天白靈菇”之稱[2]。該菇子實(shí)體顏色潔白、脆嫩可口、香味濃郁，還具有很高的藥用價(jià)值。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，該菇子實(shí)體富含的礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)和真菌多糖可有效提高人體的免疫力，真菌多糖入藥有消積、殺蟲的作用，對(duì)腹部腫痛、腹部腫塊、心血管病、婦科腫痛、癌癥等疾病有預(yù)防和治療功效[2-3]，是一種營(yíng)養(yǎng)和保健價(jià)值均高的珍稀菇品。在食用菌生產(chǎn)過程中，菌種制作和培養(yǎng)是生產(chǎn)的前提和基礎(chǔ)，是食用菌栽培能否成功的關(guān)鍵因素之一，前人對(duì)白靈菇培養(yǎng)基篩選的研究較多[4-8]，但結(jié)果不盡相同，一般采用液體培養(yǎng)測(cè)菌絲體干重法[4]和培養(yǎng)皿培養(yǎng)測(cè)菌絲生長(zhǎng)速率[8]的方法，均存在一些弊端，不能全面地反映菌絲的生長(zhǎng)速度和菌絲的旺盛狀況。筆者通過引入菌絲生長(zhǎng)指數(shù)的概念采用培養(yǎng)皿培養(yǎng)的方法，全面地評(píng)價(jià)不同碳源對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響，并通過偏相關(guān)分析，研究菌絲生長(zhǎng)速率、長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分與生長(zhǎng)指數(shù)間的相互關(guān)系，以期為白靈菇的工廠化生產(chǎn)栽培種進(jìn)一步優(yōu)化培養(yǎng)條件提供更科學(xué)的方法和依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)

室內(nèi)試驗(yàn)于2014年在山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)研究中心實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)材料

1.2.1 菌種 供試菌種由山東省壽光市食用菌研究所提供，菌種編號(hào)為‘白靈6號(hào)。

1.2.2 培養(yǎng)基 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：馬鈴薯100 g，葡萄糖20 g，蛋白胨10 g，磷酸二氫鉀3 g，硫酸鎂1.5 g，瓊脂粉18 g，去離子水1000 mL，pH自然。

1.3 菌種的制備

取100 g馬鈴薯均勻的切成1 cm3大小，加去離子水煮沸后保持20～25 min，待馬鈴薯塊一捏即碎時(shí)過濾，取濾液定容至1000 mL，加入其他的藥品，完全溶后即是基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分裝入小試管（18 mm×180 mm）中，121℃高壓蒸汽滅菌30 min制成試管斜面，于斜面中央接入活化的斜面菌種‘白靈6號(hào)，在（25±1）℃條件下的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)暗培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿斜面后備用。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 不同碳源對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響 分別用等量的供試碳源代替基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的葡萄糖，以不加碳源為對(duì)照，研究不同碳源對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響，每個(gè)處理重復(fù)8次。供試培養(yǎng)基碳源為：葡糖糖、蔗糖、麥芽糖、可溶性淀粉、乳糖、果糖、D-木糖等。

1.4.2 白靈菇培養(yǎng)條件及菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 采用平板培養(yǎng)法，測(cè)定不同培養(yǎng)基上白靈菇的菌落直徑，并對(duì)菌落長(zhǎng)勢(shì)進(jìn)行評(píng)分，研究供試碳源對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響。所有試驗(yàn)均采用直徑90 mm的培養(yǎng)皿，培養(yǎng)基用量30 mL/皿，防止培養(yǎng)基因過少在培養(yǎng)的過程干掉，每個(gè)平板上定量接種直徑約5 mm的菌餅1塊，在（25±1）℃條件下的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)暗培養(yǎng)，采用劃線法標(biāo)記菌落直徑，共培養(yǎng)10天，測(cè)量菌落直徑，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)速率，并對(duì)其菌落長(zhǎng)勢(shì)進(jìn)行評(píng)分。菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：5分—菌絲長(zhǎng)勢(shì)濃密，顏色潔白；4分—菌絲長(zhǎng)勢(shì)較濃密，顏色潔白；3分—菌絲長(zhǎng)勢(shì)較稀疏，顏色白色；2分—菌絲長(zhǎng)勢(shì)較稀疏，顏色淺白色；1分—菌絲長(zhǎng)勢(shì)稀疏，顏色淺白色。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同碳源對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響

