原核表達(dá)
- 分子對接闡明草甘膦與水稻醛酮還原酶（OsALR2）的作用及QsALR2的表達(dá)純化
；分子對接；原核表達(dá)；包涵體變復(fù)性；酶活測定草甘膦（glyphosate）是一種重要的除草劑，具有內(nèi)吸傳導(dǎo)性強(qiáng)，廣譜，藥效好，靶向性高，環(huán)境兼容性高等優(yōu)點(diǎn)。草甘膦以植物葉綠體中5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶（5-enolpyruvate shikimate-3phosphate synthase，EPSPS）為靶標(biāo)。EPSPS是莽草酸代謝途徑的第6個酶，負(fù)責(zé)催化磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）和磷酸莽草酸（S3P）生成5一烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸（EP
植物保護(hù) 2023年6期2023-12-28
- 牙鲆細(xì)胞因子M17蛋白原核表達(dá)及其多克隆抗體制備
ET-32a原核表達(dá)載體，構(gòu)建M17基因原核表達(dá)質(zhì)粒pET-32a-M17。將構(gòu)建的質(zhì)粒pET-32a-M17轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌BL21（DE3）細(xì)胞，通過IPTG誘導(dǎo)M17蛋白表達(dá)，利用Ni-NTA親和層析柱純化M17重組蛋白。利用純化的重組M17蛋白免疫小鼠獲得M17多克隆抗體（抗血清）。結(jié)果顯示，IPTG誘導(dǎo)后M17蛋白分子質(zhì)量大小約為50.0 ku，M17重組蛋白主要以包涵體表達(dá)為主；Ni-NTA親和層析柱純化后透析復(fù)性后M17重組蛋白濃度為597
天津農(nóng)業(yè)科學(xué) 2023年8期2023-08-16
- 鼠源Desmin基因克隆表達(dá)及其生物信息學(xué)分析
min真核/原核表達(dá)載體，明確鼠源Desmin蛋白生物學(xué)功能，為在體外及細(xì)胞內(nèi)表達(dá)系統(tǒng)中鑒定Desmin互作蛋白及探索其作用網(wǎng)絡(luò)提供理論依據(jù)?！痉椒ā客ㄟ^RT-PCR克隆Desmin基因，分別構(gòu)建原核表達(dá)載體pGEX-4T-1-Desmin-Flag和真核表達(dá)載體pcDNA3.0-Desmin-Flag，以IPTG對原核表達(dá)載體進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，并通過ProtParam、ProtScale、TMHMM-2.0、SignalP-5.0、SOPMA和SWISS-M
南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2023年2期2023-07-22
- 花生鋁響應(yīng)類受體蛋白激酶AhPRK4的原核表達(dá)分析
D），并通過原核表達(dá)和體外磷酸化體系分析了AhPRK4-CD的自磷酸化活性。結(jié)果表明：（1）不同鋁處理時間及不同鋁濃度處理后，AhPRK4的轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)，顯著響應(yīng)鋁處理，是鋁誘導(dǎo)基因；（2）AhPRK4含有673個氨基酸，屬于LRR-III蛋白激酶家族成員，具跨膜域和信號肽，且預(yù)測具有磷酸化活性位點(diǎn)；（3）體外誘導(dǎo)表達(dá)出約71 kD的可溶性蛋白（GST-AhPRK4-CD），經(jīng)凝膠親和層析純化，得到基于蛋白印跡實(shí)驗(yàn)（Western Blot）驗(yàn)證正確的重組
廣西植物 2023年6期2023-07-17
- 草地貪夜蛾β-Actin基因的原核表達(dá)及多克隆抗體制備
bp。利用原核表達(dá)系統(tǒng)誘導(dǎo)獲得了約37 kD的β-Actin重組蛋白，將純化后的重組蛋白免疫新西蘭大白兔制備得到β-Actin多克隆抗體血清。經(jīng)ELISA檢測，獲得的抗血清效價(jià)達(dá)1∶ 256000。利用制備的β-Actin抗血清進(jìn)行Western blot試驗(yàn)，結(jié)果顯示在42 kD處出現(xiàn)強(qiáng)且單一的蛋白條帶， 說明制備的β-Actin抗血清能有效識別草地貪夜蛾β-Actin蛋白。綜上，本研究制備的β-Actin多克隆抗體效價(jià)高、特異性較強(qiáng)，能為草地貪夜蛾后
山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào) 2023年2期2023-06-14
- 灰飛虱脂肪酶LsLPS的原核表達(dá)及Ni-NTA純化
列，并進(jìn)行了原核表達(dá)和His標(biāo)簽融合蛋白的純化。結(jié)果顯示，灰飛虱 LsLPS 開放閱讀框長1 293 ?bp，可翻譯成430個氨基酸，含有信號肽序列和PF00151結(jié)構(gòu)域。 LsLPS 連接到原核表達(dá)載體pET28a（+）-SUMO、pCold I后在表達(dá)菌株BL21（DE3）中主要以包涵體形式表達(dá)，連接到pET43.1a（+）后可在表達(dá)菌株BL21（DE3）中可溶性表達(dá)。采用pH 8.0、含20 mmol/L 咪唑的磷酸緩沖液作為平衡液，Ni-NTA純化
江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2022年3期2022-07-16
- 非洲豬瘟病毒結(jié)構(gòu)蛋白p54的優(yōu)化表達(dá)及間接ELISA抗體檢測方法的建立
-1-p54原核表達(dá)質(zhì)粒，在大腸桿菌BL21（DE3）菌株中進(jìn)行復(fù)制，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，對重組蛋白利用SDS-PAGE分析和免疫印跡鑒定正確后，進(jìn)行表達(dá)條件優(yōu)化，并純化重組蛋白。隨后用ASFV-p54重組蛋白為包被抗原，通過條件優(yōu)化、特異性試驗(yàn)、敏感性試驗(yàn)和重復(fù)性試驗(yàn)，建立一種穩(wěn)定的血清ASFV抗體檢測方法。結(jié)果顯示，ASFV p54基因成功克隆到pGEX-6P-1原核表達(dá)載體中，得到pGEX-6P-1-p54原核表達(dá)質(zhì)粒;轉(zhuǎn)化E. coli菌株BL21
國外畜牧學(xué)·豬與禽 2022年2期2022-06-10
- 番鴨細(xì)小病毒YL08株VP2和VP3蛋白的原核表達(dá)及免疫反應(yīng)性
2;VP3;原核表達(dá);免疫反應(yīng)性中圖分類號： S852.65+7? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2022）09-0169-04番鴨細(xì)小病毒（Muscovy duck parvovirus，MDPV）主要侵害3周齡以內(nèi)的雛番鴨，引起番鴨細(xì)小病毒病，國內(nèi)亦稱番鴨“三周病”[1-2]。我國動物醫(yī)學(xué)專家林世棠于1991年最先發(fā)現(xiàn)并報(bào)道了該病發(fā)生[3]。番鴨細(xì)小病毒病發(fā)病率為40%～50%，死亡率在50%～80%之間，對番鴨飼養(yǎng)業(yè)的危害極大[4]。
