TLR4/NF-κB與急性冠脈綜合征的相關(guān)性及通心絡(luò)的干預(yù)作用

李玉紅謝萍1李遠2謝輝袁躍龍洪有勤徐光旭侯明英

(重慶市永川區(qū)人民醫(yī)院心內(nèi)科，重慶402160)

摘要〔〕目的檢測不同類型冠心病患者炎性因子的變化及通心絡(luò)的穩(wěn)定斑塊作用。方法選擇冠心病患者66例，正常對照組24例，比較各組間Toll樣受體(TLR)4、核因子(NF)-κB及腫瘤壞死因子(TNF)-α變化。將急性冠狀動脈綜合征(ACS)患者分為常規(guī)治療組和通心絡(luò)治療組，治療4 w后再次檢測上述指標(biāo)。結(jié)果ACS患者TLR4、NF-κB、TNF-α的表達較穩(wěn)定性心絞痛組和正常對照組顯著增高(P<0.01)。治療后兩組TLR4、NF-κB和TNF-α水平均降低(P<0.05)。且通心絡(luò)治療組TLR4、NF-κB和TNF-α水平降低更顯著(P<0.05)。結(jié)論通心絡(luò)可減輕動脈的炎癥反應(yīng)，干預(yù)動脈粥樣斑塊的進展，有望成為新的穩(wěn)定斑塊藥物。

關(guān)鍵詞〔〕急性冠脈綜合征；Toll樣受體4；核因子-κB；腫瘤壞死因子-α

中圖分類號〔〕R544.1〔文獻標(biāo)識碼〕A〔

基金項目：重慶市衛(wèi)生局醫(yī)學(xué)科研計劃項目(2012-2-303)；重慶市永川區(qū)科委軟科學(xué)指導(dǎo)項目

1甘肅省人民醫(yī)院心內(nèi)科

2重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院中心實驗室

第一作者：李玉紅(1971-)，女，副主任醫(yī)師，碩士，主要從事冠心病基礎(chǔ)與臨床研究。

Toll樣受體(TLR)是介導(dǎo)先天免疫和炎癥反應(yīng)的主要受體，是連接先天免疫和獲得性免疫的橋梁。TLR4被激活，啟動胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，最終激活核因子(BNF)-κB，從而參與冠心病的發(fā)生、發(fā)展。早期發(fā)現(xiàn)并穩(wěn)定易損斑塊對降低心血管事件有重要作用。目前對于冠狀動脈內(nèi)斑塊不穩(wěn)定或破裂的藥物干預(yù)研究多局限于他汀類藥物。最近有研究顯示〔1〕，通心絡(luò)能干預(yù)動脈粥樣硬化斑塊發(fā)展、有效預(yù)防斑塊破裂。但是對于通心絡(luò)能否通過抑制TLR4/NF-κB信號通路，從而發(fā)揮穩(wěn)定斑塊的作用，目前尚不明確。本實驗通過觀察急性冠脈綜合征(ACS)患者通心絡(luò)治療前后TLR4、NF-κB、腫瘤壞死因子(TNF)-α的變化，了解通心絡(luò)對炎癥反應(yīng)的抑制作用，探討通心絡(luò)治療ACS的可能機制。

1資料與方法

1.1一般資料46例ACS患者，其中不穩(wěn)定性心絞痛24例，急性心肌梗死22例，男29例，女17例，年齡(60.01±12.08)歲，體重指數(shù)〔BMI,(23.26±1.98)kg/m2〕，吸煙15例，高血壓21例。將其隨機分為常規(guī)治療組22例，男14例、女8例，平均年齡(59.20±12.01)歲，BMI(22.10±1.87)kg/m2，吸煙6例，高血壓11例；通心絡(luò)治療組24例，男15例、女9例，平均年齡(60.21±12.86)歲，BMI(24.13±1.57)kg/m2，吸煙9例，高血壓10例。常規(guī)治療組給予ACS的常規(guī)治療，包括阿司匹林、低分子肝素、β受體阻滯劑、硝酸酯類等。通心絡(luò)治療組在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上合用通心絡(luò)(2粒，3次/d，河北以嶺藥業(yè)公司生產(chǎn))。

