擬南芥細(xì)胞周期基因AtCDC5的功能研究及抗體制備

徐金龍 梁爽 郁飛

摘要：MYB相關(guān)CDC5（Cell division cycle 5）蛋白對于細(xì)胞周期G2期的正常進(jìn)行是必須的，但是在植物中對這種蛋白質(zhì)的研究還較少涉及。本試驗(yàn)測量比較野生型擬南芥（Col-0生態(tài)型）和AtCDC5 T-DNA插入缺失突變體（GK_278809）的主根生長速度和長度，利用瞬時(shí)表達(dá)AtCDCS-GFP研究AtCDC5在擬南芥葉片葉肉細(xì)胞中的定位，同時(shí)利用AtCDC5N端144個(gè)氨基酸在大腸桿菌中進(jìn)行原核表達(dá)和純化，免疫家兔獲得針對AtCDC5的多克隆特異性抗體，從表型、細(xì)胞和蛋白質(zhì)水平研究AtCDC5基因的功能。結(jié)果表明，GK_278809的主根因發(fā)育受到抑制而生長速度緩慢;AtCDC5-GFP融合蛋白主要定位于細(xì)胞核中：經(jīng)過分離得到的AtCDC5蛋白抗血清能夠有效地檢測出10ng原核表達(dá)的AtCDC51_144抗原，并在原生質(zhì)體AtCDC5過表達(dá)體系中檢測出1條分子量約為120 000的條帶，此條帶與AtCDC5-GFP大小相近。本研究成功制備出AtCDC5蛋白的多克隆抗體，為進(jìn)一步研究AtCDC5蛋白影響細(xì)胞周期從而影響植物生長發(fā)育提供了研究基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：細(xì)胞周期基因CDC5;亞細(xì)胞定位;原核表達(dá);抗體制備;

中圖分類號：Q786 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1000-4440（2019）01-0026-07

細(xì)胞周期作為細(xì)胞生命活動(dòng)的基本過程，在生物體生長發(fā)育進(jìn)程中發(fā)揮著極其重要的功能。目前已發(fā)現(xiàn)與細(xì)胞周期調(diào)控有關(guān)的分子主要包括三大類：期蛋白、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（cDK）以及細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑（CKI）。這三類因子相互作用，共同維護(hù)細(xì)胞周期的順利進(jìn)行。在擬南芥中，AtCDC5屬于一種細(xì)胞周期蛋白，它是生物體進(jìn)行正常生命活動(dòng)的根本保證。AtCDC5表達(dá)主要在具有較高分裂活性的組織中，并且貫穿于整個(gè)胚胎形成過程。AtCDC5對于擬南芥G2/M期的轉(zhuǎn)換至關(guān)重要，AtCDC5功能缺失突變體表現(xiàn)為胚胎致死，該致死表型也限制了對AtCDC5功能的研究。