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2022年9期2022-06-09
- 鰻鱺皰疹病毒ORF87基因克隆及其多克隆抗體的制備
F87基因經(jīng)原核表達(dá)載體誘導(dǎo)表達(dá)獲得的融合蛋白ORF87具有Serine/threonine蛋白激酶活性，以其免疫新西蘭大白兔制備獲得的ORF87多克隆抗體具有高效價(jià)，能特異性識別AngHV感染，可作為亞細(xì)胞定位及表達(dá)時相分析等蛋白特性研究的工具，用于解析ORF87基因在AngHV侵染過程中的作用。關(guān)鍵詞： 鰻鱺皰疹病毒（AngHV）;ORF87基因;原核表達(dá);多克隆抗體;免疫原性中圖分類號： S941.41? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2022年2期2022-05-26
- 斑翅果蠅YolkProtein1基因原核表達(dá)及抗體制備
1）基因進(jìn)行原核表達(dá)，并對Ds-YP1蛋白的功能結(jié)構(gòu)域和信號肽進(jìn)行預(yù)測，克隆多肽并構(gòu)建pET-32a-c（+）-Ds-YP1原核表達(dá)載體，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)并免疫小鼠制備抗體;用成功制備的抗體進(jìn)行斑翅果蠅蛋白WesternBlot驗(yàn)證。結(jié)果表明構(gòu)建的pET-32a-c（+）-Ds-YP1表達(dá)載體在大腸桿菌中表達(dá)了His-Ds-YP1融合蛋白，通過免疫小鼠成功制備并純化了Ds-YP1多克隆抗體。制備的Ds-YP1多克隆抗體不但能識別His-Ds-YP1融合蛋白
山東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2022年3期2022-04-27
- 斑馬魚g型溶菌酶基因序列分析及其原核表達(dá)
-g2可通過原核表達(dá)獲得高純度、高溶菌活性的融合蛋白，為探究斑馬魚溶菌酶的抗菌機(jī)制提供了技術(shù)支持。關(guān)鍵詞： 斑馬魚;g型溶菌酶;序列特征;原核表達(dá);溶菌活性中圖分類號： S965.819? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：2095-1191（2022）01-0229-09Sequence analysis and prokaryotic expression of zebrafishg-type lysozyme
南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2022年1期2022-04-21
- 甘蔗線條花葉病毒P1蛋白基因原核表達(dá)及抗血清制備
將目的基因與原核表達(dá)載體pET28a連接，獲得pET28a-P1SCSMV。將連接正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta菌株，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后，SDS-PAGE電泳檢測顯示在分子量約為42 kDa處有目的蛋白帶，與預(yù)期的SCSMV P1大小一致。融合蛋白主要是以可溶性蛋白的形式存在。利用鎳柱親和純化重組的SCSMV P1蛋白，并免疫健康新西蘭大白兔，制備兔抗血清。Western blot分析顯示，在對多個樣品進(jìn)行檢測時制備的抗血清能特異性地識別SCSMV
植物保護(hù) 2022年2期2022-04-04
- 菠蘿AcPLD2基因多克隆抗體制備及其在果實(shí)黑心病發(fā)生中的表達(dá)分析
列片段插入到原核表達(dá)載體pET-30a（+）多克隆位點(diǎn)HⅠ和RⅠ之間，構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET-AcPLD2，并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21（DE3）中誘導(dǎo)表達(dá)菌體蛋白。經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測，結(jié)果表明重組蛋白成功獲得了高效表達(dá)，分子量約為57?kDa。重組蛋白經(jīng)純化后免疫新西蘭兔，獲得了多克隆抗血清，采用Protein A/G純化法對抗血清進(jìn)行了純化。將純化后的抗血清通過間接酶聯(lián)免疫分析，測定其效價(jià)比可達(dá)1∶1?600?000，表明所制備的抗體具有很好的靈
熱帶作物學(xué)報(bào) 2022年2期2022-03-07
- 玉木耳漆酶基因Aclac的克隆及原核表達(dá)
c進(jìn)行克隆及原核表達(dá)分析，為深入研究漆酶基因在玉木耳子實(shí)體發(fā)育中的生物學(xué)功能提供理論依據(jù)?！痉椒ā靠寺clac基因的cDNA和DNA全長序列，對其進(jìn)行生物信息學(xué)分析，并將目的基因連接至pET-28a質(zhì)粒上以構(gòu)建原核表達(dá)載體pET28a-Aclac，將其轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）中誘導(dǎo)表達(dá)?！窘Y(jié)果】克隆獲得的Aclac基因cDNA序列長度為1734 bp，編碼577個氨基酸殘基;Aclac基因DNA序列長度為2521 bp，含14個內(nèi)含子。AcLAC蛋
南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2021年8期2021-12-15
- 香蕉果實(shí)MaNPC1基因原核表達(dá)及多克隆抗體制備
ORF）進(jìn)行原核表達(dá)，并制備其多克隆抗體，為深入探究MaNPC1在香蕉果實(shí)抵御炭疽病中的作用機(jī)制提供理論依據(jù)?！痉椒ā靠寺aNPC1基因ORF序列，對其進(jìn)行生物信息學(xué)分析及抗原性預(yù)測，并通過雙酶切法構(gòu)建其原核表達(dá)載體，利用熱激法轉(zhuǎn)入大腸桿菌Rosetta 2（DE3）感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，重組蛋白經(jīng)Ni-NTA樹脂層析柱純化后免疫新西蘭兔，以制備多克隆抗體。同時，運(yùn)用Western blotting和實(shí)時熒光定量PCR分別檢測香蕉果實(shí)貯藏過程中在炭疽
南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2021年7期2021-11-03
- 馬藍(lán)IGPS基因的克隆、表達(dá)分析及原核表達(dá)
BcIGPS原核表達(dá)載體，并優(yōu)化誘導(dǎo)表達(dá)條件。結(jié)果表明：BcIGPS（GenBank登錄號：MT210517）全長為1176 bp，包含1個開放閱讀框（ORF），編碼392個氨基酸，具絲氨酸（Ser）、蘇氨酸（Thr）、酪氨酸（Tyr）磷酸化位點(diǎn)31個，無跨膜結(jié)構(gòu)，無信號肽，亞細(xì)胞定位于葉綠體中。BcIGPS含有product（indole）活性結(jié)構(gòu)域和IGPS、TrpC特異性位點(diǎn)。qPCR分析結(jié)果顯示，BcIGPS基因在不同器官的相對表達(dá)豐度依次為：葉>
