劉舒凌 黃馨慧 林 昊 熊桂玉 王曉珊 張 兵

(1 廣西中醫(yī)藥大學藥學院，廣西 南寧 530001；2 廣西國際壯醫(yī)醫(yī)院藥劑科，廣西 南寧 530021；3 廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗所，廣西 南寧 530021)

蛤蚧為壁虎科動物蛤蚧(Gekko gecko Linnaeus)除去內(nèi)臟的干燥全體，產(chǎn)于廣西、云南、貴州等地，具有補肺益腎、納氣定喘、助陽益精的功效［1］，為我國傳統(tǒng)名貴中藥。蛤蚧傳統(tǒng)的炮制方法有：凈制(去頭足)、酒炙、油酥、滑石粉或蛤粉炒蛤蚧等方法。其目的多為增效作用，易于粉碎，矯臭除味。目前國內(nèi)外對蛤蚧炮制方法的研究，集中在蛤蚧凈制的研究，即不同入藥部位(頭、身、尾) 的成分和毒理藥理研究［2-4］。而對蛤蚧飲片不同炮制方法研究，鮮有報道。本實驗以廣西產(chǎn)蛤蚧為研究對象，比較不同炮制方法對蛤蚧飲片浸出物、蛋白質(zhì)、氨基酸及微量元素含量的影響，以期為闡明炮制對蛤蚧質(zhì)量的影響，以及為蛤蚧的臨床的合理應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 DHG-9140A型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海齊欣儀器廠)；K210型電炒鍋(柳州龍騰電器廠)；BP211D型電子天平(德國賽多利斯公司)；1100型凱氏定氮儀(濟南海能儀器公司)；L-8900型氨基酸分析儀(日本日立公司)；7700x型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(ICP-MS)(Agilent公司)。

1.2 藥品與試劑 蛤蚧(購自廣西南寧市浚豪野生動物養(yǎng)殖場，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室田慧教授鑒定為壁虎科動物蛤蚧(Gekko gecko Linnaeus) 的原藥材)。特醇紹興花雕酒(浙江省塔牌紹興酒有限公司，批號：20160327)；芝麻油(山東魯花集團有限公司，批號：LH20160122)；蛤粉(廣西太華醫(yī)藥有限公司，批號：20160620)。

2 方法

2.1 蛤蚧不同炮制品的制備 蛤蚧：除去內(nèi)臟，烘干，除去頭(齊眼處切除)、足、鱗片，切成小塊。酒蛤蚧［5-6］：取蛤蚧塊，用黃酒浸潤后，烘干。每100 g蛤蚧塊，用黃酒 20 g。油酥蛤蚧［6］：取蛤蚧塊，涂以麻油，烘至稍黃質(zhì)脆。蛤粉炒蛤蚧［7］：取蛤蚧塊，投入炒熱的滑石粉中，中火炒至酥脆為度，取出，篩去滑石粉。

2.2 含量測定方法

2.2.1 浸出物含量測定 按照《中國藥典》醇溶性浸出物測定法(通則 2201)項下的冷浸法測定［8］。

2.2.2 蛋白質(zhì)含量測定 按照《中國藥典》四部蛋白質(zhì)含量測定法(通則 0731)項下的第一法凱氏定氮法測定總氮值，分別乘以換算因子 6.25求得蛤蚧的總蛋白質(zhì)含量［8］。

2.3.3 氨基酸含量測定 按照食品國家標準《食品中氨基酸的測定》(GB/T 5009.124-2003)測定。取蛤蚧蛤各炮制品，粉碎，干燥粉末約 1 g，加入6 mol/L鹽酸，于110℃烘箱中水解24 h。水解液水浴蒸干，用氨基酸自動分析儀測樣品中氨基酸的種類和含量。

2.3.4 微量元素分析 取蛤蚧各樣品約0.3 g，加10 mL硝酸，放置過夜，第2天再 80預消解(3 h左右)，澄清后，再進行微波消解，冷卻定容到50 mL離心管，搖勻上機，線性濃度 0、4、8、12、16、20 ng/mL)，上樣ICP-MS儀器測定。

3 結(jié)果

3.1 不同炮制方法對蛤蚧浸出物含量和蛋白質(zhì)含量的影響 不同炮制方法的蛤蚧浸出物和蛋白質(zhì)含量的影響不同?？鄢趾?，醇浸出物含量和蛋白質(zhì)含量由高到低的順序為：油酥蛤蚧＞酒蛤蚧＞蛤蚧＞蛤粉炒蛤蚧。見表1。

表1 蛤蚧不同炮制品醇浸出物含量和蛋白質(zhì)含量比較(n=3，%)

3.2 不同炮制方法對蛤蚧氨基酸含量的影響 蛤蚧炮制前后共檢出含有17種游離氨基酸，種類較齊全。蛤蚧各炮制品在氨基酸的種類上無差異，而在含量上稍有差異。與蛤蚧生品相比，油酥制和酒制后氨基酸總量稍有增加，而蛤粉制的氨基酸總量稍有減少，氨基酸總量由高到低的順序為：油酥蛤蚧＞酒蛤蚧＞蛤蚧＞蛤粉炒蛤蚧。蛤蚧炮制前后同時檢出含有七種人體必需氨基酸：蘇氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸。與蛤蚧生品相比，油酥制、酒制、蛤粉制后，必須氨基酸含量均稍有增加，其中以油酥制蛤蚧必須氨基酸的含量最高，必須氨基酸的含量由高到低的順序為：油酥蛤蚧＞酒蛤蚧＞蛤粉炒蛤蚧＞蛤蚧。見表2。

