周國宏++++++余淑苑++++++彭朝瓊++++++方道奎++++++馮錦姝

[摘要]目的 調(diào)查深圳市綜合醫(yī)院肺炎患者嗜肺軍團(tuán)菌感染水平及肺炎患者不同樣品嗜肺軍團(tuán)菌感染檢出率。方法 于2013年4～6月采集深圳市3家大型綜合醫(yī)院81例肺炎住院患者的痰、尿和血清，采用巢氏PCR法檢測痰中嗜肺軍團(tuán)菌，酶聯(lián)免疫吸附法檢測尿中嗜肺軍團(tuán)菌抗原和血清嗜肺軍團(tuán)菌抗體。結(jié)果 痰嗜肺軍團(tuán)菌、尿嗜肺軍團(tuán)菌抗原和血清嗜肺軍團(tuán)菌抗體陽性率分別為5.9%（3/51）、12.1%（8/66）和22.8%（18/79），深圳市綜合醫(yī)院肺炎患者嗜肺軍團(tuán)菌感染率為32.1%（26/81）。結(jié)論 深圳綜合醫(yī)院肺炎患者嗜肺軍團(tuán)菌感染率較高，肺炎患者不同樣品嗜肺軍團(tuán)菌感染檢出率不同。

[關(guān)鍵詞]嗜肺軍團(tuán)菌；肺炎患者；綜合醫(yī)院

[中圖分類號] R517.9 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2016）10（b）-0144-03

[Abstract]Objective To investigate the infection levels of Legionella pneumophila in pneumonia patients and the detection rate of Legionella pneumophila infection from different types of samples in pneumonia patients in Shenzhen comprehensive hospitals.Methods From April to June in 2013，the sputum，urine，and serum from 81 hospitalized pneumonia patients from 3 large scale comprehensive hospitals in Shenzhen were collected.The Legionella pneumophila in sputum was detected by Chao′s PCR，and antigen of Legionella pneumophila in urine and antibody of Legionella pneumophila in serum were detected by enzyme linked immunosorbent assay.Results The positive rates of Legionella pneumophila in sputum，Legionella pneumophila antigen in urine，and Legionella pneumophila antibody in serum were 5.9%（3/51），12.1%（8/66），and 22.8%（18/79） respectively.The infection rate of Legionella pneumophila in pneumonia patients in Shenzhen comprehensive hospitals was 32.1% （26/81）.Conclusion The infection rate in patients suffering from pneumonia in Shenzhen comprehensive hospital is high and different types of samples come out of different detection rates of Legionella pneumophila infection.

[Key words]Legionella pneumophila；Pneumonia patient；Comprehensive hospital

軍團(tuán)菌?。╨egionellosis）是一種急性呼吸道細(xì)菌性感染性疾病，主要因吸入含有軍團(tuán)菌（Legionella）的氣溶膠而感染，軍團(tuán)菌病分為3種亞型：①肺炎型軍團(tuán)菌?。↙D），以肺炎為主要臨床表現(xiàn)的軍團(tuán)菌感染，又稱軍團(tuán)菌肺炎；②肺外綜合征，即感染從肺部播散至肺外其他系統(tǒng)；③龐蒂亞克熱（Pontiac fever），主要表現(xiàn)為急性發(fā)熱，病程呈自限性。軍團(tuán)菌屬系需氧革蘭陰性桿菌，廣泛存在于天然淡水環(huán)境和人工水系中，現(xiàn)已檢出50種以上的軍團(tuán)菌，至少20種是人類肺炎的病原菌，其中最常見病原菌為嗜肺軍團(tuán)菌。軍團(tuán)病常以肺炎為主要表現(xiàn)，伴多系統(tǒng)損害，病死率為5%～40%[1]。

WHO及一些發(fā)達(dá)國家已將軍團(tuán)病納入法定傳染病管理之列[2]。我國自1982年首次發(fā)現(xiàn)軍團(tuán)菌肺炎以來各地時(shí)有暴發(fā)流行及散發(fā)病例的報(bào)道，到目前為止，尚未建立軍團(tuán)菌病常規(guī)檢測系統(tǒng)，準(zhǔn)確的發(fā)病率尚不清楚[3]。為了解綜合醫(yī)院肺炎患者嗜肺軍團(tuán)菌的感染情況及不同樣品嗜肺軍團(tuán)菌感染檢出情況，筆者對深圳市3家大型綜合性醫(yī)院肺炎住院患者的嗜肺軍團(tuán)菌的感染情況進(jìn)行了調(diào)查。

