王 瑞 張秀艷 陳陽松 杜依聰 湯繼華 王國(guó)英 鄭 軍,*

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一個(gè)新的玉米基因等位突變體的遺傳分析與分子鑒定

王 瑞1,2,**張秀艷3,**陳陽松2杜依聰2湯繼華1王國(guó)英2鄭 軍2,*

1河南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院, 河南鄭州 450002;2中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所, 北京 100081;3中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)生物學(xué)院, 北京 100193

在玉米繁種過程中發(fā)現(xiàn)一個(gè)玉米穗發(fā)芽突變體(), 命名為。經(jīng)過連續(xù)多代自交發(fā)現(xiàn)該突變體性狀能穩(wěn)定遺傳, 并且表現(xiàn)為隱性單基因控制。以與自交系Mo17雜交構(gòu)建F2遺傳定位群體, 利用BSR-Seq方法, 將目的基因定位于玉米第5染色體173.8~175.6 Mb之間。通過基因組序列信息分析發(fā)現(xiàn), 在此定位區(qū)間內(nèi)存在一個(gè)已報(bào)道的基因。基因編碼鉬喋呤合酶小亞基, 參與類胡蘿卜素裂解為ABA的過程。利用2個(gè)獨(dú)立的突變體和的雜合體, 分別與突變體雜合體做雜交進(jìn)行等位測(cè)驗(yàn), 發(fā)現(xiàn)雜交后代中正常籽粒與穗發(fā)芽籽粒比例符合3∶1分離比?；蚪M序列分析發(fā)現(xiàn)突變體中基因在第2外顯子末端及3￠非翻譯區(qū)有60個(gè)堿基的缺失, 與所報(bào)道的突變體、均在第2個(gè)外顯子有轉(zhuǎn)座子插入的突變方式不同。進(jìn)一步通過RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),突變體中基因的表達(dá)量顯著降低。以上實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明,是一個(gè)新的基因等位突變體。

玉米; 穗發(fā)芽; 突變體;; 基因定位

作物種子穗發(fā)芽是指在收獲前籽粒在母體植株果穗上發(fā)芽的現(xiàn)象, 也稱為胚萌。穗發(fā)芽嚴(yán)重影響小麥、水稻等作物的產(chǎn)量、品質(zhì)和種子質(zhì)量, 給作物生產(chǎn)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失, 因而穗發(fā)芽現(xiàn)象一直備受國(guó)內(nèi)外一些植物育種家和生理學(xué)家關(guān)注。20世紀(jì)50年代國(guó)際上就已經(jīng)開始研究穗發(fā)芽問題, 培育和篩選抗、耐穗發(fā)芽種質(zhì)資源, 發(fā)掘抗穗發(fā)芽的重要基因或QTL[1-3], 并采取各種措施解決生產(chǎn)上的穗發(fā)芽問題。

在玉米中, 主要通過穗發(fā)芽突變體()較深入研究穗發(fā)芽相關(guān)基因。從目前已報(bào)道的玉米穗發(fā)芽基因功能來看, 玉米穗發(fā)芽突變體主要通過阻斷ABA的生物合成或降低對(duì)ABA的感應(yīng)度而使籽粒在母體果穗上提前萌發(fā)[4-5], 大致可將這些突變體分為兩大類。第一類是ABA缺陷型, 即ABA合成受阻。這類突變體中目前研究比較清楚的有、、、、、、、、、、等[6-13], 它們不能正常合成ABA, 導(dǎo)致玉米籽粒中ABA含量較低, 不能抑制種子萌發(fā), 從而表現(xiàn)穗發(fā)芽。例如, 玉米和突變體通過阻斷類胡蘿卜素生物合成途徑酶的合成進(jìn)而影響ABA的合成[6-7];突變體抑制萜類物質(zhì)生物合成途徑中酶的合成,從而影響ABA的合成[10];突變體中ABA生物合成途徑的第一個(gè)關(guān)鍵步驟被阻斷, 即環(huán)氧類胡蘿卜素裂解為黃質(zhì)醛的過程被阻斷, 導(dǎo)致ABA生物合成受阻[9];突變體中鉬輔因子合成受阻, 使得ABA醛無法氧化成ABA[9]。第二類是ABA鈍感型。這類突變體目前研究較清楚的有、等[14], 此類突變體不影響ABA的生物合成或ABA的新陳代謝, 只是改變對(duì)ABA的響應(yīng), 因此, 具有穗發(fā)芽特性但不影響胚乳發(fā)育及幼苗顏色, 且外源ABA不能抑制種子萌發(fā)。例如, 玉米突變體內(nèi)源ABA含量并不低, 只是對(duì)外源ABA敏感性降低, 進(jìn)而無法將ABA信號(hào)向下游傳遞[15]。