由表1、圖1可以看出，白靈菇菌絲在7種碳源培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)。但在不同碳源培養(yǎng)基上，菌絲的濃密程度、菌落的長(zhǎng)勢(shì)、顏色是不一致的，從顏色和濃密程度來看，果糖和木糖培養(yǎng)基生長(zhǎng)的白靈菇菌絲濃密、顏色潔白，菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分最高為5分，其次是乳糖和葡萄糖培養(yǎng)基，菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分為4分，然后是蔗糖和麥芽糖培養(yǎng)基，菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分為3分，可溶性淀粉培和空白培養(yǎng)基，菌絲稀疏、顏色較淺。

2.2 不同碳源對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)速率的影響

由表2可以看出，在不同培養(yǎng)基上統(tǒng)一培養(yǎng)10天后，菌落直徑表現(xiàn)為蔗糖>可溶性淀粉>麥芽糖>空白>果糖>葡糖糖>乳糖>D-木糖，不同培養(yǎng)基上的菌絲生長(zhǎng)速率快慢與菌落直徑表現(xiàn)相同，且蔗糖、麥芽糖、可溶性淀粉培養(yǎng)基上的菌絲生長(zhǎng)速率極顯著高于其他培養(yǎng)基，果糖和空白培養(yǎng)基極顯著高于乳糖、木糖培養(yǎng)基，顯著高于蔗糖培養(yǎng)基。

2.3 不同碳源對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)指數(shù)的影響

由圖2可以看出，白靈菇菌絲在不同碳源培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)指數(shù)不同，表現(xiàn)為果糖培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)指數(shù)最大，在0.05水平上顯著高于其他培養(yǎng)基，其次為葡萄糖培養(yǎng)基上的菌絲生長(zhǎng)指數(shù)，在0.05水平上顯著高于乳糖、可溶性淀粉和空白培養(yǎng)基，葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、D-木糖培養(yǎng)基菌絲生長(zhǎng)指數(shù)間差異不顯著。

2.4 不同碳源條件下菌絲生長(zhǎng)指數(shù)、菌落直徑、菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分間的偏相關(guān)分析

對(duì)菌絲生長(zhǎng)指數(shù)、菌落直徑、菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分3個(gè)因素進(jìn)行偏相關(guān)分析，如表3所示。在不進(jìn)行變量控制的情況下，菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分與菌落直徑顯著負(fù)相關(guān)，與菌絲生長(zhǎng)指數(shù)顯著正相關(guān)，而菌落直徑與菌絲生長(zhǎng)指數(shù)無顯著相關(guān)性。在控制變量為菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分的情況下，菌落直徑與菌絲生長(zhǎng)指數(shù)顯著正相關(guān)，控制變量為菌落直徑時(shí)，菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分與菌絲生長(zhǎng)指數(shù)顯著正相關(guān)。

3 結(jié)論

在本研究中，白靈菇菌絲對(duì)供試的7種碳源均能利用。但在不同培養(yǎng)基上，菌落長(zhǎng)勢(shì)是不一致的，從顏色和濃密程度來看，果糖和木糖培養(yǎng)基上的白靈菇菌落長(zhǎng)勢(shì)最好，其次是乳糖和葡萄糖培養(yǎng)基，然后是蔗糖和麥芽糖培養(yǎng)基，可溶性淀粉培和空白培養(yǎng)基最差。從菌絲生長(zhǎng)速率來看，蔗糖、麥芽糖和可溶性淀粉培養(yǎng)基是最優(yōu)的選擇。引入生長(zhǎng)指數(shù)來分析，果糖是白靈菇菌絲生長(zhǎng)的最佳碳源，其次是葡萄糖和蔗糖，二者之間并沒有顯著差異性，但與可溶性淀粉之間差異極顯著。