熱帶作物學(xué)報(bào) 2021年8期2021-09-14
- 小麥TaARF20基因克隆及表達(dá)分析
腸桿菌中進(jìn)行原核表達(dá)。采用實(shí)時熒光定量PCR檢測TaARF20基因在普通小麥不同組織及普通小麥和多子房小麥不同發(fā)育時期幼穗中的表達(dá)模式?！窘Y(jié)果】TaARF20基因包含1個內(nèi)含子和2個外顯子，編碼區(qū)（CDS）長度為1116 bp，編碼371個氨基酸殘基，蛋白分子量約40.38 kD，理論等電點(diǎn)（pI）為4.96，脂溶性系數(shù)為19.80，疏水性系數(shù)為0.985，不穩(wěn)定系數(shù)為50.51，屬于不穩(wěn)定蛋白，定位在細(xì)胞核中，含有ARF家族蛋白的保守結(jié)構(gòu)域和B3 DNA
南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2021年9期2021-09-13
- 紅螯螯蝦卵黃蛋白原VWD結(jié)構(gòu)域的原核表達(dá)及純化
全基因合成;原核表達(dá);包涵體中圖分類號： S966.12? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：2095-1191（2021）05-1378-09Abstract：【Objective】Prokaryotic expression of the vitellogenin（Vg） VWD domain of red claw crayfish（Cherax quadricarinatus） not only p
南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2021年5期2021-09-08
- 三七PnAAE41基因的克隆、表達(dá)分析及原核表達(dá)
;時空表達(dá);原核表達(dá)中圖分類號：S567.23+6????? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：AClone and Prokaryotic Expression Analysis of Acyl-activating Enzyme Gene from Panax notoginsengYAN Jing1，2，3， XIANG Guisheng1，2， FENG Lei1，2，3， YANG Mei3， GUO Min3， ZHANG Guanghui1，2*1. Nation
熱帶作物學(xué)報(bào) 2021年7期2021-08-26
- 暴馬桑黃倍半萜合酶基因SbTps1的克隆及表達(dá)分析
與序列分析;原核表達(dá);熒光定量中圖分類號：S567.3??? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A?? 文章編號：1006-8023（2021）04-0033-07Cloning and Function Identification of the Sesquiterpenes Synthase GeneSbTps1 in Sanghuangporus baumiiWUMUTI Bahetibieke， TANG Yuqian， WANG Shuting， LI Yawei，
森林工程 2021年4期2021-08-23
- 斑馬魚血管新生相關(guān)因子PTPRB的原核表達(dá)及其多克隆抗體制備
要：【目的】原核表達(dá)斑馬魚（Danio rerio）蛋白酪氨酸磷酸酶受體B（PTPRB）并制備多克隆抗體，為研究斑馬魚PTPRB基因功能及血管發(fā)育相關(guān)信號傳導(dǎo)通路打下基礎(chǔ)?！痉椒ā坎捎脽o縫克隆技術(shù)將斑馬魚PTPRB基因插入原核表達(dá)載體pET-B2m構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌B21感受態(tài)細(xì)胞后采用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，然后以誘導(dǎo)表達(dá)的融合蛋白免疫大耳兔制備多克隆抗體，并采用Western blotting和ELISA檢測多克隆抗體的特異性及免疫效價(jià)。【結(jié)
南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2021年4期2021-08-03
- 花生類受體蛋白激酶基因AhBAK1的克隆及原核表達(dá)
基因克隆， 原核表達(dá)， 蛋白純化中圖分類號：?Q943文獻(xiàn)標(biāo)識碼：?A文章編號：?1000-3142（2021）04-0573-11Abstract：?BAK1， an LRR receptor-like protein kinase， interacts with other receptor-like protein kinase and mediates the programmed cell death in plant innate immune
廣西植物 2021年4期2021-06-29
- 卵形鯧鲹RelB蛋白原核表達(dá)及其多克隆抗體制備
elB蛋白;原核表達(dá);重組蛋白;多克隆抗體中圖分類號： S965.331? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：2095-1191（2021）01-0238-07Abstract：【Objective】The polyclonal antibody against Trachinotus ovatus RelB protein（TroRelB） was prepared tolay the foundation for
南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2021年1期2021-04-19
- 白背飛虱VAMP7和Vti1a蛋白的原核表達(dá)、抗體制備及應(yīng)用
i1a基因的原核表達(dá)載體，并將載體分別轉(zhuǎn)入大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，得到了相應(yīng)的原核表達(dá)蛋白。在蛋白純化后，將純化蛋白注射于新西蘭大白兔體內(nèi)進(jìn)行免疫，分別制備得到VAMP7和Vti1a的抗體。兩種抗體經(jīng)Western blot檢測發(fā)現(xiàn)，均可分別與白背飛虱體內(nèi)的VAMP7和Vti1a特異性結(jié)合。利用制備的抗體對白背飛虱的腸道進(jìn)行免疫標(biāo)記，激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)所制備抗體能夠在白背飛虱中腸上皮細(xì)胞的胞質(zhì)中特異性標(biāo)記到VAMP7和Vti1a，表明制備的抗體能夠成
植物保護(hù) 2021年1期2021-03-12
- 紅笛鯛SR-BI基因的原核表達(dá)及條件優(yōu)化
