王 倩，朱燕華，李正鵬，汪 虹，宋曉霞，李 晶，黃建春，陳 輝

（1上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，農(nóng)業(yè)部南方食用菌資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國(guó)家食用菌工程技術(shù)研究中心，國(guó)家食用菌加工技術(shù)研發(fā)分中心，上海市農(nóng)業(yè)遺傳育種重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，上海 201403；2國(guó)家菌草工程技術(shù)研究中心，福州 350002）

響應(yīng)面法優(yōu)化雙孢蘑菇泥炭覆土技術(shù)

王 倩1，朱燕華1，李正鵬1，汪 虹1，宋曉霞1，李 晶2，黃建春1，陳 輝1

（1上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，農(nóng)業(yè)部南方食用菌資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國(guó)家食用菌工程技術(shù)研究中心，國(guó)家食用菌加工技術(shù)研發(fā)分中心，上海市農(nóng)業(yè)遺傳育種重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，上海 201403；2國(guó)家菌草工程技術(shù)研究中心，福州 350002）

以雙孢蘑菇產(chǎn)量為響應(yīng)值，采用響應(yīng)面D-最優(yōu)設(shè)計(jì)對(duì)雙孢蘑菇A15泥炭覆土制作時(shí)的含水量（A）、攪拌時(shí)間（B）以及泥炭覆土厚度（C）進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明：在3個(gè)因素中，B對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量的影響最為顯著，其次為A和C。AB之間的交互作用強(qiáng)于AC之間的交互作用以及BC之間的交互作用。雙孢蘑菇泥炭覆土制作時(shí)最佳條件為含水量62.4%、攪拌時(shí)間11 m in、覆土厚度5 cm。在該條件下，雙孢蘑菇兩潮菇產(chǎn)量為1 584 g/筐。

雙孢蘑菇；泥炭覆土；響應(yīng)面分析法

雙孢蘑菇（Agaricus bisporus）又稱白蘑菇、蘑菇、洋蘑菇，是世界性栽培和消費(fèi)的菇類。雙孢蘑菇與其他多數(shù)食用菌不同，其子實(shí)體的形成不但需要適宜的溫度、濕度、通風(fēng)等環(huán)境條件，還需要土壤中某些化學(xué)和生物因子的刺激，因此，出菇前需要覆土。覆土具有特殊的物理、化學(xué)及微生物特性，可以刺激雙孢蘑菇原基的形成，原基進(jìn)一步分化形成子實(shí)體［1-3］。

長(zhǎng)期以來(lái)，發(fā)達(dá)國(guó)家采用泥炭和石灰或者石膏的混合物作為覆土［1］。泥炭覆土的制作過(guò)程是采用特殊結(jié)構(gòu)的攪拌機(jī)械，將泥炭和一定比例的碳酸鈣、石灰等經(jīng)過(guò)混合攪拌，使泥炭成為具有適宜含水量、孔隙度、pH等特性的泥團(tuán)，成為雙孢蘑菇子實(shí)體生長(zhǎng)發(fā)育的特殊載體。

我國(guó)雙孢蘑菇工廠化生產(chǎn)使用的泥炭是東北泥炭，在物理特性上與國(guó)外泥炭有很大不同，并且由于國(guó)內(nèi)缺少利用泥炭進(jìn)行商品開發(fā)的企業(yè)，對(duì)泥炭覆土技術(shù)的研究至今仍是空白。本課題組之前的研究表明：泥炭覆土?xí)r的含水量對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量和質(zhì)量有重要影響［4］，泥炭的攪拌時(shí)間影響覆土的物理結(jié)構(gòu)，而覆土的物理結(jié)構(gòu)一直以來(lái)都被認(rèn)為是影響雙孢蘑菇生長(zhǎng)發(fā)育的重要因素［5-6］。另外，Kalberer［7-8］研究表明，覆土的厚度影響雙孢蘑菇子實(shí)體對(duì)水分的吸收以及雙孢蘑菇的產(chǎn)量和子實(shí)體的干物質(zhì)量。本研究以東北泥炭為試驗(yàn)材料，采用響應(yīng)面D-最優(yōu)設(shè)計(jì)法，以雙孢蘑菇產(chǎn)量為響應(yīng)值，優(yōu)化泥炭覆土制作時(shí)的含水量、攪拌時(shí)間以及覆土厚度，研究三者之間的交互作用以及對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量的影響，旨在為優(yōu)化泥炭覆土的生產(chǎn)加工及應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌種

