彭 博，張 勁*，于 勐

（1.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院，新疆 石河子 832000；2.新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院耳鼻喉診療中心，新疆 烏魯木齊 830000）

維族不同年齡段非綜合征性耳聾的MT-RNR1基因檢測(cè)分析

彭 博1，張 勁2*，于 勐2

（1.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院，新疆 石河子 832000；2.新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院耳鼻喉診療中心，新疆 烏魯木齊 830000）

目的探討不同年齡段維族NSHI患者的MT-RNR1基因突變及聽力表型特點(diǎn)。方法 選取2012年6月～2016年6月來自全新疆各地的維吾爾族非綜合征性耳聾（NSHI）患者487例，將487例受檢者按發(fā)病、就診年齡分為成人組（＞18歲）、未成年組（0～18歲），從所有受檢者口中取得粘膜拭子進(jìn)行MT-RNR1基因篩查，結(jié)合聽力學(xué)檢測(cè)結(jié)果，對(duì)比各組MT-RNR1基因陽(yáng)性率的檢出情況。結(jié)果 此次檢測(cè)共發(fā)現(xiàn)MTRNR1基因突變者34人，總突變率6.98%，其中與耳聾相關(guān)的熱門基因位點(diǎn)A1555G、961DelT/InsC有陽(yáng)性結(jié)果，未檢測(cè)到C1494T、T1095C；不同發(fā)病年齡組中和不同就診年齡組中，成人組與未成年組間、未成年組內(nèi)各細(xì)分組間的檢出陽(yáng)性率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；不同耳聾程度的各組檢出的陽(yáng)性率比較也無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。結(jié)論 初步判斷MT-RNR1并非維族聽力損害的主要遺傳分子學(xué)病因，建議臨床醫(yī)生在面對(duì)已有先證者的維族母系家族成員患者時(shí)均應(yīng)篩查易感基因。

維吾爾族；非綜合征性耳聾；MT-RNR1

先天性耳聾是耳鼻喉科常見的遺傳病之一，常染色體隱性遺傳占總發(fā)生率的75%以上，而其中NSHI占遺傳性耳聾的80%左右。其嚴(yán)重影響個(gè)人的生活、就業(yè)競(jìng)爭(zhēng)能力，給整個(gè)社會(huì)帶來極大的負(fù)擔(dān)。相關(guān)研究表明，NSHI患者主要受到遺傳因素的影響[1]，目前絕大多數(shù)耳聾相關(guān)基因突變位點(diǎn)均位于MT-RNR1、GJB2和SLC26A4三大基因上。維吾爾族擁有獨(dú)特的遺傳背景，研究不同聽損程度、不同年齡段維族NSHL患者的MT-RNR1突變結(jié)果，可以有針對(duì)性的為該地區(qū)耳聾病的臨床分子學(xué)診療制定策略。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年6月～2016年6月來自全新疆各地的維吾爾族非綜合征性耳聾（NSHI）患者487例，男性274名，女性213名，年齡最大者46歲，年齡最小者4個(gè)月。所有患者均經(jīng)?？茩z查及聽力學(xué)檢查被確診為NSHI，均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 基因樣本提取方法

嚴(yán)格遵循中優(yōu)集團(tuán)DNA樣本采集帶的使用要求，從患者清潔后的口腔中取得粘膜拭子。按程序保存，使用硅膠吸附法提取目標(biāo)DNA后將樣本送至中優(yōu)細(xì)胞分子遺傳學(xué)檢測(cè)中心進(jìn)行下一步測(cè)序。

1.2.2 基因測(cè)序

利用Primer3設(shè)計(jì)的引物對(duì)MT-RNR1基因片段上的961-1555位點(diǎn)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，純化后的產(chǎn)物利用ABI3130XL測(cè)序儀進(jìn)行測(cè)序及收集數(shù)據(jù)，用軟件Chromas查閱測(cè)序檢測(cè)結(jié)果。

1.2.3 聽力學(xué)檢測(cè)

所有受檢者均在新疆自治區(qū)人民醫(yī)院耳鼻喉診療中心門診的聽力室接受檢查。計(jì)算每位受檢者0.5kHz、1.0kHz、2.0kHz、4.0kHz的聽閾，以平均聽閾劃分聽力損失程度，雙耳聽閾不同者以較輕一側(cè)為準(zhǔn)。

1.2.4 分組

將患者按發(fā)病年齡、就診年齡分組：＞18歲為成人組、0～18歲為未成年組，未成年組細(xì)分：0～3歲為嬰幼兒組、3～6歲為學(xué)齡前組、6～12歲為學(xué)齡組、青春12～18歲為期組。根據(jù)WHO標(biāo)準(zhǔn)將所有受檢者按平均聽閾分類：①26dB≤輕度耳聾≤40dB；②41dB≤中度耳聾≤70dB；③71dB≤重度耳聾≤90dB；④極重度耳聾≥91dB分組。排除聽力正常者。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)此次研究結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，用皮爾遜、連續(xù)性校正的卡方或Fisher確切概率法進(jìn)行檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 基因突變陽(yáng)性檢出情況