是玉米穗發(fā)芽突變體, 不能正常編碼植物鉬喋呤(MPT)合酶小亞基, 此酶調(diào)控鉬輔因子(MoCo)生物合成[16-19], 而MoCo是參與ABA前體——類胡蘿卜素裂解為ABA過程中的酶所必需的輔因子[12]。MoCo廣泛存在于原核生物和真核生物中, 而且也是多種酶的輔因子[20]。在植物中, 至少以下4類酶需要鉬輔因子才能維持活性, 即乙醛氧化酶、黃嘌呤脫氫酶、硝酸還原酶和亞硫酸氧化酶[20], 突變體就是缺少依賴鉬輔因子的乙醛氧化酶、黃嘌呤脫氫酶和亞硫酸氧化酶, 導(dǎo)致不能正常合成ABA, 使籽粒在母體上提前萌發(fā)[12]。因此,突變體是研究MPT合成酶小亞基功能的重要材料。

本研究對(duì)實(shí)驗(yàn)室新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)玉米穗發(fā)芽突變體進(jìn)行了遺傳分析和基因定位, 最終發(fā)現(xiàn)是一個(gè)新的基因等位突變體。該研究為進(jìn)一步深入解析玉米穗發(fā)芽的分子機(jī)制和基因功能提供了豐富的實(shí)驗(yàn)材料。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

玉米穗發(fā)芽突變體()在授粉后30 d左右, 便可在果穗上觀察到明顯的穗發(fā)芽表型?；蚨ㄎ蝗后w為雜合體與自交系Mo17雜交并自交獲得的F2群體。2個(gè)基因突變體505G ()、505I ()訂購(gòu)自Maize Genetics Cooperation Stock Center (玉米遺傳學(xué)合作庫存中心, https://maizecoop.cropsci.uiuc.edu/request)。

1.2 突變體的表型鑒定和遺傳分析

由于穗發(fā)芽的籽粒在果穗收獲時(shí), 萌發(fā)的胚芽已干枯致死, 因此隨機(jī)選取穗發(fā)芽果穗上的正常籽粒種植, 自交后鑒定有穗發(fā)芽分離的果穗, 然后再取正常籽粒種植, 以此連續(xù)多代自交觀察該突變體表型。對(duì)于突變體表型的遺傳分析, 就在每一世代自交授粉后30 d左右, 剝開苞葉檢查穗發(fā)芽情況, 選取穗發(fā)芽果穗, 脫粒統(tǒng)計(jì)正常籽粒與穗發(fā)芽籽粒的分離比。

1.3 目的基因的初定位

采用BSR-Seq方法[21]對(duì)目的基因進(jìn)行初定位。隨機(jī)選取有穗發(fā)芽表型分離的F2果穗, 各取40粒正常籽粒和穗發(fā)芽籽粒, 分別剝?nèi)シN皮, 混池為2份實(shí)驗(yàn)樣品, 液氮研磨, 利用植物總RNA提取試劑盒(北京天根生化科技有限公司, Cat# DP432)提取籽?？俁NA, 在北京貝瑞和康生物技術(shù)有限公司利用HiSeq2000儀器完成轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。參考BSR-Seq方法分析流程[21], 對(duì)2個(gè)樣本的測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析, 提取2個(gè)樣本間大量的分子標(biāo)記, 計(jì)算等位基因在2個(gè)混合池的分布比例, 分析后得出基因的初定位區(qū)間。

1.4 定位區(qū)間基因檢索及等位測(cè)驗(yàn)

根據(jù)基因的初定位區(qū)間, 在MaizeGDB數(shù)據(jù)庫網(wǎng)站上(http://www.maizegdb.org/)檢索區(qū)間內(nèi)的基因注釋信息, 發(fā)現(xiàn)已經(jīng)報(bào)道的玉米穗發(fā)芽基因位于該區(qū)間內(nèi)[12]。