列定向克隆到原核表達(dá)載體pET-28a（+）中，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，并對重組表達(dá)菌株的表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果顯示，成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET28a-SR-BI，并能在大腸桿菌BL21中表達(dá)，表達(dá)的融合蛋白分子量為50.0ku。融合蛋白的最佳誘導(dǎo)表達(dá)溫度、IPTG濃度和時間分別為16℃、0.05mmol/L和8h。研究結(jié)果為進(jìn)一步研究SR-BI的功能奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：紅笛鯛;SR-BI基因;原核表達(dá);條件優(yōu)化中圖分類號 S
安徽農(nóng)學(xué)通報(bào) 2021年3期2021-03-03
- 番木瓜干旱脅迫相關(guān)CpDHN1基因的克隆與分析
表達(dá)特性以及原核表達(dá)分析。結(jié)果顯示，CpDHN1編碼211個氨基酸，其理論分子量為24.09 kDa，等電點(diǎn)為5.05，總平均疏水指數(shù)為–1.584，不穩(wěn)定系數(shù)為66.51，屬于不穩(wěn)定、高度親水的細(xì)胞核定位蛋白。CpDHN1蛋白富含谷氨酸、賴氨酸和絲氨酸，含有3個保守區(qū)域，即2個K片段和1個S片段，符合脫水素蛋白的基本結(jié)構(gòu)特征，屬于SKn型脫水素。生物信息學(xué)分析表明CpDHN1無跨膜螺旋，其二級結(jié)構(gòu)中以α-螺旋結(jié)構(gòu)占主導(dǎo)。表達(dá)分析顯示，該基因在根、葉片和韌
熱帶作物學(xué)報(bào) 2021年12期2021-01-13
- 溶藻弧菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)C-環(huán)組分VscQ的原核表達(dá)及免疫原性
基因定向插入原核表達(dá)載體pGEX-4T-1中，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-vscQ。用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)后，能在大腸桿菌（Escherichia coli）BL21（DE3）中表達(dá)分子質(zhì)量約為61.6kDa的VscQ融合蛋白。VscQ蛋白表達(dá)的最優(yōu)條件為：0.4mmol/L IPTG，15℃條件下誘導(dǎo)12h。用純化后的VscQ融合蛋白免疫白兔，獲得高效多克隆抗體，抗體效價(jià)為1∶121500。兔抗VscQ血清能與重組VscQ蛋白發(fā)生特
安徽農(nóng)學(xué)通報(bào) 2020年18期2020-10-26
- 尼羅羅非魚Galectin-related protein B基因的原核表達(dá)與條件優(yōu)化
點(diǎn)引物，構(gòu)建原核表達(dá)載體pET-28a-GRPB，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，誘導(dǎo)重組質(zhì)粒的蛋白表達(dá)，并對蛋白表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明：在28℃條件下，IPTG濃度為0.20mmol/L，誘導(dǎo)6h時，誘導(dǎo)重組蛋白的效果最佳;經(jīng)Western-blot免疫印跡顯示，純化后的重組蛋白能與帶HIS標(biāo)簽的單抗特異結(jié)合，條帶單一，進(jìn)一步證明該重組蛋白為Galectin-related protein B蛋白。關(guān)鍵詞：尼羅羅非魚;凝集素相關(guān)蛋白B;原核表達(dá);條件優(yōu)化中圖
安徽農(nóng)學(xué)通報(bào) 2020年18期2020-10-26
- 長春花茉莉酸-異亮氨酸合成酶CrJAR1生物信息學(xué)分析與原核表達(dá)
序列，并進(jìn)行原核表達(dá)。結(jié)果表明：CrJAR1基因編碼了585個氨基酸，該蛋白不存在跨膜區(qū)域，定位于細(xì)胞質(zhì)中，且該蛋白不含有信號肽;進(jìn)一步系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明， 長春花CrJAR1與筍瓜和番木瓜的JAR1同源性最高;對二級、三級結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測，發(fā)現(xiàn)CrJAR1蛋白主要由α-螺旋構(gòu)成;同時，成功構(gòu)建了pET-30b-CrJAR1重組表達(dá)質(zhì)粒，并經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后在大腸桿菌BL21中異源表達(dá)，經(jīng)16、37 ℃分別誘導(dǎo)至16 h后，均顯示出最高的表達(dá)量。綜上結(jié)果，對長春
廣西植物 2020年8期2020-10-20
- 血管內(nèi)皮生長因子原核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)
（VEGF）原核表達(dá)載體并誘導(dǎo)其表達(dá)蛋白，為后續(xù)進(jìn)行VEGF相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。 方法 通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）擴(kuò)增得到目的片段，將DNA片段克隆至帶組氨酸標(biāo)簽的pET-30a（+）載體上;構(gòu)建的重組質(zhì)粒經(jīng)過菌液聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）及測序方法鑒定;利用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)重組質(zhì)粒表達(dá)，通過蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）進(jìn)行鑒定。 結(jié)果 以HepG2細(xì)胞為模板擴(kuò)增出大小正確的片段;構(gòu)建的pET-30a-VE
中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2020年23期2020-10-09
- 蜂毒前溶血肽原基因的改造及其原核表達(dá)
原;蜂毒肽;原核表達(dá);融合蛋白中圖分類號：Q789文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1002-1302（2020）16-0087-04蜂毒肽（melittin）又稱蜂毒溶血肽，是蜂毒（bee venom）的主要活性成分之一[1]，在抗菌[2-3]、消炎[4]、抗腫瘤[5-6]乃至肌肉再生[7]等方面具有一定應(yīng)用價(jià)值。目前基因工程技術(shù)為蜂毒肽生產(chǎn)提供了新的途徑[8-9]，但從研究到生產(chǎn)仍有一定距離。蜂毒前溶血肽原（melittin precursor/Preprome
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2020年16期2020-09-24
- 大豆GmGolS基因的原核表達(dá)及抗旱性分析