MT-RNR1基因突變者34人，檢出總突變率6.98%，包括：2例A1555G、2例961DelT/InsC、3例T1005C、4例A1041G、1例A1585G、1例A1008G、8例G1438A、1例G1442A、2例G1462A、4例T1107C、3例T1119C、1例G1462T，另有1例T1107C+C1048T、1例T1107C+G1438A。與耳聾發(fā)病相關(guān)的線粒體基因突變僅檢出A1555G、961DelT/InsC及T1005C，三者總陽(yáng)性率1.43%。

2.2 不同發(fā)病年齡組的陽(yáng)性檢出情況

成年組中檢出1人攜帶有A1555G線粒體基因突變，其余474人均在未成年組。成年組陽(yáng)性率7.69%，未成年組1.27%，最小理論頻數(shù)T=0.18＜1，F(xiàn)isher計(jì)算P=0.174＞0.05，成年組和未成年組間、未成年組各細(xì)分組間的檢出率對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。詳見表1。

表1 不同發(fā)病年齡組間病理性基因突變陽(yáng)性率的比較 [n（%）]

2.3 不同就診年齡組的陽(yáng)性檢出情況

成年組就診的32名患者中檢出各1例A1555G與T1005C，其余5例在未成年組。未成年就診者中，嬰幼兒組A1555G、961DelT/InsC及T1005C各檢出1例；學(xué)齡前組中各檢出1例961DelT/InsC、T1005C；在學(xué)齡組及青春期組均無病理性基因陽(yáng)性發(fā)現(xiàn)。成年組陽(yáng)性率6.25%，未成年組1.10%，最小理論頻數(shù)T=0.45＜1，F(xiàn)isher計(jì)算P=0.071＞0.05無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。成年組與未成年組間、未成年組內(nèi)各細(xì)分組對(duì)比，檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.4 不同聽力損失組的陽(yáng)性檢出情況

聽力損失輕度4人，中度53人，重度80人，極重度350人；極重度者中檢出27例突變（包括1例A1555G、2例961DelT/InsC、2例T1005C），重度者中有4例突變（1例T1005C），3名中度聽損者被檢出突變（1例A1555G），輕度患者中未檢出陽(yáng)性結(jié)果。各組間對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 討 論

我國(guó)是一個(gè)耳聾大國(guó)，聽力言語(yǔ)殘疾人口接近3000萬，居各類殘疾之首。耳聾會(huì)給任何年齡段人群帶來巨大的負(fù)面影響，給社會(huì)增加沉重的負(fù)擔(dān)。通過加強(qiáng)公共環(huán)境管理和普及健康理念，環(huán)境因素在耳聾發(fā)病中所起的作用逐漸減小，遺傳因素則越來越受到大家的重視。隨著對(duì)GJB2、SLC26A4、MT-RNR1三大致聾基因的研究進(jìn)一步深入，不同的核基因與線粒體基因突變位點(diǎn)在聽力損害發(fā)病過程中所發(fā)揮的作用被逐步證實(shí)。

本次在維族NSHL患者中僅檢測(cè)到三個(gè)病理性基因。其中A1555G自1993年被Prezant首次報(bào)道與耳聾存在密切關(guān)系后，世界各地均有相關(guān)研究支持該結(jié)論。維吾爾族人群受地域及獨(dú)特歷史文化背景的影響，經(jīng)濟(jì)、醫(yī)療、文化等水平偏低，對(duì)聽力損害關(guān)注度低、氨基糖苷類抗生素使用率偏高。有研究表明，氨基糖苷類抗生素通過作用在類似于MT-RNR1編碼12SrRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的16SrRNA解碼區(qū)，使攜帶該類突變基因的人群因內(nèi)耳毛細(xì)胞氧代謝障礙而出現(xiàn)嚴(yán)重的不可逆性聽力損害[2]。近年來一些研究對(duì)961DelT/InsC的致聾性提出了質(zhì)疑，認(rèn)為961DelT/InsC是一個(gè)與AAID相關(guān)性不明確的位點(diǎn)，而T1005C則在有關(guān)研究中被提及與AAID發(fā)病相關(guān)[3]。因此表明，NSHL通過基因篩查可以部分明確病因，為優(yōu)生優(yōu)育及用藥指導(dǎo)提供幫助。

本次研究的維族耳聾線粒體基因陽(yáng)性檢出率較全國(guó)平均水平偏低，初步判斷MT-RNR1并非維吾爾族耳聾的主要遺傳分子學(xué)病因。臨床醫(yī)生應(yīng)對(duì)所有已有先證者的母系家族成員患者建議行易感基因篩查。

[1] 張小芳.非綜合征性耳聾的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2013,19(1):120-123.

[2] 王 芳.線粒體DNA突變與遺傳性聾[J].聽力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志,2016,24(4):405-409.

[3] 王 校.烏魯木齊人群藥物性耳聾患者M(jìn)T-RNR1基因突變頻譜分析[J].中國(guó)優(yōu)生優(yōu)育,2014,20(8):546-50.

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ISSN.2095-8242.2017.041.8095.02

張 勁

本文編輯：王雨辰