為檢測(cè)和是否等位, 分別從、、的雜合體后代中隨機(jī)挑選正常籽粒種植, 種植3行,和各2行, 每行25株。開花授粉時(shí), 任選中一行進(jìn)行單株自交, 同時(shí)收集這一行單株的花粉進(jìn)行混粉, 分別授粉雜交和的其中一行每一個(gè)單株。同理,和的另外一行每個(gè)單株自交, 同時(shí)分別收集各行的花粉, 混粉分別雜交的另外2行每個(gè)單株。授粉后30 d, 剝開苞葉, 檢查是否有穗發(fā)芽的果穗。

1.5 基因組DNA提取、PCR擴(kuò)增和序列分析

授粉后30 d左右, 分別取突變體、、正常籽粒和穗發(fā)芽籽粒, 用CTAB法提取玉米基因組DNA[22]。根據(jù)基因組序列, 利用Primer3軟件(http://primer3.ut.ee/)在線設(shè)計(jì)7對(duì)引物(VP15-G-F1/R1~VP15-G-F7/R7) (表1), 擴(kuò)增產(chǎn)物覆蓋基因組序列。以3個(gè)突變體(、、)基因組DNA為模板, 分別擴(kuò)增基因片段, 將PCR產(chǎn)物送北京擎科新業(yè)生物技術(shù)有限公司測(cè)序。使用DNAMAN軟件比對(duì)分析測(cè)序結(jié)果, 確定基因突變情況。PCR擴(kuò)增體系為2 × KOD buffer 25 μL, 引物(10 μmol L–1) 0.75 μL, 模板DNA 2 μL, dNTPs (2.5 μmol L–1) 5 μL, KOD FX酶(1.0 U μL–1) 1 μL, 補(bǔ)超純水至50 μL。PCR擴(kuò)增條件為94°C預(yù)變性5 min; 94°C變性10 s, 59°C退火30 s, 68°C延伸1 min, 35個(gè)循環(huán); 68°C延伸7 min。用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)目的條帶。

1.6 vp-like4和vp15再次等位測(cè)驗(yàn)

根據(jù)測(cè)序結(jié)果, 針對(duì)、、分別用特異引物(VP15-G-F2/R2、VP15-G-F3/R3)準(zhǔn)確鑒定其雜合突變體, 并再次進(jìn)行等位測(cè)驗(yàn)。取雜合突變體花粉分別雜交、雜合突變體植株; 同樣, 分別取、雜合突變體花粉雜交雜合突變體植株。授粉后30 d, 剝開苞葉, 檢查果穗上穗發(fā)芽籽粒情況, 并統(tǒng)計(jì)分離比。

1.7 RNA的提取及基因表達(dá)量分析

將授粉后30 d左右的穗發(fā)芽和正常籽粒, 剝?nèi)シN皮, 用植物總RNA提取試劑盒(同上)提取籽粒RNA。利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京全式金生物技術(shù)有限公司, Cat# AU311-02)反轉(zhuǎn)錄為cDNA, 以cDNA為模板, 設(shè)計(jì)特異引物VP15-CDS-F1/R1, 并以GAPDH為內(nèi)參引物(表1), 在ABI 7300實(shí)時(shí)定量PCR儀上進(jìn)行實(shí)時(shí)定量分析。PCR體系為dye I 0.4 μL, 10′qMix 10 μL, 引物(10 μmol L–1) 0.5 μL, 模板cDNA 1 μL, 補(bǔ)超純水至20 μL。PCR擴(kuò)增條件為95°C預(yù)變性2 min, 95°C變性10 s, 60°C退火15 s, 72°C延伸30 s, 循環(huán)數(shù)為40, 在72°C延伸30 s收集熒光, 并添加熔解曲線, 按公式2–DDCt計(jì)算出正常和穗發(fā)芽籽粒中基因表達(dá)量差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 突變體vp-like4的表型和遺傳分析