雙孢蘑菇（A.bisporus）A15麥粒種購(gòu)于美國(guó)Sylvan公司。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

以泥炭覆土制作時(shí)的含水量（A）、攪拌時(shí)間（B）、泥炭覆土厚度（C）三因素為自變量，覆土后雙孢蘑菇產(chǎn)量為響應(yīng)值進(jìn)行三因素三水平響應(yīng)面試驗(yàn)。通過(guò)Desigh Expert 8.0.5軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，得到泥炭覆土技術(shù)最優(yōu)工藝參數(shù)。

1.3 覆土準(zhǔn)備

泥炭購(gòu)于吉林省，使用前取適量泥炭放置在烘箱中（105℃）烘干至恒重，測(cè)定其初始含水量并用pH計(jì)測(cè)定其初始pH值。由于泥炭偏酸性，泥炭覆土制作時(shí)需要添加石灰將pH調(diào)至7.5左右。將泥炭與石灰混合攪拌1 min，結(jié)合泥炭初始含水量，根據(jù)不同的含水量要求加入定量的水繼續(xù)攪拌不同時(shí)間，得到不同含水量及攪拌時(shí)間的泥炭覆土。

1.4 出菇試驗(yàn)

出菇試驗(yàn)在上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所國(guó)家食用菌工程技術(shù)中心草腐菌生產(chǎn)基地進(jìn)行。試驗(yàn)塑料栽培筐的內(nèi)徑長(zhǎng)寬高為42.5 cm×30.5 cm×22 cm。將以麥草和雞糞為主原料的培養(yǎng)料進(jìn)行常規(guī)的一次發(fā)酵和二次發(fā)酵，二次發(fā)酵結(jié)束后，按照7‰的播種量將雙孢蘑菇麥粒種與二次料混合均勻，填料至栽培筐，裝料量為10 kg/筐，發(fā)菌16—17 d，待菌絲長(zhǎng)滿二次發(fā)酵料后，根據(jù)不同處理的覆土厚度要求進(jìn)行覆土。每處理5個(gè)重復(fù)，在床架上隨機(jī)排列，覆土后調(diào)節(jié)空氣溫度和循環(huán)風(fēng)風(fēng)量，控制料溫在25—27℃，相對(duì)濕度在95%—98%。覆土后4—7 d噴水，使覆土含水量接近飽和含水量。

待菌絲長(zhǎng)至覆土表面，將菇房空氣溫度逐漸降至16℃，增加通風(fēng)，使CO2質(zhì)量濃度降至1 200 mg/L以下，保持菇房相對(duì)濕度在90%左右，誘導(dǎo)子實(shí)體形成。監(jiān)測(cè)并維持上述條件直至采收結(jié)束。每潮菇采收后及時(shí)清理床架上的菇根，適當(dāng)補(bǔ)水，采收2潮，共14 d，記錄各處理每潮菇產(chǎn)量并按照相關(guān)方法計(jì)算商品菇率［4］。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)

2.1.1 覆土?xí)r泥炭含水量對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量的影響

覆土?xí)r泥炭含水量為70%時(shí)，雙孢蘑菇每潮菇產(chǎn)量及兩潮菇總產(chǎn)量均最低；含水量為55%、60%和65%時(shí)，兩潮菇總產(chǎn)量無(wú)顯著差異，約為1 400 g/筐，比覆土?xí)r泥炭含水量為70%的處理高58%。商品菇率隨覆土?xí)r泥炭含水量的增加而增加，分別為61.8%、83.9%、87.3%和89.6%。結(jié)合商品菇率進(jìn)行分析，泥炭覆土?xí)r的最優(yōu)含水量為60%—65%，可以獲得最高雙孢蘑菇總產(chǎn)量及商品菇產(chǎn)量（圖1）。