穩(wěn)定性心絞痛患者20例，男12例，女8例，平均年齡(61.06±13.03)歲，BMI(25.03±2.01)kg/m2,吸煙7例，高血壓8例。不穩(wěn)定性心絞痛、急性心肌梗死和穩(wěn)定性心絞痛均按美國心臟病學(xué)會/美國心臟協(xié)會標(biāo)準，且均經(jīng)冠狀動脈造影證實。排除急性感染、惡性腫瘤、自身免疫性疾病、血管疾病、嚴重肝腎疾病、近1 w內(nèi)有手術(shù)或外傷史者。

正常對照組為以胸痛住院，既往無高血壓、糖尿病和冠心病史，經(jīng)心電圖、心肌酶學(xué)和冠狀動脈造影排除冠心病的患者24例，其中男13例，女11例，平均年齡(56.80±8.30)歲，BMI(23.14±2.12)kg/m2，吸煙12例，無高血壓患者。ACS組、穩(wěn)定性心絞痛組及正常對照組，在年齡、性別、BMI、吸煙量及血脂等方面差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。常規(guī)治療組和通心絡(luò)治療組在年齡、性別、體重指數(shù)、吸煙量及血脂等方面差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2標(biāo)本采集所有入選患者治療前1 d和治療4 w后分別清晨空腹采集肘靜脈血5 ml，其中3 ml用乙二胺乙酸二鉀(EDTAK2)抗凝，另外2 ml不抗凝，立即用3 000 r/min低溫離心機分離血漿，留取血清-75℃冰箱保存，備用。

1.3TLR4的測定流式細胞儀檢測外周血單核細胞TLR4表達，取100 μl用EDTA-K2抗凝的全血，加入20 μlPE標(biāo)記鼠抗人TLR4單抗(美國，Biolegend公司)，混勻后室溫孵育30 min，用標(biāo)本處理儀進行細胞固定和破膜，離心后棄上清，用2 ml Stain緩沖液(ph 7.4的磷酸緩沖液加2%小牛血清加0.1%疊氮鈉)洗兩遍，細胞沉淀用500 ml Stain緩沖液重懸后上流式細胞儀(美國，Coulter公司)檢測，同時設(shè)不加標(biāo)記抗體的陰性對照管。

1.4NF-κB的測定采用酶聯(lián)免疫法測定NF-κB的水平。

1.5TNF-α的測定采用放射免疫法測定TNF-α的水平。

1.6統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS18.0進行方差分析、t檢驗。TLR4與NF-κB、TNF-α之間的關(guān)系采用Spearman相關(guān)分析。

2結(jié)果

2.1外周血單核細胞TLR4、NF-κB表達和血清TNF-α的水平的變化ACS組外周血單核細胞TLR4、NF-κB表達和血清TNF-α水平較穩(wěn)定性心絞痛組和正常對照組顯著增高(P<0.01)，穩(wěn)定性心絞痛組和正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2ACS患者TLR4、NF-κB與TNF-α的相關(guān)性ACS患者外周血單核細胞TLR4、NF-κB表達與NF-κB、TNF-α的水平呈正相關(guān)(r=0.717、0.721,P<0.05)。

2.3ACS患者治療前后TLR4、NF-κB表達和TNF-α水平的變化治療前通心絡(luò)治療組和常規(guī)治療組外周血單核細胞TLR4、NF-κB表達和血清TNF-α水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療后兩組外周血單核細胞TLR4、NF-κB表達和血清TNF-α水平均降低(P<0.05)。且通心絡(luò)治療組外周血單核細胞TLR4、NF-κB表達和血清TNF-α水平較常規(guī)治療組降低更顯著(P<0.05)。見表2。