情況下, 玉米授粉后30~40 d, 籽粒頂部的胚乳組織開始硬化, 標(biāo)志著籽粒開始成熟, 授粉后60 d左右籽粒達(dá)到完全成熟。但是, 穗發(fā)芽突變體的雜合體在自交授粉后30 d左右, 就在果穗上明顯觀察到有穗發(fā)芽籽粒的分離(圖1-A)。由于穗發(fā)芽的籽粒在果穗收獲后, 萌發(fā)的胚芽已干枯致死(圖1-B, C), 因此將同一果穗上的正常籽粒再種植、自交, 觀察穗發(fā)芽的遺傳穩(wěn)定性和分離比例。經(jīng)過連續(xù)自交, 發(fā)現(xiàn)的突變性狀能穩(wěn)定遺傳。如表2所示, 隨機(jī)選有穗發(fā)芽分離的果穗, 統(tǒng)計(jì)正常與穗發(fā)芽籽粒, 經(jīng)卡方檢驗(yàn)其分離比符合3∶1, 表明突變體的穗發(fā)芽性狀受單個(gè)隱性核基因控制。

表1 本研究所用的引物

圖1 vp-like4突變體穗發(fā)芽表型

Fig. 1 Viviparousphenotype ofmutant

A:雜合突變體授粉后30 d果穗上正常籽粒和穗發(fā)芽籽粒; B:雜合突變體授粉后60 d果穗上正常籽粒和穗發(fā)芽籽粒; C: 成熟的正常籽粒(WT)和穗發(fā)芽籽粒()。標(biāo)尺=1 cm。

A: normal and viviparous kernels on aheterozygous ear at 30 days after self-pollination; B: normal and viviparous kernels on aheterozygous ear at 60 days after self-pollination; C: mature normal (WT) and viviparous kernels (). Bar = 1 cm.

表2 vp-like4雜合突變體自交授粉后正常籽粒和穗發(fā)芽籽粒的分離情況

χ2(0.05)(1)=3.84.

2.2 vp-like4基因定位

BSR-Seq基因定位分析表明[21], 在第5染色體上有一個(gè)明顯的峰, 以> 0.5為標(biāo)準(zhǔn), 將定位在玉米第5染色體173.8~175.6 Mb區(qū)間內(nèi)(圖2)。

2.3 vp-like4和vp15等位測(cè)驗(yàn)

以混粉雜交和的兩行中, 有穗發(fā)芽分離的果穗(圖3-A, B); 同時(shí),和分別混粉雜交的兩行中, 也有穗發(fā)芽的果穗(圖3-C, D)。這一結(jié)果初步說明,突變體很可能就是基因等位突變體。

圖2 利用BSR-Seq方法對(duì)vp-like4突變體基因的初定位

2.4 vp-like4突變位點(diǎn)鑒定

一步驗(yàn)證和是等位基因并確認(rèn)的突變位點(diǎn), 以基因組序列為參考, 共設(shè)計(jì)7 對(duì)PCR引物(表1), 分別擴(kuò)增、和基因組DNA, 擴(kuò)增產(chǎn)物從-310 bp到4962 bp瓦片式覆蓋了基因組序列。對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序發(fā)現(xiàn),突變體中基因第2外顯子末端及3￠非翻譯區(qū)有60 bp堿基缺失; 而、是在第2個(gè)外顯子不同位置有轉(zhuǎn)座子插入(圖4)。由此說明突變體與的基因突變方式不同,是一個(gè)新的等位突變基因。

圖3 利用雜合突變體對(duì)vp-like4和vp15進(jìn)行等位測(cè)驗(yàn)

A, B: 以雜合突變體混粉分別雜交(A)和(B)的果穗上有穗發(fā)芽籽粒。C, D: 以(C)、(D)分別混粉雜交的果穗上有穗發(fā)芽籽粒。

A, B: viviparous kernels were respectively emerged on(A) and(B) heterozygous ear crossed by the mixed pollen ofheterozygous plants; C, D: viviparous kernels were emerged onheterozygous ear crossed by the mixed pollens of(C) and(D) heterozygous plants.

