何重香，余紅梅，李　玲，曾憲鵬，李　寧，王彥峰，葉啟發(fā),2　(.武漢大學(xué)中南醫(yī)院，武漢大學(xué)肝膽疾病研究院，移植醫(yī)學(xué)技術(shù)湖北省重點實驗室，湖北 武漢 43007；2.中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院，衛(wèi)生部移植醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究中心，湖南 長沙 4003)

硬膜外導(dǎo)管在大鼠頸靜脈置管短期多次采血中的應(yīng)用

何重香1，余紅梅1，李玲1，曾憲鵬1，李寧1，王彥峰1，葉啟發(fā)1,2(1.武漢大學(xué)中南醫(yī)院，武漢大學(xué)肝膽疾病研究院，移植醫(yī)學(xué)技術(shù)湖北省重點實驗室，湖北 武漢 430071；2.中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院，衛(wèi)生部移植醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究中心，湖南 長沙 410013)

[摘要]目的評估硬膜外導(dǎo)管置入大鼠頸靜脈后短期多次采血的應(yīng)用效果，探討可靠、經(jīng)濟(jì)的實驗大鼠頸靜脈采血方法。方法SPF級SD大鼠20只， 乙醚麻醉后，仰臥位固定于操作臺。沿頸部任一側(cè)縱行剪開皮膚。游離皮下組織，鈍性分離出頸靜脈血管。結(jié)扎頸靜脈遠(yuǎn)心端血管，在靜脈管壁上向心方向?qū)⒀鼙谌珜蛹?個“V”形小口，將硬膜外導(dǎo)管從小口處置入頸靜脈，結(jié)扎固定近心端血管與導(dǎo)管；進(jìn)行短期多次采血時，每次采血完畢應(yīng)用中心靜脈導(dǎo)管沖管技術(shù)進(jìn)行維護(hù)。結(jié)果20只實驗用大鼠中1只麻醉過程中死亡，其余均順利完成置管，置管成功率為100%。術(shù)后1只(5.3%)管道脫落，2只(10.5%)出現(xiàn)堵管現(xiàn)象，18只(94.7%)順利完成采血任務(wù)。術(shù)后均無感染發(fā)生，存活至下次手術(shù)。結(jié)論大鼠頸靜脈置入硬膜外導(dǎo)管后可短期多次采血，是經(jīng)濟(jì)、可行的采血方法。

[關(guān)鍵詞]硬膜外導(dǎo)管；頸靜脈；大鼠；采血

大鼠生存條件要求簡單，飼養(yǎng)成本低，在醫(yī)學(xué)實驗中常用于大批量實驗動物研究。研究疾病和藥物最常見的生物樣本就是大鼠血清或血漿。由于大鼠體積較小，在短期內(nèi)對其進(jìn)行多次采血會存在一定的困難[1-2]，而且還要考慮采血后大鼠能不能存活。因此采用合適的采血方法是獲取寶貴血液樣本的關(guān)鍵[3-4]。湯海濤等[5]報道應(yīng)用臨床麻醉使用的硬膜外導(dǎo)管進(jìn)行大鼠頸靜脈置管并輸液，達(dá)到了理想的效果。本實驗嘗試應(yīng)用硬膜外導(dǎo)管進(jìn)行大鼠頸靜脈置管后進(jìn)行短期多次抽血，獲得了成功，現(xiàn)將方法報告如下。

1材料與方法

1.1材料

SPF級SD大鼠20只，雄性，體質(zhì)量250～350 g，由湖北省實驗動物研究中心提供。常規(guī)滅菌手術(shù)器械，自制鼠板，醫(yī)用硬膜外導(dǎo)管、硬膜外導(dǎo)管接頭、采血試管，2 mL注射器，生理鹽水，0.5%碘伏，醫(yī)用棉簽，醫(yī)用無菌紗布， 4-0號線，乙醚。

1.2術(shù)前準(zhǔn)備

選擇硬膜外導(dǎo)管有多個小孔的原始圓滑頭端，剪一段長10 cm的導(dǎo)管，硬膜外導(dǎo)管接頭連接該段導(dǎo)管尾端，接頭再與注射器相連，將導(dǎo)管內(nèi)和接頭預(yù)沖生理鹽水備用。

