王 紅，吳建麗，王曉磊，杜冬梅，王天琪，王 薇

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

針灸治療對氯苯丙氨酸(PCPA)失眠模型大鼠基礎(chǔ)研究進展*

王 紅，吳建麗，王曉磊，杜冬梅，王天琪，王 薇△

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

針灸干預(yù)治療對氯苯丙氨酸(PCPA)誘導(dǎo)失眠模型大鼠的實驗文獻進行搜集、整理，發(fā)現(xiàn)與針灸改善失眠作用相關(guān)的基礎(chǔ)研究主要集中在動物行為學(xué)、免疫功能、神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)等方面，研究表明針灸是通過對這些異常的生物學(xué)行為或微觀分子產(chǎn)生良性調(diào)節(jié)作用，以神經(jīng)-體液調(diào)節(jié)為基礎(chǔ)的多靶點、多途徑發(fā)揮改善睡眠作用。本研究對這些研究文獻進行綜述，一方面表明了針灸促眠作用的有效性，為臨床治療提供依據(jù)，另一方面分析了當前探索針灸改善睡眠機制研究中存在的問題和不足，并對今后的研究提出了建議和期望。

針灸；對氯苯丙氨酸；基礎(chǔ)研究；失眠;綜述

失眠(Insomnia)是指入睡困難、睡眠時間過短、睡眠深度過淺或無法維持睡眠狀態(tài)，導(dǎo)致較長時間內(nèi)睡眠的質(zhì)和量都不能令人滿意，身體的精力和體力不能及時恢復(fù)而影響日常活動的一種主觀體驗[1]，中醫(yī)學(xué)稱為“不寐”“不得眠”等。WHO最新資料表明[2]，全球每年有8.6億人遭受失眠的困擾，在我國就有0.75億人。失眠可以增加高血壓、冠心病、腦卒中等血管病風(fēng)險[3]，還可以誘發(fā)抑郁等心理障礙性疾病[4]。針灸治療失眠效果顯著，經(jīng)濟方便，還可以避免西藥的依賴性、反跳性等副作用，在臨床上應(yīng)用廣泛。同時，隨著針灸學(xué)科的發(fā)展和科研的需要，利用動物失眠模型來闡釋針灸改善睡眠的作用機制，是證明其療效科學(xué)性的必然要求。文獻資料顯示[5]，采用對氯苯丙氨酸(PCPA)制作的失眠模型具有可重復(fù)性高、成模時間短、方法簡便等特點，是失眠作用機制研究中最常采用的模型。通過大量的文獻總結(jié)，筆者發(fā)現(xiàn)針灸治療失眠的作用機制與動物行為學(xué)、免疫功能、神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)均有密切關(guān)系，現(xiàn)將近10年的研究進展綜述如下。

1 針灸對PCPA失眠模型動物行為學(xué)的干預(yù)

臨床上發(fā)現(xiàn)長期失眠可引起腦部功能區(qū)域的過度緊張，導(dǎo)致人體日常精神活動異常，繼而伴發(fā)健忘、乏力、頭暈、甚至過度焦慮抑郁等認知、精神障礙傾向[6-7]。因此，通過觀察大鼠空間記憶學(xué)習(xí)能力、再學(xué)習(xí)能力、甩尾反應(yīng)、催眠作用等行為學(xué)活動可以探索失眠大鼠的認知和精神功能損害程度。羅本華等[8]觀察針刺壯醫(yī)臍內(nèi)環(huán)穴對PCPA失眠大鼠神經(jīng)行為學(xué)影響，在臍周旁2.5 mm處一圈取心、肝、脾、肺、腎6個穴點(肺為兩個點)，由內(nèi)向外刺斜刺2～4 mm，進針后留針30 s，1次/日。結(jié)果表明失眠大鼠出現(xiàn)空間學(xué)習(xí)、記憶減退等認知能力損害，經(jīng)臍內(nèi)環(huán)穴治療后，利用Morris水迷宮系統(tǒng)可觀測大鼠的生物神經(jīng)行為學(xué)改變，結(jié)果證實臍內(nèi)環(huán)穴針刺能夠改善失眠大鼠的學(xué)習(xí)、再學(xué)習(xí)及記憶保持能力，全面改善失眠癥伴隨的認知功能障礙。肖愛嬌等[9]以生物行為學(xué)及甩尾反應(yīng)潛伏時間作為觀測指標探究熱敏灸法調(diào)節(jié)睡眠的機制。研究發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)懸灸和熱敏灸均可恢復(fù)大鼠睡眠-覺醒周期、體溫、縮短大鼠逃避潛伏期、減少甩尾反應(yīng)潛伏時間，進而緩解失眠癥狀，改善記憶、認知功能，且熱敏灸“百會穴”的療效要優(yōu)于傳統(tǒng)艾灸法。高玉峰等[10]利用艾灸頂會、赫依、黑白際三穴觀察對睡眠紊亂大鼠睡眠時間的影響，每次行3個艾灸貼，每次灸5 min，共灸7天，末次治療后監(jiān)測大鼠的睡眠時間。結(jié)果發(fā)現(xiàn)赫依三穴可以延長大鼠的睡眠時間，證明施灸赫依三穴有明顯的針灸催眠作用。