2.1.2 泥炭覆土攪拌時(shí)間對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量的影響

由圖2可見(jiàn)，攪拌時(shí)間較短的處理（5—10 min），兩潮菇總產(chǎn)量最高，約1 400 g/筐，且兩潮菇產(chǎn)量比較均勻；攪拌時(shí)間超過(guò)20 min的覆土，兩潮菇產(chǎn)量明顯降低，約1 000—1 200 g/筐，且各潮菇產(chǎn)量分布不均勻，不利于雙孢蘑菇工廠化生產(chǎn)。商品菇率隨泥炭覆土攪拌時(shí)間的延長(zhǎng)而增加?？紤]到雙孢蘑菇工廠化的實(shí)際需求，選擇產(chǎn)量最高且兩潮菇產(chǎn)量更為均勻的處理（10 min）為泥炭覆土最優(yōu)攪拌時(shí)間。

圖1 泥炭覆土?xí)r含水量對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量的影響Fig.1 Effects of water content of casing soil on A.bisporus yields

圖2 泥炭覆土攪拌時(shí)間對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量的影響Fig.2 Effects of stirring tim e of casing soil on A.bisporus yields

2.1.3 泥炭覆土厚度對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量的影響

由圖3可以看出，覆土厚度為5 cm時(shí)，雙孢蘑菇兩潮菇產(chǎn)量最高，比覆土厚度為3 cm、4 cm、6 cm的處理分別高23.3%、10.8%、24.4%。

2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)

2.2.1 參數(shù)優(yōu)化

以泥炭覆土?xí)r含水量63%、攪拌時(shí)間10 min和覆土厚度5 cm為中心點(diǎn)，用響應(yīng)面D-最優(yōu)設(shè)計(jì)法進(jìn)行三因素三水平優(yōu)化，試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表1。

以雙孢蘑菇產(chǎn)量Y為響應(yīng)值，利用Design Expert

8.0.5軟件進(jìn)行回歸擬合，得到預(yù)測(cè)值Y對(duì)編碼自變量的回歸方程：Y＝1 502.4－6.23A＋38.14B－ 0912C－68.2AB－4.43AC＋0.689BC－54.09A2－1249B2－121.5C2。

圖3 泥炭覆土厚度對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量的影響Fig.3 Effects of casing soil thickness on A.bisporus yields

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 1 Design and results of response surface test

對(duì)所得結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果如表2所示。回歸模型在P＜0.01水平上顯著，回歸模型中一次項(xiàng)B、二次項(xiàng)AB、B2、C2對(duì)Y值的影響顯著。決定系數(shù)R2為0.9563，說(shuō)明響應(yīng)值的變化有95.63%來(lái)源于所選變量，模型擬合度好。變異系數(shù)為3.3%，說(shuō)明試驗(yàn)操作可行。綜上分析說(shuō)明可以利用該模型對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和預(yù)測(cè)。

以雙孢蘑菇產(chǎn)量為響應(yīng)值，利用軟件及回歸模型進(jìn)行優(yōu)化預(yù)測(cè)，得到泥炭覆土制作最優(yōu)工藝參數(shù)為泥炭覆土含水量62.4%、攪拌時(shí)間11 min、覆土厚度5 cm。在最優(yōu)工藝條件下，雙孢蘑菇兩潮菇預(yù)測(cè)產(chǎn)量最高值為1 507 g/筐。

表2 回歸方程方差分析Table2 Variance analysis of regression equation

2.2.2 響應(yīng)曲面分析

根據(jù)回歸方程作出的等高線圖及響應(yīng)面分析見(jiàn)圖4—6?？梢钥闯觯珹（泥炭覆土含水量）、B（攪拌時(shí)間）之間的交互作用強(qiáng)于A（泥炭覆土含水量）、C（覆土厚度）之間的交互作用；A、C之間的交互作用強(qiáng)于B（攪拌時(shí)間）、C（覆土厚度）之間的交互作用。B（攪拌時(shí)間）對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量的影響最為顯著，表現(xiàn)為曲面最陡、等高線最密集；其次是A（泥炭覆土含水量）和C（覆土厚度）。從響應(yīng)面和等高線圖可以看出，在所選范圍內(nèi)存在極值，即響應(yīng)面的最高點(diǎn)。

當(dāng)覆土厚度為5 cm時(shí)，攪拌時(shí)間和覆土含水量交互作用明顯（圖4）。含水量一定時(shí)，雙孢蘑菇產(chǎn)量隨攪拌時(shí)間呈先增加后下降的趨勢(shì)；攪拌時(shí)間一定時(shí)，含水量對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量的影響不顯著。由此可見(jiàn)，泥炭覆土攪拌時(shí)間是影響雙孢蘑菇產(chǎn)量的重要因素。

