盧青云，張文杰，王　沛，強永杰

甲胎蛋白、α-L-巖藻糖苷酶和高爾基體蛋白73檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的意義

盧青云，張文杰△，王沛，強永杰

（甘肅省第二人民醫(yī)院檢驗科，甘肅 蘭州 730000）

探討血清中甲胎蛋白（AFP）、α-L-巖藻糖苷酶（AFU）和高爾基體蛋白73（CP73）在原發(fā)性肝癌診斷中的意義。對原發(fā)性肝癌患者（55例）、良性肝病患者（60例）、健康體檢者（60例）共175個血清樣本，采用化學發(fā)光法檢測各組甲胎蛋白含量，用速率法測定α-L-巖藻糖苷酶含量，用酶聯(lián)免疫吸附法測定GP73含量。原發(fā)性肝癌組血清AFP、AFU和GP73含量均顯著高于其他各組，差異有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05）；原發(fā)性肝癌患者血清AFP、AFU和GP73陽性率分別為65.6%、74.9%、83.2%，AFP、AFU和GP73聯(lián)合檢測陽性率可提高到95.2%。聯(lián)合檢測AFP、AFU 和GP73可提高原發(fā)性肝癌的診斷效率，尤其是AFP陰性原發(fā)性肝癌的診斷效率，對原發(fā)性肝癌的早期診斷有一定指導意義。

原發(fā)性肝癌；甲胎蛋白（AFP）；α-L-巖藻糖苷酶（AFU）；高爾基體蛋白73

原發(fā)性肝癌（Primary hepatic cancer，PHC）指肝細胞或肝內膽管細胞發(fā)生癌變，是臨床上常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一。我國是肝癌大國，且發(fā)病率仍在呈上升勢頭［1］。由于肝癌發(fā)病較為隱襲，早期診斷困難，大多數患者在確診時已到中晚期，治療難度大，術后易復發(fā)及發(fā)生遠處轉移，預后較差，患者生存期短。因此早發(fā)現、早診斷、早治療是提高肝細胞癌患者生存率的最佳途徑［2］。被廣泛認可的原發(fā)性肝癌血清標志物是是甲胎蛋白（AFP），但其在病毒性肝炎和慢性肝臟疾病中亦可見不同程度升高，臨床檢測的敏感度較低。隨著蛋白組學技術的發(fā)展，近年來發(fā)現高爾基體蛋白73（GP73）、a-L巖藻糖苷酶（AFU）在原發(fā)性肝癌中呈高表達，廣泛用于原發(fā)性肝癌早期診斷［3］。本研究以原發(fā)性肝癌，良性肝病，健康對照樣本為試驗材料，分別以放射免疫法、速率法及酶聯(lián)免疫吸附試驗測定血清中AFP、AFU和GP73含量，探討三項聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的臨床意義。

1　資料與方法

1.1一般資料

本研究選取我院2013年1月-2013年12月住院患者血清標本115例，年齡在20～69歲（46.63±13.69），其中男性70例，女性45例，包括原發(fā)性肝癌55例，良性肝病60例。原發(fā)性肝癌診斷根據中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會（2001）修訂的《原發(fā)性肝癌的診斷與分期標準》進行［4］。肝硬化和肝炎的診斷按照中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會（2000）聯(lián)合修訂的《病毒性肝炎防治方案》進行［5］。選擇本院同期體檢健康者60例，年齡在22～72歲（44.65±14.59），其中男性30例，女性20例，病毒檢測和ALT等檢測項目均為陰性，排除相關肝病。

1.2方法

所有受試者均于清晨空腹抽取靜脈血3mL，分離血清檢測。GP73測定采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），試劑盒購自上海泛柯生物公司。測量儀器為美國BioTck公司ELX800酶標儀和Bio-Rad1575洗板機，美國雅培I2000全自動免疫分析儀及配套試劑，肝癌判斷值為≥90μg/L。AFP測定采用化學發(fā)光免疫分析法，測量儀器為BECKMANAcess化學發(fā)光儀，配套試劑肝癌判斷值為≥200μg/L。AFU測定采用速率法，測量儀器為日本奧林巴斯AU-640全自動生化分析儀及寧波美康生物科技有限公司試劑盒檢測，肝癌判斷值為≥45U/L。

1.3統(tǒng)計學處理

各組數據均以平均數（x）±標準差（s）表示。用SPSSI7.0統(tǒng)計軟件對數據進行t檢驗和P值，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