S基因構(gòu)建到原核表達(dá)載體pET28上，然后將載體導(dǎo)入大腸桿菌Rosetta（DE3）中，對其進(jìn)行異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalacto pyranoside，簡稱IPTG）誘導(dǎo)。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，簡稱SDS-PAGE）結(jié)果表明，在誘導(dǎo)時間為3 h、IPTG濃度為0.1 mmol/L的
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2020年14期2020-08-28
- 沙糖橘S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶基因克隆及表達(dá)分析
，且通過構(gòu)建原核表達(dá)載體能成功誘導(dǎo)表達(dá)獲得CrSAMDC融合蛋白。【結(jié)論】CrSAMDC基因在沙糖橘中的表達(dá)具有組織特異性，且以單拷貝存在，在干旱脅迫下呈上調(diào)表達(dá)趨勢，即參與干旱脅迫響應(yīng)的多胺代謝調(diào)控。關(guān)鍵詞： 沙糖橘;CrSAMDC基因;多胺;干旱脅迫;原核表達(dá);Southern雜交Abstract：【Objective】The S-adenosylmethionine decarboxylase gene（CrSAMDC） was cloned fro
南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2020年6期2020-08-11
- 小鼠CD40胞外片段的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備
達(dá)載體，進(jìn)行原核表達(dá)及多克隆抗體制備。結(jié)果表明，成功擴(kuò)增了522 bp的目的基因，表達(dá)并純化獲得了45 ku的CD40重組蛋白，多克隆抗體抗體不但可與重組蛋白結(jié)合，與小鼠脾臟天然CD40蛋白也可以特異性結(jié)合。說明CD40重組蛋白表達(dá)成功，且制備的抗體有望模擬CD40L為B細(xì)胞活化提供第二信號。關(guān)鍵詞：CD40;原核表達(dá);多克隆抗體;半抗原;免疫增強(qiáng)中圖分類號：Q786 ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：0439-8114（2020）06-0130-0
湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2020年6期2020-07-09
- 林麝源肺炎克雷伯氏菌新LysR家族轉(zhuǎn)錄因子的原核表達(dá)
372基因;原核表達(dá)林麝（Moschus berezoviskii）為《瀕危野生動植物種國際貿(mào)易公約》附錄Ⅱ和國家一級保護(hù)動物，其雄性分泌的麝香為名貴的中藥材和高級動物香料，具有重要的社會價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。人工養(yǎng)殖是林麝資源保護(hù)的主要對策之一，我國從1958年開始人工養(yǎng)殖林麝，歷經(jīng)半個多世紀(jì)，發(fā)展仍較緩慢。影響林麝人工養(yǎng)殖的一個重要原因是林麝化膿性肺炎疾病的發(fā)病率和死亡率高[1]。林麝患化膿性肺炎后前期一般不易發(fā)現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)處于較嚴(yán)重階段，基本上無救治希望
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2020年9期2020-06-21
- 水稻未知功能結(jié)構(gòu)域基因OsDUF6的抗體制備
sDUF6的原核表達(dá)載體檢測多克隆抗體的特異性，最后利用轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)一步檢測抗體。[結(jié)果]利用高效液相色譜法（HPLC）檢測3條合成的短肽（蛋白純度>85%）用于免疫新西蘭雄性大白兔，得到效價(jià)為1：512000的3種多克隆抗體。構(gòu)建原核表達(dá)載體pGEX6p-1-DUF6，在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白GST-OsDUF6，并用GST單克隆抗體成功檢測到重組蛋白。在此基礎(chǔ)上，對制備的抗體進(jìn)行特異性檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Anti-DUF6-1多克隆抗體結(jié)合重組蛋白GST
福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2020年2期2020-06-19
- 基于密碼子優(yōu)化策略的牛妊娠相關(guān)糖蛋白9（bPAG9）的原核表達(dá)及純化
態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行原核表達(dá)，經(jīng)過超聲波裂解和親和層析方法獲得重組蛋白bPAG9。用SDS-PAGE 和 Western Blot方法檢測重組蛋白bPAG9的表達(dá)效果。結(jié)果顯示，PCR擴(kuò)增得到1 128 bp的優(yōu)化bPAG9基因片段，構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET30a-bPAG9經(jīng)雙酶切獲得約5 244 bp和1 125 bp的2條片段，與預(yù)期值相符;對重組載體測序，測序結(jié)果與優(yōu)化后的基因堿基序列完全一致，編碼的氨基酸序列未發(fā)生突變;SDS-PAGE 和 Western
江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2020年1期2020-03-27
- 豬源IKKγ在原核和真核表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)及其多克隆抗體制備
15）中克隆原核表達(dá)的IKKγ基因功能片段（561 bp），與原核表達(dá)載體pET-32a（+）構(gòu)建原核重組質(zhì)粒pET-IKKγ，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞后進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)的融合蛋白經(jīng)純化和濃縮后，免疫小鼠制備豬源IKKγ多克隆抗體。同時克隆IKKγ基因全長序列（1356 bp），與真核表達(dá)載體pCMV-HA構(gòu)建真核重組質(zhì)粒pCMV-HA-IKKγ，分別轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞和PK-15細(xì)胞，檢測融合蛋白表達(dá)情況?！窘Y(jié)果】以原核重組質(zhì)粒p
南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2020年12期2020-03-24
- 松材線蟲效應(yīng)蛋白Bx-FAR-1的原核表達(dá)與活性測定
