張建中，徐菲菲，陳小燕，周　蓉（.揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)，江蘇泰州53；.老百姓大藥房江蘇有限公司，江蘇南京0000）

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中藥三棱的總黃酮提取工藝研究

張建中1，徐菲菲2，陳小燕1，周蓉1
（1.揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)，江蘇泰州225321；2.老百姓大藥房江蘇有限公司，江蘇南京210000）

摘要：目的研究和確定中藥三棱總黃酮的最佳工藝條件。方法以蘆丁為對照，總黃酮提取率為考察指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)L16（45），以提取溫度（A）、粉末粒度（B）、提取時間（C）、溶劑體積分?jǐn)?shù)（D）和料液比（E）為參數(shù)進(jìn)行提取工藝的優(yōu)選。結(jié)果最佳提取工藝：粒度為40目藥材粉末，1：30的料液比，在80℃下，60%乙醇提取3h。結(jié)論經(jīng)優(yōu)化后的提取工藝總黃酮提取率得到明顯提高。

關(guān)鍵詞：三棱；總黃酮；提取工藝；正交實(shí)驗(yàn)

中藥三棱為黑三棱科植物黑三棱Sparganium stoloniferum.Buch.-Ham.去皮的塊莖。始載于《開寶本草》，具有破血行氣，消積止痛的功效［1］，主治瘕痞塊，瘀血經(jīng)閉，食積脹痛［2-3］?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃酮類成分系三棱活性部位之一［4］，三棱中總黃酮具有較強(qiáng)的抗血小板聚集和抗血栓的作用［5］。對不同產(chǎn)地三棱中總黃酮的提取工藝及含量研究較少。本文在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用正交試驗(yàn)對總黃酮提取工藝進(jìn)行研究，確定了最佳的提取工藝參數(shù)，并用紫外分光光度法對鄭州、湖南岳陽等十個產(chǎn)地的三棱進(jìn)行總黃酮含量測定。

1　儀器與材料

754型紫外可見分光光度計(jì)（上海精密儀器有限公司）；XS205DU分析天平（瑞士梅特勒—托利多）；蘆丁對照品（上海源葉生物科技有限公司提供，批號：YN1103SA14）；材料均為國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，亞硝酸鈉（批號：20150109）、無水乙醇（批號：20140629）、甲醇（批號：20140531）、丙酮（批號：20120627）、硝酸鋁（批號：20131209）、氫氧化鈉（批號：20131125）。所有試劑均為分析純。三棱藥材購于安徽亳州藥材市場，經(jīng)鑒定為黑三棱科植物黑三棱Sparganium stoloniferum Buch.-Ham.的塊莖。藥材粉碎，過40目篩備用。

2　方法與結(jié)果

2.1對照品溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取蘆丁對照品5mg，60%乙醇溶液溶解、定容至25ml，搖勻即得濃度為0.2mg·ml-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲備液。經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)液顯色后用1cm比色皿在波長400～700nm區(qū)間進(jìn)行紫外掃描，確定最大吸收波長為480nm。移取上述蘆丁儲備液0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml于6個25ml的量瓶中，加入5%的NaNO2溶液1.0ml，搖勻、靜置5min，加入10%Al（NO3）3溶液1.0ml，搖勻、靜置5min，加入1.00mol·l-1NaOH溶液5.0ml并搖勻，60%乙醇溶液定容，10min后于波長480nm下測定吸光度，試劑空白為參比液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線［6］，見圖1。采用最小二乘法進(jìn)行回歸分析，得線性回歸方程：A=11.20c+0.011，r=0.999。

圖1　總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2含量測定方法

精密稱取三棱藥材粉末（40目）1g，用60%乙醇溶液，料液比1︰30，在80℃下進(jìn)行回流提取，每次提取3h。定容后進(jìn)行測定分析。

三棱藥材中總黃酮含量測定：以蘆丁對照品溶液為標(biāo)樣，采用亞硝酸鈉-三氯化鋁比色法，在480nm處測定其吸光值?？傸S酮提取率［7］（%）=（黃酮類化合物總質(zhì)量/干物料質(zhì)量）100%。

2.3提取溶劑的選擇

黃酮苷元易溶于甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑，難溶于水；黃酮苷易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑，因此可用不同濃度的有機(jī)溶劑來提取。分別稱取三棱藥材樣品1g，在80℃下，用不同濃度的甲醇、乙醇、丙酮25ml提取，時間1h，結(jié)果表明丙酮得率最高，乙醇次之，甲醇最低，結(jié)果見圖2。綜合考慮實(shí)驗(yàn)安全等因素，選用乙醇溶液作為提取溶劑。

圖2　不同溶劑對總黃酮提取的影響

2.4單因素實(shí)驗(yàn)

2.4.1粒度對提取效果的影響分別精密稱取20目、40目、60目和100目三棱樣品粉末各1g于250ml錐形瓶中，加入60%乙醇溶液25ml于80℃水浴回流提取1h，放冷過濾，取續(xù)濾液5ml，定容至25ml，測定三棱總黃酮含量并計(jì)算出得率。結(jié)果見圖3。