1.3方法

大鼠采用乙醚吸入麻醉(乙醚對所檢測項目結(jié)果無影響)后，仰臥位固定于鼠板上。剃去大鼠頸部任一側(cè)的被毛，常規(guī)消毒手術(shù)區(qū)域。提起大鼠頸部的皮膚，剪1個0.2～0.3 cm的小口，游離皮下組織，鈍性分離出長約1.5 cm頸靜脈血管，在血管下穿過擺放2根4-0號線，一根結(jié)扎頸靜脈遠(yuǎn)心端血管，另一根放置于近心端備用。小心用鑷子提起頸靜脈的中間部位，使用眼科剪在靜脈管壁上向心方向?qū)⒀鼙谌珜蛹?個“V”形小口，約占靜脈周長的1/3～1/2，由助手提起兩端結(jié)扎線，適當(dāng)調(diào)節(jié)插管處頸靜脈的粗細(xì)和松緊，以減少大鼠出血量，同時便于將導(dǎo)管置入2.5～3 cm，推抽與導(dǎo)管末端相連的注射器，可見有血回流且推注順暢后，4-0號線結(jié)扎固定近心端導(dǎo)管，松緊適宜并把插管縫合在頸部肌肉上，以免導(dǎo)管被拔出。在完成當(dāng)天多次采血任務(wù)后，拔出導(dǎo)管，縫合切口充分止血后，實驗大鼠單獨喂養(yǎng)。

1.4置管后維護(hù)

在搬動大鼠時動作輕柔，防止人為扯掉插管；由于大鼠蘇醒狀態(tài)易躁動導(dǎo)致管道脫落，在不影響實驗結(jié)果的情況下可對大鼠進(jìn)行持續(xù)乙醚吸入麻醉，但要注意觀察大鼠呼吸和心跳，以防過度麻醉導(dǎo)致大鼠死亡。每次采血完畢，采用臨床常用的中心靜脈導(dǎo)管維護(hù)方法對管道進(jìn)行徹底沖管和封管處理，防止堵管。

2結(jié)果

20只實驗大鼠，1只在麻醉過程中死亡，其余均順利完成置管，置管成功率為100%。術(shù)后1只(5.3%)管道脫落，2只(10.5%)出現(xiàn)堵管現(xiàn)象，18只(94.7%)順利完成采血任務(wù)。術(shù)后大鼠均無感染發(fā)生，均存活至下次手術(shù)。

3討論

車兆義等[6]詳細(xì)比較了大鼠實驗中腹主動脈采血法、眼眶后靜脈叢的采血法、心臟穿刺采血方法、尾尖采血方法及頸靜脈采血法等各種方法的優(yōu)缺點，采血方法不同會影響實驗的結(jié)果。當(dāng)需要多次采血時，要考慮到選取的方法能否連續(xù)多次采血、采集的血樣是否溶血影響實驗結(jié)果、每次采血量是否足夠、采血后動物能不能存活等因素。有文獻(xiàn)報道使用注射器經(jīng)皮經(jīng)頸靜脈直接穿刺取血可取得較好的效果[7-8]，但是該方法不適用于采血不順利時嚴(yán)格按照時間要求進(jìn)行的采血操作。臨床上中心靜脈置管主要用于危急重癥患者的搶救、靜脈營養(yǎng)支持、快速補(bǔ)液以及中心靜脈壓的檢測等[9]。大鼠通過頸靜脈完成中心靜脈置管后，經(jīng)過良好的維護(hù)和管理，可以達(dá)到短期多次采血的目的。

使用硬膜外導(dǎo)管進(jìn)行大鼠頸靜脈置管，宜盡量使用原有帶側(cè)孔的硬膜外導(dǎo)管頭端，此端光滑不易穿破血管壁，可以減少對血管的損傷。若將導(dǎo)管置入端剪成斜面，雖較易置入血管，但因其銳利容易穿破血管，必須對銳利頭端進(jìn)行打磨處理。硬膜外導(dǎo)管一般剪約10 cm長度，過短則不便操作，易導(dǎo)致脫管的發(fā)生，過長則血液滯留管腔過多，不利于徹底沖管，導(dǎo)致堵管的概率增加。導(dǎo)管置入深度適宜，置入過淺導(dǎo)管容易脫出，置入過深則易致心律失常的發(fā)生[10-11]。本組實驗中導(dǎo)管一般置入頸靜脈深度為2.5～3 cm。