的片段連接至原核表達(dá)載體pET-32a（+）。通過原核表達(dá)系統(tǒng)誘導(dǎo)并純化獲得大量效應(yīng)蛋白Bx-FAR-1，利用SDS-聚丙烯酰氨凝膠電泳（SDS-PAGE）和Western blotting對純化獲得的蛋白進(jìn)行鑒定，同時通過本氏煙瞬時表達(dá)系統(tǒng)驗(yàn)證蛋白活性?！窘Y(jié)果】從松材線蟲cDNA中成功擴(kuò)增出Bx-FAR-1基因（BXY_1685000.1）;通過同源重組成功獲得重組表達(dá)載體pET32a-BxFAR，并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞。當(dāng)誘導(dǎo)條件為15 ℃
南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2020年11期2020-02-22
- 番木瓜干旱脅迫相關(guān)CpDHN基因的克隆與原核表達(dá)
CpDHN的原核表達(dá)載體，SDS-PAGE分析顯示，該蛋白在大腸桿菌中可高效表達(dá)。這些結(jié)果為下一步的功能鑒定奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：番木瓜;脫水素;基因克隆;表達(dá)分析;原核表達(dá)中圖分類號：S59;S813.3? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：AAbstract： Based on de novo assembled transcript sequences， a 425-bp cDNA of CpDHN， which includes the complete c
熱帶作物學(xué)報(bào) 2020年12期2020-02-22
- 鴿avUCP基因克隆、原核表達(dá)與多抗制備
守序列，基于原核表達(dá)系統(tǒng)，構(gòu)建了pET32a-avUCP原核表達(dá)載體，成功表達(dá)了鴿avUCP重組融合蛋白，經(jīng)Ni2+親和層析法純化重組蛋白，SDS-PAGE結(jié)果顯示，所得到的目標(biāo)蛋白分子量與預(yù)測值一致，表明純化得到了高純度目標(biāo)蛋白。以目標(biāo)蛋白為抗原免疫新西蘭大白兔，5免后制備抗血清，ELISA檢測結(jié)果顯示效價(jià)為1∶51200。Western blot檢測結(jié)果表明，該抗體不僅可以免疫結(jié)合重組avUCP蛋白，而且與鴿（Columba）、畫眉（Garrulax
安徽農(nóng)學(xué)通報(bào) 2020年23期2020-01-03
- 辣椒疫霉菌葡聚糖酶抑制蛋白的原核表達(dá)、純化及結(jié)晶
（GIP）;原核表達(dá);純化;結(jié)晶中圖分類號：S432.4+4：Q78 文獻(xiàn)標(biāo)識號：A 文章編號：1001-4942（2019）10-0111-06Prokaryotic Expression， Purification and Crystallization of GlucanaseInhibitor Protein （GIP） from Phytophthora capsicaWang Huizheng， Lan Yubin（College of Agr
山東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年10期2019-12-09
- 單核細(xì)胞增生李斯特菌新型內(nèi)化素lmo0549的分子特征及其表達(dá)
;分子特征;原核表達(dá)中圖分類號：S852.61?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2019）18-0199-05收稿日期：2018-05-21基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金（編號：31360596、30960274）;國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（編號：2016YFD0500900）;烏魯木齊市科技局渝烏科技合作項(xiàng)目（編號：Y161220001）;新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)中青年科技創(chuàng)新領(lǐng)軍人才計(jì)劃（編號：2016BC001）。作者簡介：王立霞（1992—），女，甘肅隴
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年18期2019-11-28
- 牛傳染性鼻氣管炎病毒部分gB蛋白的原核表達(dá)及抗原性分析
gB基因進(jìn)行原核表達(dá)，并對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行抗原性分析，利用筆者所在實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建好的gB-BL21重組陽性菌落，進(jìn)行異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)表達(dá)，并對培養(yǎng)及誘導(dǎo)表達(dá)條件（IPTG最佳濃度、作用時間）等影響表達(dá)的因素進(jìn)行優(yōu)化，然后將表達(dá)的gB重組蛋白進(jìn)行親和層析純化。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）結(jié)果表明，gB蛋白在大腸桿菌中高效表達(dá)，表達(dá)蛋白的相對分子量約為32.4 ku，與預(yù)期的蛋白大小一致。經(jīng)BCA（聚氰基丙烯酸正丁酯）蛋白
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年17期2019-11-13
- 豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體間接ELISA檢測方法的建立
7基因，構(gòu)建原核表達(dá)載體pET28a-Nsp7，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞，并誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá)。利用親和層析純化重組蛋白，Western Blot鑒定表達(dá)產(chǎn)物。將純化后的重組蛋白按不同濃度包被酶標(biāo)板，通過方陣滴定法確定最佳抗原包被濃度及血清稀釋度，并對其條件進(jìn)行優(yōu)化，最終建立檢測PRRSV Nsp7抗體的間接酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）方法。結(jié)果表明，試驗(yàn)表達(dá)了重組Nsp7
國外畜牧學(xué)·豬與禽 2019年8期2019-11-11
- 豬IgG1-Fc基因的克隆、原核表達(dá)及表達(dá)條件優(yōu)化