2 針灸對PCPA失眠模型免疫功能的干預(yù)

近年來發(fā)現(xiàn)，許多具有活性的細胞因子不僅在炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答中發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，構(gòu)成體液調(diào)節(jié)的重要組成部分，同時與睡眠-覺醒周期也密切相關(guān)[11]。如外源性細胞因子可以誘發(fā)動物慢波或快波睡眠，內(nèi)源性細胞因子含量則隨著睡眠周期呈節(jié)律改變。金時勲[12]在營衛(wèi)理論的指導(dǎo)下分別針刺失眠大鼠申脈、照海穴組及神門、四神聰穴組，經(jīng)ELISA法測定治療前后IL-1、TNF-α的濃度，結(jié)果提示模型組大鼠腦內(nèi)二者濃度明顯下降，申脈、照海穴組干預(yù)治療后，二者濃度顯著增加，接近正常水平，說明針刺改善睡眠周期的機理與機體免疫狀態(tài)有關(guān)。宋媛[13]對比不同穴位處方艾灸的催眠作用，發(fā)現(xiàn)3組穴位均可以延長大鼠的睡眠誘導(dǎo)時間。模型組下丘腦組織內(nèi)IL-1β、IL-6、TNF-α水平無顯著變化，經(jīng)麥粒灸治療后，3種細胞因子水平顯著增加，提示艾灸療法可以通過增強免疫功能促進睡眠，且神門、三陰交穴組處方改善失眠的效果最佳。顧軒庭[14]對“印堂”“百會”穴施行針刺，斜向刺入0.5～1.1 cm，針刺后每隔5 min行提插捻轉(zhuǎn)手法1次，每次留針15 min。治療6天后進行指標檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組IL-1β、IL-6、TNF-α濃度均有降低，其中IL-6不明顯，經(jīng)針刺治療后濃度升高，均超過正常水平，說明針灸可通過調(diào)節(jié)機體免疫狀態(tài)達到鎮(zhèn)靜、促眠的作用。

3 針灸對PCPA失眠模型神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)的干預(yù)

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明，睡眠的發(fā)生是腦內(nèi)中樞結(jié)構(gòu)自發(fā)的一種主動調(diào)節(jié)過程，而中樞遞質(zhì)則是完成這一過程的具體作用物質(zhì)。中樞遞質(zhì)按其成分不同，有單胺類、肽類和氨基酸類，按其作用突觸神經(jīng)元后的作用形式，又可分為抑制性和興奮性兩類。研究發(fā)現(xiàn)與失眠關(guān)系最密切的是單胺類和氨基酸類遞質(zhì)，針灸可以通過調(diào)節(jié)腦內(nèi)這類遞質(zhì)的釋放改善睡眠狀態(tài)。

3.1 單胺類神經(jīng)遞質(zhì)