各組血清AFP、AFU和GP73含量比較：PHC組血清AFP、AFU和GP73含量均明顯高于良性肝病組及健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），檢測結果見表1。

2　結果

表1　三組血清AFP、AFU、GP73檢測結果比較（±s）

表1　三組血清AFP、AFU、GP73檢測結果比較（±s）

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原發(fā)性肝癌組血清AFP、AFU和GP73檢測陽性率：AFP陽性率為65.6%，AFU陽性率為74.9%，GP73陽性率為 83.2%。三項聯(lián)合檢測陽性率為95.2%。

3　討論

原發(fā)性肝癌（PHC）是亞洲人和非洲人的主要死因。影像學技術檢測用于診斷肝癌仍然有很多的局限性，使很多患者未能及時得到準確診斷，失去了最佳的治療時機。

AFP是一種糖原蛋白，由590個氨基酸殘基組成，屬于類白蛋白家族，具有免疫調節(jié)和調控細胞增殖等作用。在哺乳動物的胚胎期，主要由肝臟實質細胞和卵黃囊細胞合成。出生后不久AFP的產生迅速降低，以后完全被白蛋白替代。血清AFP作為肝癌的普查、診斷及療效隨訪觀察指標已多年，但高分化或分化很差的肝癌細胞常不產生AFP，仍有30%左右的肝癌患者AFP在正常范圍內［6］。而且部分肝炎和肝硬化患者可出現AFP的一過性升高，女性妊娠期，AFP也會出現生理性升高。有研究認為，AFP作為肝癌早期診斷指標，敏感度為39%～64%，特異度為76%～91%，陽性預測值為9%～32%［7，8］。因此單純使用AFP監(jiān)測原發(fā)性肝癌的發(fā)生、發(fā)展已經不能滿足臨床需要，很容易造成漏診和誤診。

AFU是一種能分解蛋白糖鏈中巖藻糖苷鍵的溶酶體酶，廣泛存在于哺乳動物的細胞和體液中，參與含巖藻糖基的糖肽、糖脂、低聚糖等生物活性大分子的分解代謝。1984年Deugnier等發(fā)現PHC患者血清AFU活性明顯升高。國內外已有文獻表明，原發(fā)性肝癌患者的血清AFU活性不僅高于健康人，而且顯著高于肝硬化患者等，是又一診斷PHC的敏感指標［9］。血清AFU升高對血清AFP陰性和低水平的PHC有較高的診斷意義，尤其對肝細胞癌早期診斷更有價值，與AFP檢測有互補性。AFU對原發(fā)性肝癌的診斷陽性率為64%～81.2%，特異性為90%左右［10］。

GP73是存在于高爾基體的一種跨膜糖蛋白，相對分子量為73Kd［11］。在正常的人體肝組織中GP73主要由膽管上皮細胞表達，肝細胞很少甚至不表達。機體正常情況下，GP73是高爾基體順面膜囊上的一種整合膜蛋白，疾病狀態(tài)時候GP73可從游離于胞內體以及細胞表面［12］，BLOCK等［13］研究發(fā)現在肝細胞癌中GP73表達異?；钴S，可能原因是急性肝細胞損傷觸發(fā)和慢性肝臟組織的重構和纖維化。GP73診斷肝癌的敏感性為69%，特異性為75%，對于早期肝癌的診斷，GP73的敏感性（62%）顯著優(yōu)于AFP（25%）［14］。朱國民等（2010）應用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫定量測定方法檢測肝癌、慢性肝炎血清中GP73含量，結果發(fā)現GP73以作為惡性肝病的獨立指標與AFP互補應用于臨床，具有更高的靈敏度，可提高原發(fā)性肝癌的診斷率。

本研究通過檢測各組血清中AFP、AFU和G P73濃度，探討它們作為原發(fā)性肝癌臨床診斷標志物的可靠性，結果支持它們都具有較好的診斷效果；分析三者單獨和聯(lián)合檢測結果，由于每一項單項檢測均存在一定的假陰性，所檢PHC的陽性率分別是AFP陽性率為65.6%，AFU陽性率為74.9%，GP73陽性率為83.2%，而三項聯(lián)合檢測可優(yōu)勢互補，大大提高了PHC檢出的敏感度和準確度，陽性率可達95.2%，明顯高于單項

檢測的陽性率。因此，我們認為血清AFP、AFU和GP73三項聯(lián)合檢測有助于提高原發(fā)性肝癌的診斷率，及早采取有效治療措施改善患者預后。

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張文杰，13919259897。