術(shù)中分離大鼠頸靜脈須小心謹(jǐn)慎，徹底分離靜脈是順利完成插管的重要步驟、應(yīng)盡量去除血管外壁的結(jié)締組織與脂肪組織[12]。一般分離后較粗的靜脈，經(jīng)過剪切口的刺激，靜脈立即收縮變細(xì)[13]，增加了插管的難度。同時硬膜外導(dǎo)管質(zhì)地較軟，在切口處要反復(fù)多次嘗試插管，易造成血管壁損傷，而血管壁損傷是插管堵塞的原因之一[14]。 本組實驗有1只大鼠發(fā)生插管時堵塞，可能與此有關(guān)。

由于大鼠實驗前禁食禁水，使大鼠血液濃縮，黏稠度高于平常，發(fā)生血栓的可能性增高。為避免肝素抗凝劑對藥物濃度的影響，封管液中一般不加入肝素鈉。每次采血后應(yīng)用中心靜脈導(dǎo)管封管技術(shù)，以生理鹽水立即沖管和封管以保持管道通暢。采血時，首先以2 mL注射器抽出導(dǎo)管內(nèi)混有生理鹽水的血液0.5 mL并舍棄，以避免生理鹽水混入血液標(biāo)本中，再另取一支空注射器采集到足夠合乎要求的血液標(biāo)本，最后用生理鹽水0.5 mL沖洗導(dǎo)管并封管。所有沖洗、封管均采用脈沖式，以達(dá)到徹底沖盡接頭處的血液，避免殘留在接頭的血液堵管或影響下次藥物濃度的準(zhǔn)確性。采血間隙，一般每30 min就行1次生理鹽水脈沖式?jīng)_管。本組實驗1例采血過程中出現(xiàn)堵管，考慮與沖管間隔時間過長、沖封管不徹底有關(guān)。

硬膜外導(dǎo)管價廉、易得，在大鼠頸靜脈置入硬膜外導(dǎo)管，并進(jìn)行短期多次采血應(yīng)用于大鼠藥物濃度監(jiān)測可靠、經(jīng)濟(jì)，值得推廣。

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(編輯：楊穎)

CT imaging appearance and pathological features of basal cell adenoma in parotid gland Application of multiple short-term blood collections after epidural catheter in rats’ jugular vein

HE Chong-xiang1,YU Hong-mei1,LI Ling1,ZENG Xian-peng1,LI Ning1,WANG Yan-feng1,YE Qi-fa1,2

(1.Zhongnan Hospital of Wuhan University,Institute of Hepatobiliary Diseases of Wuhan University,Wuhan Hubei 430071,China；2.The 3rd Xiangya Hospital of Central South University,Research Center of National Health Ministry on Transplantation Medicine Engineering and Technology,Changsha Hunan 410013,China)

Abstract:ObjectiveTo evaluate the application effect of multiple short-term blood collections in epidural catheter placed into rats’ jugular vein,and a reliable and economical method of blood collection was established. MethodsTwenty healthy Sprague-Dawley (SD) rat of specific pathogen free (SPF) grade were anesthetized and fixed on the laboratory bench in the supine position.The neck skin was incised longitudinally and subcutaneous tissue was isolated.The jugular vein was exposed by blunt separation and ligated from the distal.A V-shape was cut from the proximal and epidural catheter was placed into jugular vein.The proximal vein and the catheter were ligated.The central venous catheters were washed after blood collections. ResultsOne rat died from anesthesia while others had a 100%successful rate of placing epidural catheter.After surgey，one rat (5.3%)had a drop of catheter，two rats(10.5%)had an obstruction in catheter,18 rats (94.7%) finished collecting blood successfuly.No infection was obseved after surgery and all lived to the next experiment time. ConclusionMultiple short-term blood collections after epidural catheter placed into rats’ jugular vein is a reliable and economical method for blood collection.

Keywords:epidural catheter;jugular vein;rats;blood collection

[中圖分類號]R-331

[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A

[文章編號]1672-5042(2015)06-0649-03

[收稿日期]2015-04-11[修回日期] 2015-04-27

[通訊作者]葉啟發(fā),E-mail:yeqifa_china163.com

doi:10.11659/jjssx.05E015003 [11] 李文艷.大鼠實驗中幾種常用采血法利弊探討[J].中國傷殘醫(yī)學(xué),2015.10.13214/j.cnki.cjotadm.2015.14.104.