1材料與方法

1.1調(diào)查對象

選擇2013年4～6月深圳市福田區(qū)、寶安區(qū)3家綜合性三級甲等醫(yī)院開展現(xiàn)場調(diào)查，調(diào)查對象為新入院確診肺炎患者。

1.2樣品采集

痰樣本采集：采用自然咯痰法，先用清水反復(fù)漱口后用力自氣管深部咳出第一口痰，置于無菌容器中盡快送檢；尿樣本采集：在調(diào)查對象入院首日，采集患者晨尿15 ml置于無菌離心管內(nèi)送檢；血樣本采集：入院首日采集患者肘靜脈血5 ml送檢，按1000×g離心10 min分離血清。上述所有樣品均存入-70℃低溫冰箱保存，并于1周內(nèi)完成檢測。

1.3實(shí)驗(yàn)室檢測

由中國疾病預(yù)防控制中心環(huán)境與健康相關(guān)產(chǎn)品安全所負(fù)責(zé)，痰嗜肺軍團(tuán)菌采用巢式PCR擴(kuò)增法，尿嗜肺軍團(tuán)菌抗原和血清嗜肺軍團(tuán)菌抗體采用ELISA檢測[4]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行樣品嗜肺軍團(tuán)菌檢出率的χ2分析，3種樣品之間陽性率的比較，采用χ2分割法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)意義。

2結(jié)果

2.1一般情況

調(diào)查肺炎新住院患者81例，其中男性患者49例，女性患者32例。年齡16～91歲，平均（45.63±20.48）歲。共采集51份痰樣，66份尿樣，79份血樣。

2.2不同類型生物樣品嗜肺軍團(tuán)菌檢出率

新入院肺炎患者痰嗜肺軍團(tuán)菌陽性率為5.9%（3/51），尿樣嗜肺軍團(tuán)菌抗原陽性率為12.1%（8/66），血清嗜肺軍團(tuán)菌抗體陽性率為22.8%（18/79）。不同類型生物樣品嗜肺軍團(tuán)菌檢出率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.588，P=0.023），以血清嗜肺軍團(tuán)菌抗體檢出率最高，其次是尿液肺軍團(tuán)菌抗原和痰液嗜肺軍團(tuán)菌。痰檢測陽性率與血清檢測陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.537，P=0.011），痰檢測陽性率與尿檢測陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.315，P=0.252），尿檢測陽性率與血清檢測陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.779，P=0.096）。

2.3肺炎患者不同樣品嗜肺軍團(tuán)菌檢出率的比較

在81例患者中，未發(fā)現(xiàn)同一患者痰、尿、血清嗜肺軍團(tuán)菌檢測均為陽性的病例，僅有1例患者痰和血樣品檢測均為陽性，2例尿和血清檢測均為陽性。有2例患者痰是陽性而血樣是陰性，6例患者尿是陽性血樣是陰性。按照患者的痰、尿和血清任一樣品檢測陽性即判斷該患者為嗜肺軍團(tuán)菌感染的標(biāo)準(zhǔn)，深圳市大型綜合性醫(yī)院肺炎患者嗜肺軍團(tuán)菌感染率為32.1%（26/81）。

3討論

WHO及部分經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)國家已將軍團(tuán)菌病納入法定傳染病管理序列。但是，我國大多數(shù)醫(yī)院未開展肺炎患者軍團(tuán)菌病的病原學(xué)診斷，而軍團(tuán)菌病又不屬于法定傳染病，因此，我國醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)無須上報(bào)軍團(tuán)菌病，全國缺乏相應(yīng)的監(jiān)測報(bào)告系統(tǒng)，人群軍團(tuán)菌感染現(xiàn)況和軍團(tuán)菌病流行情況不明[3]。

細(xì)菌培養(yǎng)法是實(shí)驗(yàn)室診斷和流行病學(xué)調(diào)查中確定軍團(tuán)菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”，特異度為100%，敏感度為50%～80%[5-6]，但費(fèi)時(shí)較長，為7～10 d。臨床標(biāo)本中均含有大量雜菌，要從中分離培養(yǎng)軍團(tuán)菌變得尤為困難，給臨床診斷帶來了一定難度，不適宜臨床應(yīng)用。但尿抗原檢測、血清抗體檢測和痰中嗜肺軍團(tuán)菌PCR檢測等又各有其優(yōu)缺點(diǎn)[7]。深圳地區(qū)醫(yī)院患者三種標(biāo)本檢出率也明顯不同，提示需要進(jìn)一步研究軍團(tuán)菌病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法。