表2 蛤蚧不同炮制品氨基酸含量比較 (n=3)

3.3 不同炮制方法對蛤蚧宏微量元素含量的影響 對宏量元素的測定表明：蛤蚧中富含宏量元素 Ca、K、Na、Mg，其中 K和Ca含量尤其高，分別占炮制品干重的5.4%、3.6%；酒制和油酥制對蛤蚧宏量元素 Ca、K、Na、Mg的含量影響不大，蛤粉制蛤蚧的含量最低。對微量元素的測定表明：蛤蚧中含量較高的微量元素為Fe、 Zn、Mn；酒制可以提高蛤蚧中 Fe、Zn、Mn、Se的含量，油酥制可以提高蛤蚧中 Fe、Mn、Co、Se的含量，蛤粉制可以提高蛤蚧中 Fe、Mn、Co、Se的含量。酒制、油酥、蛤粉制可以提高微量元素 Fe、Zn、Cu、Mn、Co、Se的加和量。見表3。

表3 蛤蚧不同炮制品宏微量元素含量比較(n=3，mg/kg)

4 討論

蛤蚧具有補肺益腎、納氣定喘、助陽益精的功效。蛤蚧酒制后質(zhì)酥易碎，矯臭矯味，可增強補腎壯陽作用；油酥制后易于粉碎，腥氣減少，功效以補肺益精，納氣定喘見長［6］。蛤粉具有化痰止咳之功，蛤粉炒蛤蚧可使蛤蚧質(zhì)地酥脆，加強蛤蚧治咳喘作用［7］。由于蛤蚧的指標成分尚不明確，中國藥典中以浸出物含量衡量蛤蚧的質(zhì)量。浸出物的含量測定表明，扣除水分后，除蛤粉炒外，油酥制和酒制的醇浸出物含量高于生品蛤蚧，其中油酥制蛤蚧的浸出物含量最高。

蛤蚧作為動物藥，蛋白質(zhì)和氨基酸是其主要成分，它們即是組成蛋白質(zhì)的基本單位又直接參與各種酶、激素的合成，調(diào)節(jié)人體代謝平衡［3］。氨基酸在人體內(nèi)不僅提供了合成蛋白質(zhì)的重要原料，而且為促進生長，進行正常代謝、維持生命提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。蛤蚧與其炮制品種各檢出了17種游離氨基酸，包含7種人體所必須的氨基酸。蛤蚧油酥制和酒制后，蛋白質(zhì)含量、氨基酸總量、必須氨基酸含量均稍有提高。蛤蚧蛤粉制后，蛋白質(zhì)含量、氨基酸總量與生品相比稍低，但必須氨基酸含量稍有增加。可能是蛤粉燙制時溫度較高，蛋白質(zhì)變性失活，而造成了蛋白質(zhì)含量的損失。蛤蚧經(jīng)過炮制后質(zhì)地變得較酥脆，利于粉碎，但從保留蛋白質(zhì)和氨基酸含量角度而言，如何選擇適當?shù)呐谥品椒?、溫度和程度，還有待進一步探討。

實驗選擇性測定了宏量元素Ca、K、Na、Mg，以及微量元素 Fe、Zn、Cu、Mn、Co、Se的含量。蛤蚧及其炮制中富含宏量元素Ca、K、Na、Mg。蛤蚧及其炮制品中含量較高的微量元素為 Fe、Zn、Mn。Fe的缺乏會導致貧血、行為和智力方面、免疫力和抗感染能力方面出現(xiàn)各種各樣的問題。Zn對人體的免疫功能起著調(diào)節(jié)作用，能維持男性的正常生理機能，促進兒童的正常發(fā)育等。Mn是維持人和動物性功能的必需微量元素，動物缺Mn會出現(xiàn)發(fā)育遲緩、卵巢和睪丸萎縮、性成熟明顯障礙等表現(xiàn)［3］。缺乏鋅錳會導致一系列腎主生殖發(fā)育的病理變化。蛤蚧及其炮制品中含有較豐富 Fe、Zn、Mn，這些微量元素與蛤蚧補肺益腎、納氣定喘、助陽益精的功效有一定關(guān)系。酒制、油酥、蛤粉制對宏量元素Ca、K、Na、Mg的含量影響不大，但可以提高微量元素Fe、Zn、Cu、Mn、Co、Se的加和量。其中，酒制可以提高Fe、Zn、Mn、Se的含量，油酥制可以提高 Fe、Mn、Co、Se的含量，蛤粉制可以提高蛤蚧中 Fe、Mn、Co、Se的含量。至于提高的原因，是由于輔料的帶入，或是加熱過程中引起的變化，還有待進一步研究。炮制可以提高蛤蚧某些微量元素的含量，對于探討蛤蚧的炮制機制具有一定參考意義。

蛤蚧酒制、油酥制、蛤粉制前后，其浸出物、蛋白質(zhì)、氨基酸、宏微量元素的含量有不同程度的變化。本研究后續(xù)將對蛤蚧不同炮制品炮制工藝、藥理作用進行深入研究，以期為闡釋蛤蚧的炮制原理，規(guī)范炮制工藝提供科學依據(jù)。