通過對(duì)菌絲生長(zhǎng)指數(shù)、菌落直徑、菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分3個(gè)因素進(jìn)行偏相關(guān)分析，結(jié)果表明，在不進(jìn)行變量控制的情況下，菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分與菌落直徑顯著負(fù)相關(guān)，與菌絲生長(zhǎng)指數(shù)顯著正相關(guān)。在控制變量為菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分的情況下，菌落直徑與菌絲生長(zhǎng)指數(shù)顯著正相關(guān)，控制變量為菌落直徑時(shí)，菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分與菌絲生長(zhǎng)指數(shù)顯著正相關(guān)。

4 討論

（1）筆者研究不同碳源對(duì)白靈菇的影響，在供試的7種碳源中有單糖、雙糖和多糖，白靈菇均能利用，表明對(duì)碳源的利用廣泛[11]，單從生長(zhǎng)速率來看蔗糖、麥芽糖和可溶性淀粉是最優(yōu)的選擇，結(jié)果同趙秀芳、周長(zhǎng)青等研究一致[12-15]，葡萄糖、果糖菌絲生長(zhǎng)速度較緩慢，結(jié)果與宮志遠(yuǎn)等的研究一致[16]；而結(jié)合濃密程度和顏色，用生長(zhǎng)指數(shù)來分析，果糖做白靈菇菌絲生長(zhǎng)所需碳源最優(yōu)與前者的研究不同[12]，其次是葡萄糖和蔗糖，二者之間并沒有顯著差異性，但與可溶性淀粉之間差異極顯著（P<0.01），說明白靈菇對(duì)單糖和雙糖沒有選擇性，而對(duì)多糖有一定的選擇性，

（2）菌絲生長(zhǎng)指數(shù)是從白靈菇菌落生長(zhǎng)濃密程度、顏色等方面來評(píng)價(jià)菌落長(zhǎng)勢(shì)的指標(biāo)，比以往單純的從某個(gè)角度分析更有優(yōu)勢(shì)，能更全面地反映實(shí)際生產(chǎn)情況[10]。在本研究中，結(jié)合菌絲濃密程度和顏色，用生長(zhǎng)指數(shù)來分析菌絲的生長(zhǎng)情況，結(jié)果表明果糖是白靈菇菌絲生長(zhǎng)所需的最優(yōu)碳源，此結(jié)果與前人研究不盡相同[12-16]。其次是葡萄糖和蔗糖，二者之間并沒有顯著差異性，但與可溶性淀粉之間差異極顯著（P<0.01），此結(jié)果說明，本研究中白靈菇對(duì)單糖和雙糖沒有選擇性，而對(duì)多糖有一定的選擇性。結(jié)合市場(chǎng)價(jià)格來考慮，為了降低實(shí)際生產(chǎn)成本最好選擇蔗糖作為白靈菇菌絲培養(yǎng)的碳源。

（3）以往的研究中，有關(guān)白靈菇菌絲生長(zhǎng)指標(biāo)間的相關(guān)性研究報(bào)道較少。筆者引入了菌絲生長(zhǎng)指標(biāo)間的相關(guān)性分析，通過對(duì)菌絲生長(zhǎng)指數(shù)、菌落直徑、菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分3個(gè)因素進(jìn)行偏相關(guān)分析，結(jié)果表明，在不進(jìn)行變量控制的情況下，菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分與菌落直徑顯著負(fù)相關(guān)，與菌絲生長(zhǎng)指數(shù)顯著正相關(guān)。在控制變量為菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分的情況下，菌落直徑與菌絲生長(zhǎng)指數(shù)顯著正相關(guān)，控制變量為菌落直徑時(shí)，菌落長(zhǎng)勢(shì)評(píng)分與菌絲生長(zhǎng)指數(shù)顯著正相關(guān)。

（4）本研究?jī)H用了1個(gè)白靈菇菌株作為試驗(yàn)對(duì)象，該菌株與其他不同來源的白靈菌株是否有差異，尚需進(jìn)一步研究；本研究未涉及最適碳源在生產(chǎn)用菌種培養(yǎng)基中的最佳用量，以及碳氮比試驗(yàn)，有待于細(xì)化研究?jī)?nèi)容。

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