E3）中進(jìn)行原核表達(dá)，然后通過優(yōu)化異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)濃度、菌體培養(yǎng)溫度及菌體培養(yǎng)時間，實(shí)現(xiàn)pIgG1-Fc重組蛋白的高效表達(dá)。結(jié)果表明，成功克隆了pIgG1-Fc的基因666 bp，共編碼222個氨基酸;重組原核表達(dá)質(zhì)粒pET30a（+）-pIgG1-Fc經(jīng)過酶切和測序證明構(gòu)建正確，重組質(zhì)粒在大腸桿菌BL21（DE3）中能夠表達(dá)，表達(dá)的融合蛋白分子量約為36 ku。其最佳表達(dá)條件如下：在25 ℃條件下加入終濃度為1 mmol/L的IPTG誘
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年15期2019-10-18
- 小反芻獸疫病毒間接化學(xué)發(fā)光抗體檢測方法的建立與優(yōu)化
摘要：構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-N，經(jīng)原核表達(dá)純化獲得小反芻獸疫病毒N蛋白。將純化的小反芻獸疫病毒N蛋白與對應(yīng)的酶標(biāo)二抗配對，通過對各個反應(yīng)條件的優(yōu)化建立了間接化學(xué)發(fā)光抗體檢測方法。通過對血清樣本的檢測，對該方法的敏感性、特異性、重復(fù)性、符合率進(jìn)行了評價(jià)。試驗(yàn)結(jié)果顯示：N蛋白最適包被濃度為0.5 μg/mL，最適包被條件為4℃ 24 h;酶標(biāo)二抗最適工作濃度為1∶2000。特異性試驗(yàn)證明，該方法與羊常見病毒的抗體陽性血清沒有交叉反應(yīng)。通過檢測大量小
現(xiàn)代畜牧科技 2019年10期2019-10-17
- 羊口瘡病毒127基因的克隆表達(dá)及亞細(xì)胞定位分析
27基因進(jìn)行原核表達(dá)及亞細(xì)胞定位，本試驗(yàn)采用PCR方法擴(kuò)增出ORFV127基因，成功構(gòu)建原核表達(dá)重組質(zhì)粒pGEX-6p-1—ORFV127和真核重組質(zhì)粒pECFP-N1- ORFV127。將原核表達(dá)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸埃希氏菌中表達(dá)，并進(jìn)行純化和鑒定。以純化的蛋白質(zhì)免疫BALB/e雌鼠制備多克隆抗體，利用Western-blot技術(shù)鑒定其反應(yīng)原性。利用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將重組質(zhì)粒pEGFP-N1-ORFV/27轉(zhuǎn)染至Vero細(xì)胞，通過倒置熒光顯微鏡觀察其在細(xì)胞中的
江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2019年3期2019-09-10
- 擬南芥細(xì)胞周期基因AtCDC5的功能研究及抗體制備
腸桿菌中進(jìn)行原核表達(dá)和純化，免疫家兔獲得針對AtCDC5的多克隆特異性抗體，從表型、細(xì)胞和蛋白質(zhì)水平研究AtCDC5基因的功能。結(jié)果表明，GK_278809的主根因發(fā)育受到抑制而生長速度緩慢;AtCDC5-GFP融合蛋白主要定位于細(xì)胞核中：經(jīng)過分離得到的AtCDC5蛋白抗血清能夠有效地檢測出10ng原核表達(dá)的AtCDC51_144抗原，并在原生質(zhì)體AtCDC5過表達(dá)體系中檢測出1條分子量約為120 000的條帶，此條帶與AtCDC5-GFP大小相近。本研究
江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2019年1期2019-09-10
- 肝片吸蟲CatB4蛋白分子特征及其免疫原性分析
征分析;構(gòu)建原核表達(dá)載體pET-CatB4，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)獲得融合蛋白后進(jìn)行SDS-PAGE和Western blotting檢測分析;并以融合蛋白CatB4免疫小鼠制備多克隆抗體，利用免疫組化對融合蛋白在肝片吸蟲體內(nèi)的表達(dá)進(jìn)行定位分析?！窘Y(jié)果】肝片吸蟲CatB4基因片段為699 bp，其編碼蛋白等電點(diǎn)（pI）7.95，理論分子質(zhì)量25.89 kD，無信號肽和跨膜區(qū)，屬于非分泌性蛋白;CatB4蛋白存在10個潛在的磷酸化位點(diǎn)、2個N-糖基化位點(diǎn)和 7個N-
南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2019年1期2019-09-10
- 絲狀支原體山羊亞種特異性蛋白基因Mmc-3740的克隆表達(dá)和免疫原性分析
;特異基因;原核表達(dá);免疫原性中圖分類號：S852.62文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1008-0384（2019）10-1124-050引言【研究意義】絲狀支原體山羊亞種Mycoplasmamycoides subsp.capri，Mille是引起羊支原體性肺炎（Mycoplasmal pneumonia of sheep and goats，MPGS）的重要病原之一，此外，還可引起山羊的乳房炎、敗血病、角膜結(jié)膜炎等。MPGS以羊持續(xù)流鼻液、漸進(jìn)性消瘦為主要
福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2019年10期2019-09-10
- 鴨疫里默氏桿菌Tet（X）基因原核表達(dá)及其功能鑒定
，以大腸桿菌原核表達(dá)體系進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，利用生物信息學(xué)軟件分析原核表達(dá)蛋白的功能和特性，并采用實(shí)時熒光定量PCR檢測四環(huán)素和多西環(huán)素對鴨疫里默氏桿菌Tet（X）基因的調(diào)控作用?！窘Y(jié)果】從鴨疫里默氏桿菌基因組擴(kuò)增獲得的Tet（X）基因編碼框全長1167 bp，編碼388個氨基酸，其編碼蛋白分子量約42.53 kD，理論等電點(diǎn)（pI）為10.073，與AS87_09615（Yb2）、RIA_0369（YA-GD）、RAYM_08235（RA-YM）、G148_1
南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2019年4期2019-09-10
- 桂花萜烯合酶（TPS）的生物信息學(xué)與原核表達(dá)分析
及其結(jié)構(gòu)，在原核表達(dá)系統(tǒng)中進(jìn)行4個TPS蛋白的體外表達(dá)，并對可溶性的TPS4重組蛋白進(jìn)行了體外酶反應(yīng)功能分析。結(jié)果表明：（1）4個TPS蛋白的理化性質(zhì)差異較小，但僅有TPS4蛋白定位于其他靶向，不含信號肽，延伸鏈的比例較低，在靠近氨基端的區(qū)域內(nèi)不含延伸鏈。（2）4個TPS蛋白在原核系統(tǒng)中均可成功表達(dá)，但僅有TPS4獲得了可溶性重組蛋白。（3）將純化的TPS4重組蛋白分別與GPP、NDP和FPP進(jìn)行反應(yīng)，均只檢測到一種產(chǎn)物，分別為反式-β-羅勒烯、β-水芹烯
廣西植物 2019年5期2019-09-10
- 尼羅羅非魚PPARδ的原核表達(dá)及其多抗制備和純化