5-羥色胺(5-HT)、去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)是睡眠研究中最常用的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，主要存在于下丘腦、海馬、腦干中，對睡眠的發(fā)生和覺醒的維持有重要作用。張殿全等[15]探討針刺四神聰穴調(diào)節(jié)睡眠紊亂的作用機理，造模成功后，給予7天針刺治療，采用熒光分光度法測定大鼠下丘腦內(nèi)5-HT及其代謝產(chǎn)物5-HIAA濃度，結(jié)果顯示模型組濃度顯著降低，電針組和手針組含量增加明顯，電針組作用最好，說明針刺四神聰穴可以提高睡眠質(zhì)量，可能的機制為增加5-HT和5-HTAA含量。木日根吉雅等[16]采用蒙醫(yī)溫針法刺激大鼠頂會穴、赫依穴和心穴觀察下丘腦、海馬、前額皮質(zhì)組織中NE含量的變化，應(yīng)用高效液相色譜加電化學(xué)法檢測NE水平，結(jié)果顯示蒙醫(yī)溫針可有效地減少海馬組織中NE水平，降低大腦興奮性恢復(fù)睡眠周期。宋媛等[17]觀察艾灸3組不同穴位對失眠大鼠腦內(nèi)NE、DA、5-HT、5-HTAA含量作用的差異性，PCPA法造模成功后，5-HT、5-HTAA明顯下降，經(jīng)過施灸后，下丘腦5-HT、5-HTAA的含量升高，NE、DA的含量升高，表明麥粒灸可以通過調(diào)節(jié)下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)含量調(diào)節(jié)睡眠，且灸三陰交、神門穴效果更好。

3.2 氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)

當患者長期處于失眠狀態(tài)時，腦內(nèi)中樞系統(tǒng)內(nèi)抑制性遞質(zhì)會減少，而興奮性遞質(zhì)會增多，大腦的興奮性增加則進一步加重睡眠障礙[18]，針灸刺激后可以恢復(fù)這兩類氨基酸遞質(zhì)的動態(tài)平衡，從而緩解失眠癥狀，調(diào)節(jié)睡眠紊亂。劉振華等[19]觀察四神聰、百會穴對PCPA模型大鼠下丘腦組織Glu、GABA含量的調(diào)節(jié)，電針組與手針組取相同腧穴，給予電壓9V，疏密波刺激，30 min/次，結(jié)果經(jīng)針刺干預(yù)后，下丘腦GABA含量明顯升高，Glu含量明顯下降，提示針刺能夠降低神經(jīng)元的興奮性而治療失眠，同時電針通過持續(xù)電流刺激能夠更好達到治療效果。蘭妮[20]給予PCPA大鼠電針刺激，目的是觀察針刺鎮(zhèn)靜催眠效應(yīng)隨時間變化的相關(guān)性。研究發(fā)現(xiàn)，單次電針可以調(diào)整氨基酸遞質(zhì)失衡狀態(tài)，即Glu/GABA比值恢復(fù)平衡，但不能完全糾正遞質(zhì)絕對性失衡，單次電針的綜合效應(yīng)在6～12 h，故建議為提高療效，可每日進行兩次治療。吳北峰等[21]通過針刺風(fēng)池、供血穴探討電項針對失眠的作用機制，通過免疫組化法證實，電項針干預(yù)后腦干組織內(nèi)GABA陽性細胞表達數(shù)量明顯增多，電項針可以通過提高GABA抑制性神經(jīng)元興奮性而改善失眠。

4 針灸對PCPA失眠模型氧化應(yīng)激反應(yīng)的干預(yù)

研究表明[22]長期睡眠剝奪病理表現(xiàn)的突出特征為能量消耗過多，在此過程中常產(chǎn)生大量活性氧，大量的氧自由基堆積，當這些含氧物超過機體的抗氧化能力就會引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)。丙二醛(MDA)是機體脂質(zhì)發(fā)生氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，超氧化物歧化酶(SOD)是一種清除氧自由基的特異酶，二者的含量可以反映氧化應(yīng)激程度。針灸可以通過清除自由基，恢復(fù)機體抗氧化系統(tǒng)的平衡狀態(tài)，減輕對神經(jīng)元的損害，進而改善失眠狀態(tài)。肖愛嬌等[23]探討熱敏灸療法治療失眠的作用機制，選取百會穴為施灸部位，每次40 min，治療5 d后檢測大鼠血清和腦干內(nèi)SOD和MDA含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)熱敏灸可以通過調(diào)節(jié)SOD、MDA的含量恢復(fù)機體的氧化平衡狀態(tài)，達到改善睡眠的作用。吳北峰[24]發(fā)現(xiàn)采用電項針療法可以降低腦干內(nèi)SOD和NO的含量，能夠降低氧化應(yīng)激所導(dǎo)致的能量過度消耗水平，減少氧化應(yīng)激對腦干的損害，恢復(fù)正常睡眠-覺醒周期。