從生物樣品采集是否便利的角度看，采集尿樣本較為方便，因?yàn)椴杉禈颖竞脱獦颖究赡艽嬖谝欢ǖ膭?chuàng)傷或不適。但從敏感度來看，由于尿樣本中嗜肺軍團(tuán)菌抗原僅在發(fā)病早期出現(xiàn)，而尿液中可溶性抗原濃度不高，且易受抗生素使用的影響出現(xiàn)假陰性結(jié)果的機(jī)會較大[8]，敏感度低于血樣。從本次檢測結(jié)果可以看出，尿樣嗜肺軍團(tuán)菌抗原陽性率（12.1%）低于血清嗜肺軍團(tuán)菌抗體陽性率（22.8%），但此次調(diào)查結(jié)果未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可能與病例數(shù)量較少有關(guān)。與其他地區(qū)調(diào)查相比，尿樣中嗜肺軍團(tuán)菌抗原陽性率高于史曉紅等[9]在太原地區(qū)的調(diào)查結(jié)果[4.7%（10/213）]。

本次調(diào)查結(jié)果顯示，深圳綜合醫(yī)院肺炎患者血清IgG-IgA-IgM總抗體陽性率為22.8%，明顯高于江麗等[10]在福州地區(qū)調(diào)查呼吸道感染患者血清嗜肺軍團(tuán)菌IgM抗體陽性率12.51%（508/4060）、張曉峰等[11]在江蘇省無錫地區(qū)肺部感染患者血清嗜肺軍團(tuán)菌IgG抗體陽性率2.42%（124/5131）和路鳳等[12]調(diào)查北京地區(qū)493例呼吸系統(tǒng)疾病就診患者嗜肺軍團(tuán)菌血清IgG抗體陽性率為4.5%，可能與不同地區(qū)嗜肺軍團(tuán)菌感染水平和測量方法不同有關(guān)。

痰標(biāo)本檢出率差異也較大，張潤梅等[13]調(diào)查山西太原地區(qū)醫(yī)院肺部感染患者痰液軍團(tuán)菌陽性率為3.65%（10/274）；何暉等[14]對廣州地區(qū)痰軍團(tuán)菌陽性率調(diào)查結(jié)果為15.0%（22/150），深圳醫(yī)院痰軍團(tuán)菌陽性率為5.9%（3/51），介于上述兩項(xiàng)研究結(jié)果之間。

近年研究結(jié)果顯示，呼吸道或肺部疾病人群的軍團(tuán)菌感染率為4.5%～38.9%，健康人群軍團(tuán)菌感染率為1.25%～57.42%[4]。目前軍團(tuán)菌感染現(xiàn)況調(diào)查研究中，由于研究對象（不同人群、病情、年齡、性別、采樣時(shí)間等）、檢測生物樣品（血液、尿液、痰液等）、檢測方法各不同，不同研究結(jié)果之間數(shù)據(jù)的可比性較差，無法判斷我國人群軍團(tuán)菌感染水平，也難以系統(tǒng)分析我國軍團(tuán)菌病的流行病學(xué)特征。

本次調(diào)查結(jié)果顯示，尚未發(fā)現(xiàn)一例患者血液、尿液、痰液3種生物樣品均為陽性的情況，僅有3例患者同時(shí)出現(xiàn)兩種類型生物樣品均為陽性的情況，說明同時(shí)檢測3類生物樣品能夠有效降低檢測結(jié)果的假陰性率。深圳地區(qū)綜合醫(yī)院肺炎患者嗜肺軍團(tuán)菌感染率高達(dá)32.1%，這可能與該地區(qū)環(huán)境中嗜肺軍團(tuán)菌污染水平及三種生物并行檢測有關(guān)。提示單一檢測方法容易出現(xiàn)漏診，實(shí)際肺炎患者嗜肺軍團(tuán)菌感染率較高。