圖4 泥炭覆土含水量及攪拌時(shí)間對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量影響的響應(yīng)面和等高線圖Fig.4 Contour p lots and response surface of the effects of water content and stirring time of casing soil on A.bisporus yields

攪拌時(shí)間為10 min，覆土厚度為4.5—5.5 cm對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量影響不顯著，覆土厚度大于5.5 cm或者小于4.5 cm，雙孢蘑菇產(chǎn)量下降明顯；覆土厚度一定時(shí)，含水量接近63%，雙孢蘑菇產(chǎn)量最高（圖5）。

圖5 泥炭覆土含水量及覆土厚度對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量影響的響應(yīng)面和等高線圖Fig.5 Contour plots and response surface of the effects of water content and thickness of casing soil on A.bisporus yields

覆土含水量為63%時(shí)，覆土厚度及覆土攪拌時(shí)間對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量的影響見(jiàn)圖6。等高線接近圓形，說(shuō)明二者之間交互作用不明顯。覆土厚度為4.5—5.5 cm、攪拌時(shí)間7—12.5 min，雙孢蘑菇產(chǎn)量大于1 400 g/筐。

圖6 泥炭覆土攪拌時(shí)間及覆土厚度對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量影響的響應(yīng)面和等高線圖Fig.6 Contour p lots and response surface of the effects of stirring tim e and thickness of casing soil on A.bisporus yield

2.2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

將優(yōu)化后的泥炭覆土條件進(jìn)行3次平行試驗(yàn)，得到雙孢蘑菇兩潮菇的平均產(chǎn)量為1 584 g/筐，與理論值相比，相對(duì)誤差為5.1%，與預(yù)測(cè)的理論值相接近，驗(yàn)證了模型的有效性。因此，響應(yīng)面法優(yōu)化泥炭覆土制作工藝是可行的，回歸方程能夠比較真實(shí)地反映各篩選因素對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量的影響，具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。使用制作工藝優(yōu)化后的泥炭覆土，在栽培面積為650 m2的現(xiàn)代化菇房中，雙孢蘑菇三潮菇總產(chǎn)量為31.6 kg/m2，較優(yōu)化前總產(chǎn)量增加8%，商品菇率增加30%，商品菇產(chǎn)量增加42.3%。

3 討論

覆土是雙孢蘑菇由營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)轉(zhuǎn)向生殖生長(zhǎng)的必要條件，也是決定雙孢蘑菇產(chǎn)量和質(zhì)量的重要因素［9］。發(fā)達(dá)國(guó)家普遍采用泥炭和甜菜渣石灰的混合物作為覆土材料，是保證雙孢蘑菇高產(chǎn)的條件之一。我國(guó)雙孢蘑菇工廠使用的泥炭和石灰在原料來(lái)源上與發(fā)達(dá)國(guó)家有很大不同，對(duì)覆土原料特性及生產(chǎn)應(yīng)用的研究鮮有報(bào)道。本研究表明，雙孢蘑菇工廠化栽培中，泥炭覆土制作時(shí)合適的含水量、攪拌時(shí)間以及覆土厚度對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量及質(zhì)量均有重要影響，其中覆土攪拌時(shí)間對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量影響最大。本課題組對(duì)此進(jìn)行了相關(guān)研究，發(fā)現(xiàn)隨攪拌時(shí)間的延長(zhǎng)，覆土的通氣孔隙度下降，容重增加。同時(shí)，發(fā)現(xiàn)通氣孔隙度與雙孢蘑菇產(chǎn)量高度正相關(guān)，與雙孢蘑菇一潮菇子實(shí)體大小及商品菇率負(fù)相關(guān)；覆土容重與雙孢蘑菇產(chǎn)量負(fù)相關(guān)，與雙孢蘑菇一潮菇子實(shí)體大小及商品菇率正相關(guān)［10］，這可能與菌絲及子實(shí)體的呼吸生理以及覆土中微生物的作用有關(guān)?？梢酝茢啵趯?shí)際生產(chǎn)中，除攪拌時(shí)間之外，不同攪拌機(jī)械及攪拌方式也會(huì)影響覆土的物理結(jié)構(gòu)進(jìn)而影響雙孢蘑菇的產(chǎn)量和質(zhì)量。本研究為泥炭覆土技術(shù)的優(yōu)化提供一種參考方法，對(duì)雙孢蘑菇工廠化生產(chǎn)具有一定指導(dǎo)意義。

［1］BEWLEYW F.The cultivation ofmushrooms［M］.Rustington：Darlington Mushroom Laboratories Ltd.，1988：73-90.