，將其克隆至原核表達(dá)載體pET-B2m中，構(gòu)建重組表達(dá)載體;重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)人大腸桿菌B21并用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，用SDS-PAGE鑒定表達(dá)產(chǎn)物。用鎳柱純化重組蛋白后免疫日本大耳兔制備多克隆抗體，用間接ELISA技術(shù)檢測抗體效價(jià)，WesternBlot鑒定抗體的特異性。[結(jié)果]成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET-B2m-PPAR8，實(shí)現(xiàn)了重組蛋白的原核表達(dá)和純化，重組蛋白以包涵體蛋白和可溶性蛋白2種形式存在，分子量約為90kD;制備的多克隆抗體效價(jià)為1：20480
福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2019年9期2019-09-10
- 集胞藻Synechocystis sp. PCC 6803 slr1501的克隆及原核表達(dá)分析
lr1501原核表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21（DE3）進(jìn)行分析。經(jīng)1 mmol/L IPTG誘導(dǎo)2 h后Slr1501蛋白成功表達(dá)，表達(dá)量隨誘導(dǎo)時間的延長而增加，且主要以包涵體形式表達(dá)。Western blot檢測結(jié)果顯示Slr1501重組蛋白特異性表達(dá)。本試驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步研究該基因的功能奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：集胞藻6803; 乙?；D(zhuǎn)移酶; slr1501; 原核表達(dá); 基因功能中圖分類號：S555+.6：Q785文獻(xiàn)標(biāo)識號：A文章編號：1001-4
山東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年7期2019-09-03
- 解淀粉芽孢桿菌草酸脫羧酶基因的克隆、原核表達(dá)與活力測定
對該基因進(jìn)行原核表達(dá)。通過PCR技術(shù)克隆了淀粉芽孢桿菌C（10）的草酸脫羧酶基因，構(gòu)建了原核生物表達(dá)載體pET28a-Baoxdc，對其進(jìn)行表達(dá)與純化。結(jié)果表明，擴(kuò)增所獲解淀粉芽孢桿菌C（10）的草酸脫羧酶全基因序列全長為1 161 bp，在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)，添加誘導(dǎo)劑IPTG、MnCl2至終濃度分別為0.6、6 mmol/L，誘導(dǎo)4 h時的酶活力和比活力最高，分別為3.793 2 U/mL和3.145 3 U/mg。關(guān)鍵詞：解淀粉芽孢桿菌;草酸脫羧酶;
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年12期2019-08-21
- 毛白楊木葡聚糖內(nèi)轉(zhuǎn)糖苷酶/水解酶PtoXTH35原核可溶性表達(dá)方法研究
.1a等5種原核表達(dá)載體，經(jīng)雙酶切和測序驗(yàn)證后轉(zhuǎn)化至BL21（DE3）感受態(tài)，使用終濃度為0.4 mmol/L的異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)其表達(dá)目的蛋白。經(jīng)SDS-PAGE檢測，結(jié)果表明5種載體均可表達(dá)目的蛋白，pET28a、pET32a、pGEX-4t-1等3種載體所表達(dá)蛋白均以包涵體的形式存在，而pMAL-c5e和pET 43.1a載體攜帶蛋白表達(dá)量高并且所表達(dá)蛋白50%為可溶性蛋白，實(shí)現(xiàn)了毛白楊PtoXTH35在原核表達(dá)系統(tǒng)中的
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年8期2019-08-20
- 新型免疫分子TRIM23參與斑馬魚抗嗜水氣單胞菌免疫應(yīng)答
序列，將其與原核表達(dá)載體pGEX-4T-1連接并轉(zhuǎn)化至E.coli Rosetta感受態(tài)細(xì)胞，用異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)表達(dá)，利用谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶（GST）蛋白純化介質(zhì)純化目的蛋白后，將其與嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）孵育，檢測抑菌活性。結(jié)果顯示，重組表達(dá)載體pGEX-TRIM23在宿主菌Rosetta中表達(dá)出約91 ku的重組蛋白，且蛋白部分以可溶形式存在于上清中，經(jīng)體外抑菌試驗(yàn)檢測發(fā)現(xiàn)，TRIM23蛋白能夠抑制嗜
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年4期2019-08-10
- 甘蔗花葉病毒輔助成分一蛋白酶基因原核表達(dá)及抗血清制備
，酶切后連接原核表達(dá)載體pEHISTEV，得到重組質(zhì)粒pE-HISTEV - SCMV - HC - Pro。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌菌株Rosetta，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后，表達(dá)出57 kD的融合蛋白。切膠回收融合蛋白，多點(diǎn)注射法免疫新西蘭長耳兔，制備SCMV HC - Pro抗血清。間接ELISA結(jié)果表明，該血清效價(jià)為1：8 192。感染DWKI的玉米葉片病汁液稀釋128倍時，該血清仍然能夠有效檢測出HC - Pro。Westem - blot檢測結(jié)果表明，
山東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年3期2019-08-03
- 北柴胡轉(zhuǎn)錄因子BcAP2-13的原核表達(dá)和多克隆抗體制備
6×His的原核表達(dá)載體，構(gòu)建了調(diào)控北柴胡皂苷生物合成的轉(zhuǎn)錄因子基因BcAP2-13的原核表達(dá)載體p13-SUMO-His6。載體熱激轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞BL21（DE3）后，用異丙 基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactoside，IPTG）誘導(dǎo)培養(yǎng)，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分析表明，28 ℃和37 ℃不同溫度誘導(dǎo)條件下均得到了融合蛋白13-SUMO-His 6。以Ni-NTA柱純化的融
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年10期2019-07-08