5 結(jié)語

失眠的發(fā)病機制尚不明確，一般認為其晝夜節(jié)律紊亂與機體神經(jīng)-免疫、中樞神經(jīng)遞質(zhì)、抗氧化等系統(tǒng)調(diào)控密切相關(guān)，包括內(nèi)分泌激素、細胞因子、肽類物質(zhì)、單胺類、氨基酸類遞質(zhì)等變化都會影響機體的晝夜節(jié)律?，F(xiàn)代西醫(yī)方法主要是采用鎮(zhèn)靜睡眠藥物進行對癥治療，但副作用大、停藥后易反彈或加重限制了其應(yīng)用。針灸治療失眠病安全可靠、療效顯著，可有效避免西藥的依賴性和耐藥性等不良反應(yīng)，有效的緩解失眠癥狀及提高患者生活質(zhì)量，得到了國內(nèi)外人民的極大青睞[25]，但是缺乏評價其發(fā)揮療效作用的機制研究。

隨著科技進步，許多學(xué)者致力于探索針灸療效的微觀機制，對治療失眠的有效性提供了一些依據(jù)，但在基礎(chǔ)研究中尚存在一些不足：①現(xiàn)有的研究多集中在個別的細胞因子、神經(jīng)遞質(zhì)，對IL-1、TNF-α、5-HT、DA等相關(guān)物質(zhì)存在重復(fù)研究，而關(guān)于針刺與睡眠發(fā)生密切相關(guān)的睡眠誘導(dǎo)肽、睡眠促進因子、褪黑素等研究多未涉及;②研究雖注重了針灸對各系統(tǒng)中特異性物質(zhì)的影響研究，卻缺乏系統(tǒng)間相互作用的影響，如IL-1與5-HT、SOD與5-HT間的相關(guān)性研究;③刺法和灸法的量效和時效對促眠作用的影響仍缺乏深入研究，如電針的頻率、電流強度、艾灸的干預(yù)時長等均缺乏定量標準;④干預(yù)選穴、配穴方面，缺乏對經(jīng)穴效應(yīng)特異性的研究以及配穴在療效中是否增強聯(lián)合效應(yīng)的作用，少有報道刺激腧穴與非腧穴對各系統(tǒng)特異性物質(zhì)影響的作用比較。

因此，筆者建議今后研究從以下方面考慮：①與睡眠發(fā)生密切相關(guān)的肽類、內(nèi)分泌激素類物質(zhì)是探索促眠作用另一微觀證據(jù)，能更深入的從多角度、多靶點揭示針灸促眠作用的效應(yīng)機理;②拓寬科研思路，優(yōu)化實驗方案，從形態(tài)學(xué)、蛋白組學(xué)、基因組學(xué)角度加強神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫系統(tǒng)之間特異物質(zhì)的相關(guān)性研究;③通過大量文獻研究，篩選高頻使用、效果明確的經(jīng)穴進行特異性研究，觀察配穴及非穴位對促眠作用的影響;④注重針灸量學(xué)因素的作用，從針刺時間、手法、頻率、進針的角度、深度、電針強度、頻率等方面研究促眠效應(yīng)機制。通過這些層面研究，可以更深入闡明針灸改善睡眠的作用機制，為臨床實踐提供指導(dǎo)依據(jù)。

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Research Progress of Acupuncture and Moxibustion Treatment for Insomnia Induced by PCPA

WANG Hong，WU Jian-li，WANG Xiao-lei，DU Dong-mei，WANG Tian-qi，WANG Wei△

(HeilongjiangUniversityofChineseMedicine，Harbin150040,China)

This article collects and arranges the experimental literature documents about acupuncture treatment for insomnia rats induced by PCPA．The results show that the fundamental research of acupuncture for treating insomnia mainly focuses on the basis of animal behavior，immune function，neurotransmitter systems，oxidative stress， etc．These studies show that acupuncture has the effect on improving sleep based on nervous-humoral regulation of multiple targets and pathways by producing benign adjustment to abnormal biological behavior or microscopic molecular．This literature review not only shows the effect of acupuncture on promoting sleep and provides the basis for clinical treatment,but it also analyzes the currently existing problems and shortcomings in the research of the mechanism of acupuncture and puts forward some suggestions and expectations for the future research．

Acupuncture；PCPA；Fundamental research；Insomnia；Review

哈爾濱市科技局科技創(chuàng)新人才研究專項資金項目,編號：2015RAQXJ093。

王紅(1958-)，女，副研究館員，主要從事圖書情報的文獻檢索及資料整理工作。

△通訊作者：王薇(1956-),女，研究員,主要從事實驗針灸工作。

R246.1

A

1005-0779(2017)02-0076-03

2016-07-04