［2］KALBERER P P.Water relations of themushroom culture Agaricus bisporus：Study of a single break［J］.Scientia horticulturae，1990，41（4）：277-283.

［3］HAYESW A，RANDLE P E，LAST F T.The nature of themicrobial stimulus affecting sporophore formation in Agaricus bisporus（Lange）Sing［J］.Annals of Applied Biology，1969，64（1）：177-187.

［4］王倩，田益華，朱燕華，等.泥炭覆土?xí)r的含水量對(duì)雙孢蘑菇產(chǎn)量及質(zhì)量的影響［J］.食用菌學(xué)報(bào)，2015，22（4）：44-48.

［5］VISSCHER H R.Structure ofmushroom casing soil and its influence on yield andmicroflora［J］.Netherlands JAgric Sci，1975，23（1）：36-47.

［6］RAINEY PB.A study of physical，chemical and biological properties of themushroom casing layer［D］.New Zealand：University of Canterbury，1985.

［7］KALBERER P P.Influence of the depth of the casing layer and the harvesting time on changes of thewater content of the casing layer and the substrate caused by the first flush ofmushrooms［J］.Scientia Horticulturae，1983，21（1）：9-18.

［8］KALBERER P P.Influence of the depth of the casing layer on thewater extraction from casing soiland substrate by the sporophores，on the yield and on the dry matter content of the fruit bodies of the first three flushes of the cultivated mushroom，Agaricus bisporus［J］.Scientia Horticulturae，1985，27（1/2）：33-43.

［9］NOBLE R，GAZE R H.Properties of peat types and additives and their influence on mushroom yield and quality［J］.Mushroom Sci，1995，14：305-312.

［10］王倩，朱燕華，陳輝，等.泥炭覆土攪拌時(shí)間對(duì)覆土物理結(jié)構(gòu)及雙孢蘑菇產(chǎn)量和質(zhì)量的影響［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2017，33（10）：72-77.

（責(zé)任編輯：閆其濤）

Optim ization of peat casing soil preparation for Agaricus bisporus by response surfacemethodology

WANG Qian1，ZHU Yan-hua1，LIZheng-peng1，WANG Hong1，SONG Xiao-xia1，LI Jing2，HUANG Jian-chun1，CHEN Hui1
（1Institute of Edible Fungi，Shanghai Academy of Agricultural Sciences；Key Laboratory of Edible Fungi Resources and Utilization（South），Ministry of Agriculture，P.R.China；National Engineering Research Center of Edible Fungi，National R＆D Center for Edible Fungi Processing；Key Laboratory of Agricultural Genetics and Breeding of Shanghai，Shanghai201403，China；2China National Engineering Research Center Of JUNCAO Technology，F(xiàn)uzhou 350002，China）

Taking the yield of Agaricus bisporus as the response value，response surface D-optimal design was used to optimize the water content（A），stirring time（B）and thickness（C）of peat casing soil for Agaricus bisporus（A15）.The results showed that among the 3 factors，B had themost significant effect on the yield of Agaricus bisporus，followed by A and C.The interaction between ABwas stronger than the interaction between AC and BC.The optimum conditions of peat casing soil for Agaricus bisporus were water content62.4%，mixing time 11 min，and covering thickness 5 cm.Under this condition，the total yield of Agaricus bisporus was1 584 g/tray.

Agaricus bisporus；Peat casing soil；Response surfacemethodology

S

：A

1000-3924（2017）02-071-06

10.15955j.issn1000-3924.2017.02.13

2016-03-23

上海市科技興農(nóng)推廣項(xiàng)目［滬農(nóng)科推字（2014）第2-2號(hào)］；福建省2011計(jì)劃“福建省菌草生態(tài)產(chǎn)業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心”（K80DN8002）

王倩（1982—），女，碩士，助理研究員，主要從事雙孢蘑菇工廠化栽培和生理生化研究。E-mail：wq-15309＠163.com