圖3　不同粒度對總黃酮提取的影響

2.4.2乙醇體積分?jǐn)?shù)對提取效果的影響精密稱取三棱樣品1g（40目）樣品7份于250ml容量瓶中，分別加入20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液25ml，80℃水浴回流1h，放冷過濾，取續(xù)濾液5ml，定容到25ml，測定總黃酮含量并計(jì)算得率。結(jié)果見圖4。

圖4　不同體積分?jǐn)?shù)溶劑對總黃酮提取的影響

2.4.3溫度對提取效果的影響精密稱取三棱樣品1g（40目）4份于250ml錐形瓶中，加60%乙醇溶液25ml，分別在不同溫度（50℃、60℃、70℃和80℃）水浴回流提取1h，放冷過濾，精密吸取續(xù)濾液5ml，定容到25ml，測定總黃酮含量并計(jì)算得率。結(jié)果見圖5。

圖5　不同溫度對總黃酮提取效果的影響

2.4.4料液比對提取效果的影響精密稱取三棱樣品1g（40目）7份于250ml錐形瓶中，分別加入60%乙醇溶液10ml、20ml、25ml、30ml、35ml、40ml和50ml。在80℃水浴回流提取1h，放冷過濾，精密吸取續(xù)濾液5ml，定容至25ml，測定總黃酮含量并計(jì)算得率。結(jié)果見圖6。

圖6　不同料液比對總黃酮提取效果的影響

2.4.5時間對提取效果的影響精密稱取三棱樣品1g（40目）4份于250ml錐形瓶中，加60%乙醇溶液30ml，于80℃水浴回流提取，提取時間分別為1h、2h、3h和4h，放冷過濾，精密吸取續(xù)濾液5ml，定容到25ml，測定總黃酮含量并計(jì)算得率。結(jié)果見圖7。

圖7　不同提取時間對總黃酮提取的影響

2.5正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

在上述實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對影響三棱中總黃酮得率的因素：粒度、提取時間、料液比、溫度、提取溫度以及乙醇濃度進(jìn)行L16（45）正交試驗(yàn)，結(jié)果如表1、表2所示。極差分析［7］可知，5種因素對總黃酮得率影響大小依次為A＞B＞E＞D＞C，5種因素的最佳組合為：40目三棱樣品粉末用60%乙醇溶液，料液比1∶30，在80℃溫度下提取3h。

表1　正交實(shí)驗(yàn)因素水平

表2　正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.6驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

依據(jù)上述最佳提取工藝參數(shù)，對三棱藥材中總黃酮含量進(jìn)行測定，結(jié)果見表3，表明在此工藝條件下三棱藥材總黃酮得率較穩(wěn)定。

表3　驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3　結(jié)論

（1）粒度、提取時間、料液比、溫度、提取溫度以及乙醇濃度對三棱藥材總黃酮的提取率均有影響，影響大?。禾崛囟龋玖６龋玖弦罕龋疽掖俭w積分?jǐn)?shù)＞提取時間。

（2）三棱中總黃酮最佳提取工藝參數(shù)為：粒度40目，乙醇濃度60%，溫度80℃，料液比1∶30，提取時間3h。三棱藥材總黃酮最佳提取工藝參數(shù)為：80℃，40目，60%乙醇，1∶30料液比，提取3h。

參考文獻(xiàn)：

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

［2］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典（上）［M］.上海：科學(xué)技術(shù)出版社，1977.

［3］國家中醫(yī)藥管理局編委會.中華本草［M］.上海：科學(xué)技術(shù)出版社，1999.

［4］張衛(wèi)東，楊勝.中藥三棱化學(xué)成分研究［J］.中國中藥雜志，1995，20（6）：356-357.

［5］鄧英君.三棱不同提取物鎮(zhèn)痛劑抗凝血作用研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，1999，10（12）：882-883.

［6］毛淑杰，沈鴻，解愛萍，等.三棱不同炮制品黃酮成分含量測定［J］.中國中藥雜志，1999，24（1）：29.

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（責(zé)任編輯劉紅）

Study on Extraction Process of Total Flavonoids from Rhizoma Sparganii

ZHANG Jian-zhong1，XU Fei-fei2，CHEN Xiao-yan1，ZHOU Rong1
（1. Yangtze River Pharmaceutical Group，Ltd，Taizhou Jiangsu 225321；2. Lao Baixing Pharmacy Jiangsu Co.，Ltd，Nanjing Jiangsu 210000，China）

Abstract：To study and establish the extraction process of total flavonoids from Rhizoma Sparganii. Methods：Use orthogonal design L16（45）to screen out the best extraction process condition with the rate of total flavonoids for index，rutin as reference substance，take the extraction temperature，the size of Rhizoma Sparganii，extraction time，concentration of ethanol and the ratio of Rhizoma Sparganii to solution as the factors. Results：The extraction temperature was 80℃，the size of Rhizoma Sparganii was 40，the extraction time was 3h，the concentration of ethanol was 60%，the ratio of Rhizoma Sparganii to solution was 1：30. Conclusion：The rate of total flavonoids of Rhizoma Sparganii was increased after optimizing the extraction process.

Key words：Rhizoma Sparganii；Total flavonoids；extraction process；orthogonal test

中圖分類號：R284.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1671-0142（2016）01-0058-03

作者簡介：張建中（1978-），男，江蘇泰州人，工程師.