郭景玉[15]調(diào)查全國31個城市自然水環(huán)境中軍團(tuán)菌分布情況，南方城市水環(huán)境嗜肺軍團(tuán)菌檢出率較高，其中廣州檢出率高達(dá)70.8%。而深圳氣候環(huán)境與廣州相似，水環(huán)境嗜肺軍團(tuán)菌檢出率應(yīng)該較高。同時(shí)，林愛紅等[16]調(diào)查發(fā)現(xiàn)，深圳公共場所冷卻水嗜肺軍團(tuán)菌陽性率高達(dá)50.9%，淋浴水陽性率為37.0%，自來水陽性率為35.3%。由于深圳地區(qū)環(huán)境嗜肺軍團(tuán)菌普遍存在，增加了人群接觸機(jī)會，這可能是深圳地區(qū)住院肺炎患者嗜肺軍團(tuán)菌陽性率較高的部分原因。針對以上情況，應(yīng)加強(qiáng)深圳市公共場所等室內(nèi)環(huán)境空調(diào)系統(tǒng)監(jiān)測和衛(wèi)生管理，加強(qiáng)軍團(tuán)菌污染及疾病監(jiān)測工作，探討軍團(tuán)菌病有關(guān)的控制措施。

[參考文獻(xiàn)]

[1]World Health Organization.Legionella and the prevention of legione-llosis[R].Geneva： Switzerland，2007：1-10.

[2]胡大林，廖建坤，楊光，等.軍團(tuán)菌病[J].國外醫(yī)學(xué)（衛(wèi)生學(xué)分冊），2003，30（4）：391-394.

[3]劉凡，葛覃兮，張寶瑩，等.國內(nèi)外軍團(tuán)菌病檢測系統(tǒng)及流行現(xiàn)況研究進(jìn)展[J].環(huán)境與健康雜志，2013，30（5）：459-461.

[4]劉凡，張寶瑩，郭亞菲，等.綜合醫(yī)院肺炎患者嗜肺軍團(tuán)菌感染現(xiàn)況調(diào)查[J].環(huán)境與健康雜志，2014，31（8）：659-661.

[5]丁國允，李小波.軍團(tuán)菌及其實(shí)驗(yàn)室檢測方法研究進(jìn)展[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2013，23（5）：1335-1338.

[6]Matthias M，Jurgen HH.Laboratory methods for the diagnosis of Legionnella infections[J].J Microbio Methods，1998， 33：59-79.

[7]呂恒，張錦海，陳鳳娟，等.軍團(tuán)菌檢測方法概述[J].東南國防醫(yī)藥，2014，16（2）：177-179.

[8]Bruin JP，Peeters MF，Ijzerman EP，et al.Evaluation of Legionella V-Test for the detection of Legionella pneumophila antigen in urine samples[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis，2010，29（7）：899-900.

[9]史曉紅，冀濤，王芳芳，等.肺部感染患者軍團(tuán)菌屬感染的調(diào)查[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2011，21（4）：679-681.

[10]江麗，歐啟水，陳靜.福州地區(qū)4060例呼吸道感染患者病原體檢測結(jié)果分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2014，11（4）：483-484.

[11]張曉峰，劉潔，胡志剛，等.江蘇省無錫地區(qū)嗜肺軍團(tuán)菌感染狀況調(diào)查[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2014，18（11）：174-175.

[12]路鳳，程義斌，王仲，等.呼吸系統(tǒng)疾病就診患者嗜肺軍團(tuán)菌感染的流行病學(xué)調(diào)查[J].環(huán)境與健康雜志，2010，27（3）：203-205.

[13]張潤梅，武素梅，周向紅，等.臨床痰液標(biāo)本軍團(tuán)菌檢測方法研究[J].中華臨床醫(yī)師雜志（電子版），2010，4（12）：2571-2573.

[14]何暉，趙利偉，朱慶義.基于16SrRNA的聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)用于肺部感染患者痰標(biāo)本中軍團(tuán)菌的檢測[J].疾病監(jiān)測，2014，29（6）：445-448.

[15]郭景玉.中國城市自然水環(huán)境中軍團(tuán)菌分布情況調(diào)查及嗜肺軍團(tuán)菌的遺傳多態(tài)性研究[D].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，2015.

[16]林愛紅，梁焯南，張然.深圳市公共場所中軍團(tuán)菌污染狀況[J].職業(yè)與健康，2014，30（14）：1958-1960.