根據(jù)測(cè)序結(jié)果, 利用特異引物準(zhǔn)確鑒定、、雜合突變體, 利用雜合突變體再一次進(jìn)行等位測(cè)驗(yàn)(具體操作見材料與方法部分)。授粉后30 d, 剝開苞葉檢測(cè)穗發(fā)芽情況發(fā)現(xiàn), 無論是花粉雜交、, 還是、花粉雜交果穗, 都出現(xiàn)了穗發(fā)芽籽粒的分離, 且統(tǒng)計(jì)分析后發(fā)現(xiàn)正常籽粒與穗發(fā)芽籽粒符合3∶1分離比(表3)。進(jìn)一步證明突變體是基因等位突變體。

2.5 Vp15基因在突變體vp-like4中的表達(dá)

分別取、、雜合突變體果穗上的正常籽粒和穗發(fā)芽籽粒, 利用實(shí)時(shí)定量熒光PCR, 以GAPDH為內(nèi)參檢測(cè)基因的表達(dá)量(表1)。結(jié)果如圖5所示, 無論是在還是在和中, 穗發(fā)芽籽?；虻谋磉_(dá)量都顯著低于正常籽粒, 表明中堿基的缺失, 或者和中轉(zhuǎn)座子的插入, 都影響了基因正常表達(dá)。

圖4 Vp15基因結(jié)構(gòu)示意圖及3個(gè)突變體的突變位置

表3 vp-like4與vp15突變體等位測(cè)驗(yàn)

χ2(0.05)(1)=3.84.

圖5 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)Vp15基因分別在3個(gè)突變體vp-like4、vp15-umu1、vp15-DR1126中的正常(WT)和穗發(fā)芽(vp)籽粒中的表達(dá)量

3 討論

近年來, 高通量測(cè)序技術(shù)的迅速發(fā)展也促進(jìn)了基因定位技術(shù)的發(fā)展。例如BSR-Seq (Bulked Segregant RNA-seq)技術(shù)是混合分離分析(BSA, Bulked Segregant Analysis)技術(shù)和RNA測(cè)序(RNA-Seq)技術(shù)結(jié)合發(fā)展起來的高效定位基因的新方法。利用BSR-Seq技術(shù), 選擇分離群體中具有極端性狀的個(gè)體分別構(gòu)建2個(gè)混樣池, 提取2個(gè)樣本總RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。分析RNA-Seq數(shù)據(jù)提取大量的分子標(biāo)記, 對(duì)這些分子標(biāo)記進(jìn)行等位基因定量分析, 根據(jù)等位基因在不同混合池的分布比例, 定位目標(biāo)基因。同時(shí), 也可以利用RNA-Seq數(shù)據(jù)進(jìn)行候選基因的預(yù)測(cè)[21]。對(duì)于像玉米這種基因組較為復(fù)雜的物種, BSR-Seq方法更為有效, 因?yàn)锽SR-Seq只對(duì)mRNA測(cè)序, 不涉及重復(fù)序列和無用序列, 既減少了測(cè)序成本, 也提高了效率[23]。本研究鑒定到一個(gè)新的穗發(fā)芽突變體, 受單隱性核基因控制。我們使用BSR-Seq方法對(duì)突變體開展基因定位, 并迅速獲得定位區(qū)間。該技術(shù)的使用大大減少了工作量, 縮短了實(shí)驗(yàn)周期, 為玉米突變體基因的定位帶來極大的方便。

眾所周知, 等位測(cè)驗(yàn)是通過雜交實(shí)驗(yàn)對(duì)雜交后代性狀的分離情況進(jìn)行分析, 以確定基因的等位性及其遺傳距離。一般情況下, 等位測(cè)驗(yàn)往往利用兩個(gè)隱性純合突變體進(jìn)行雜交[24-25]。在本研究中, 由于穗發(fā)芽純合突變體提前發(fā)芽而導(dǎo)致胚芽在收獲時(shí)死亡, 另外, 由于在未克隆基因之前, 無法準(zhǔn)確鑒定其為雜合突變體還是純合野生型, 因此, 本研究利用混粉的方法進(jìn)行初步的等位性檢測(cè)。取花粉混粉的同時(shí)也對(duì)取粉行中的單株進(jìn)行自交, 根據(jù)自交后檢測(cè)穗發(fā)芽的情況以確證所取花粉包含突變體花粉。反之, 接受花粉的植株除了接受花粉雜交授粉, 也同時(shí)保留另一行自交, 并根據(jù)自交后檢測(cè)穗發(fā)芽的情況以確證接受花粉單株包含突變體雌穗。本研究采取這樣的方法, 初步驗(yàn)證了與的等位性。而隨后的基因序列驗(yàn)證和準(zhǔn)確的雜合體等位雜交, 也證明了確實(shí)是的等位基因。