表1　各組TLR4、NF-κB、 TNF-α水平比較

與正常對照組比較：1)P<0.01；與穩(wěn)定性心絞痛組比較：2)P<0.01

表2　ACS患者治療前后TLR4、NF-κB 、TNF-α水平的變化

與本組治療前比較：1)P<0.05；與常規(guī)治療組治療后比較：2)P<0.05

3討論

ACS確切機制尚未闡明，冠脈粥樣斑塊不穩(wěn)定是其基本病理生理特點。參與斑塊不穩(wěn)定或破裂的可能機制較為復(fù)雜。目前研究表明炎癥在其中起重要的作用。TLR4是介導(dǎo)免疫炎癥反應(yīng)的主要模式識別受體，當(dāng)病原體入侵或損傷和硬化的動脈處存在有內(nèi)源性配體如低度修飾的低密度脂蛋白時TLR通路即被活化，啟動胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，最終激活NF-κB。NF-κB是具有多向性調(diào)節(jié)作用的核轉(zhuǎn)錄因子，主要調(diào)控與免疫、炎癥反應(yīng)相關(guān)的基因的表達〔2〕。作為上游信號分子的NF-κB對炎性細胞因子及toll受體等因子的基因轉(zhuǎn)錄發(fā)揮重要的調(diào)控作用。NF-κB的活化誘導(dǎo)單核/巨噬細胞產(chǎn)生TNF-α等免疫炎性細胞因子、共刺激分子以及黏附分子等，參與冠心病的發(fā)生、發(fā)展〔3〕。Methe等〔4〕研究表明，ACS患者外周血單核細胞TLR4表達明顯增加，且與斑塊穩(wěn)定性相關(guān)。TNF-α是一種具有多生物活性的炎性細胞因子，與機體的免疫炎癥反應(yīng)關(guān)系密切，參與動脈粥樣硬化及冠心病的發(fā)生、發(fā)展。本研究結(jié)果提示外周血單核細胞TLR4、NF-κB與TNF-α水平明顯增高與ACS發(fā)生、發(fā)展顯著相關(guān)?；蛟STLR4、NF-κB、TNF-α不僅可以作為冠心病的危險因子，也可作為冠心病心血管事件發(fā)生的預(yù)測和預(yù)后指標(biāo)。通心絡(luò)是由人參、水蛭、土鱉蟲、全蝎、蜈蚣、蟬蛻、降香、冰片等藥物組成，具有益氣養(yǎng)血、活血通絡(luò)的作用。其治療冠心病已10多年，確切療效已成共識。有研究在冠狀動脈硬化大白兔模型實驗中發(fā)現(xiàn)通心絡(luò)有穩(wěn)定斑塊作用，且其作用相當(dāng)于小劑量辛伐他汀〔5〕。有研究表明通心絡(luò)能降低細胞胞質(zhì)氧化型低密度脂蛋白膽固醇濃度，抑制動脈的炎癥反應(yīng)，減緩動脈粥樣硬化進程〔6〕。本研究表明通心絡(luò)能減輕動脈粥樣硬化斑塊炎癥反應(yīng)，有穩(wěn)定斑塊作用。此作用可能與其抑制TLR4過度表達，及其信號通路下游炎性細胞因子TNF-α的分泌，從而穩(wěn)定冠狀動脈粥樣硬化易損斑塊，減少心血管事件發(fā)生。

4參考文獻

1Zhang L，Liu Y，Lu XT，etal.Traditional Chinese medication Tongxinluo dose-dependently enhances stability of vulnerable plaques：a comparison with a high-dose simvastatin therapy〔J〕.AM J Physiol Heart Circ，2009;297(6)：H2004-H2014.

2Zhang GL，Sankar Ghosh.Toll-like receptor-mediated NF-κB activation：a phylogenetically conserved paradigm in innate immunity〔J〕.J Clin Invest,2001；107(1)：13-9.

3Wyss CA，Neidhart M，Altwegg L，etal.Cellular actors，Toll-like receptors，and local cytokine profile in acute coronary syndromes〔J〕.Eur Heart J，2010；31(12)：1457-69.

4Methe H，Kim JO，Kofler S，etal.Expansion of circulating TLR4-positive monocytes in patients with ACS〔J〕.Circulation，2005；111(20)：2654-61.

5李震，楊躍進，秦學(xué)文，等.通心絡(luò)與辛伐他汀對兔粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性干預(yù)的對比研究〔J〕.中華醫(yī)學(xué)雜志，2006；86(44)：3149-50.

6吳以嶺，游佳華，袁國強，等.通心絡(luò)超微粉對高脂飲食兔胸主動脈NF-κB、胞間粘附分子1及血管細胞粘附分子1表達的影響〔J〕.中華心血管病雜志，2007；35(3)：271-4.

〔2014-02-16修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)