已有研究報(bào)道顯示基因編碼MPT合成酶小亞基, 此酶調(diào)控鉬輔因子(MoCo)的合成[12], MPT合成酶小亞基廣泛存在于真核和原核生物中[26], 在人類中其功能缺失引起多種疾病[27-29]。MPT合成酶小亞基的C端有高度保守的結(jié)構(gòu)域, 且C端的甘氨酸在催化反應(yīng)中作為硫離子共價(jià)受體起著至關(guān)重要的作用[30]。本研究中在第2外顯子末端及3￠非翻譯區(qū)缺失60 bp堿基, 破壞VP15蛋白C端保守結(jié)構(gòu)域, 進(jìn)而使其無法正常調(diào)控MoCo合成, 導(dǎo)致不能正常合成ABA, 表現(xiàn)為突變體籽粒在母體上提前萌發(fā)。因此,突變體中基因的突變, 與所報(bào)道的、突變體分別在第2個(gè)外顯子有轉(zhuǎn)座子插入的突變方式不同, 是一個(gè)新的未見報(bào)道的基因等位突變方式。此外,突變體中基因60個(gè)堿基的缺失, 推測(cè)其蛋白序列發(fā)生移碼突變。我們檢測(cè)到突變體中基因mRNA的表達(dá)量顯著降低, 推測(cè)可能是由于形成了錯(cuò)誤的mRNA從而導(dǎo)致其mRNA穩(wěn)定性差。總之, 該突變體的鑒定和基因克隆, 為進(jìn)一步深入研究玉米基因功能提供了新的實(shí)驗(yàn)材料。

4 結(jié)論

新發(fā)現(xiàn)一個(gè)玉米穗發(fā)芽突變體, 該突變體受隱性單基因控制。通過BSR-Seq基因定位和基因克隆發(fā)現(xiàn),中基因在第2外顯子末端及3￠非翻譯區(qū)有60 bp堿基缺失的突變, 是一個(gè)新的基因等位突變體。功能突變基因的確認(rèn), 為探討玉米穗發(fā)芽的分子機(jī)制提供了新的試材。

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Genetic Analysis and Molecular Characterization of a New Allelic Mutant ofGene in Maize

WANG Rui1,2,**, ZHANG Xiu-Yan3,**, CHEN Yang-Song2, DU Yi-Cong2, TANG Ji-Hua1, WANG Guo-Ying2, and ZHENG Jun2,*

1College of Agriculture, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, Henan, China;2Institute of Crop Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China;3School of Life Science, China Agricultural University, Beijing 100193, China

We identified a new maize viviparous mutant during seed reproduction, designated as.This mutant phenotype was steadily inherited and genetically regulated by a single recessive gene. Using an F2segregation population derived fromand inbred line Mo17, we mapped the target gene in an interval from 173.8 to 175.6 Mb on chromosome 5 by the BSR-Seq strategy. Using genomic sequence database, we found that viviparous geneis located in this mapping region. The maizegene encodes the molybdopterin synthase small subunit, which is required in the process of catalyzing the reaction from carotenoid to ABA. The heterozygous plants from two independentmutants,and, were used to cross withheterozygous plants, showing a 3:1 segregation ratio for normal and viviparous kernels. The genomic sequence analysis revealed thatmutant had a 60-bp deletion in the second exon and 3’-untranslated region ofgene, which is different fromandboth mutated from atransponson inserting in the second exon ofgene. Further RT-PCR analysis revealed that the expression level ofwas significantly lower in. Taken together, these evidences suggest thatis a new allele mutant from.

maize;; mutant;; gene mapping

2017-08-07;

2017-11-21;

2017-12-18.

10.3724/SP.J.1006.2018.00369

本研究由國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2016YFD0101002)和中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院創(chuàng)新工程專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)資助。

This study was supported by the National Key Research and Development Program of China (2016YFD0101002) and the Agricultural Science and Technology Innovation Program of Chinese Academy of Agricultural Sciences.

Corresponding author鄭軍, E-mail: zhengjun02@caas.cn ** 同等貢獻(xiàn)(Contributed equally to this work)

王瑞, E-mail: 18612261636@163.com; 張秀艷, E-mail: xyzhang0818@163.com

http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.1809.S.20171218.0919.006.html