羅氟司特對(duì)壓力超負(fù)荷誘導(dǎo)的小鼠心肌重構(gòu)的影響及其機(jī)制

杜高波，唐其柱

(武漢大學(xué)人民醫(yī)院心內(nèi)科，武漢大學(xué)心血管病研究所，心血管病湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，武漢430060)

心肌重構(gòu)是指在各種病理生理因素刺激下，心臟結(jié)構(gòu)、形態(tài)和功能發(fā)生的適應(yīng)性代償改變的現(xiàn)象，是心力衰竭發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的重要病理改變[1]。心肌重構(gòu)主要包括結(jié)構(gòu)重構(gòu)和電重構(gòu)，以心肌間質(zhì)纖維化、心肌細(xì)胞肥大、心室順應(yīng)性降低和心室電傳導(dǎo)異常為主要特征，可直接影響心臟功能甚至導(dǎo)致死亡[2,3]。因此，以心肌重構(gòu)為靶點(diǎn)防治心力衰竭具有重要意義和前景。羅氟司特(roflumilast，RM)是第1個(gè)被美國(guó)食品和藥物管理局批準(zhǔn)上市的磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4，PDF4)抑制劑，主要用于慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)的治療，具有良好的抗炎特性及器官保護(hù)作用[4]。在細(xì)菌誘導(dǎo)的COPD小鼠模型中，RM能夠顯著抑制肺內(nèi)白細(xì)胞浸潤(rùn)、支氣管壁重構(gòu)及肺氣腫[5]。此外，RM還能夠降低COPD患者血清中促炎癥細(xì)胞因子的水平。最近的一項(xiàng)研究表明，RM可通過(guò)抑制p38絲裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)信號(hào)通路改善膿毒癥肝損傷，提高小鼠生存率[6]。而在心臟中，p38 MAPK信號(hào)通路及炎癥反應(yīng)的激活是導(dǎo)致心肌重構(gòu)的重要機(jī)制[7,8]。基于此，我們認(rèn)為RM可能通過(guò)調(diào)節(jié)小鼠心肌中p38 MAPK信號(hào)及炎癥反應(yīng)改善壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的心肌重構(gòu)。本研究通過(guò)主動(dòng)脈縮窄術(shù)(aortic banding，AB)構(gòu)建小鼠心肌重構(gòu)模型，觀察RM對(duì)小鼠心肌重構(gòu)及心功能的影響，同時(shí)探討了RM影響小鼠心肌重構(gòu)的潛在機(jī)制，旨在為今后心肌重構(gòu)及心力衰竭的藥物治療提供一定的參考依據(jù)。

國(guó)家為自貿(mào)區(qū)的建立出臺(tái)了一系列政策，也為自貿(mào)區(qū)知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)制度的構(gòu)建提供了便利。國(guó)務(wù)院于2013年在《中共中央關(guān)于全面深化改革若干重大問(wèn)題的決定》中指出，國(guó)家應(yīng)通過(guò)更為成熟的手段，加強(qiáng)和運(yùn)用健全的知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)制度，完善技術(shù)創(chuàng)新的激勵(lì)機(jī)制，并努力探索建立健全專門知識(shí)產(chǎn)權(quán)法院；國(guó)家對(duì)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的保護(hù)日益重視，在知識(shí)產(chǎn)權(quán)核心法律體系中，法定賠償額的提高以及相關(guān)的頂層制度設(shè)計(jì)與出臺(tái)均反映了中央對(duì)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的重視程度。重慶自貿(mào)區(qū)作為我國(guó)西部自貿(mào)區(qū)的試驗(yàn)基地，其地位顯得尤為重要，因?yàn)橄刃性囼?yàn)基地的成功與知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)有著密切的關(guān)聯(lián)，同時(shí)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的保護(hù)也為以后的自由貿(mào)易區(qū)提供著重要借鑒。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

RM購(gòu)自于美國(guó)Sigma公司，純度≥98%；CD45和CD68抗體購(gòu)自于美國(guó)Abcam公司；總p38(total-p38，T-p38)、磷酸化的p38(phosphorylated-p38，P-p38)及GAPDH抗體均購(gòu)自于美國(guó)Cell Signaling Technology公司；免疫組織化學(xué)DAB試劑盒購(gòu)于美國(guó)Gene-tech公司；羊抗兔IgG抗體購(gòu)自于美國(guó)LICOR公司。

如SiO2/Fe3O4-C顆粒和Fe3O4-C磁性空心微球的磁滯回線，如圖2(d)所示，2種樣品均表現(xiàn)出典型的超順磁性。SiO2/Fe3O4-C顆粒的磁飽和強(qiáng)度為17.1 emu/g，除去中間的硅膠核心后，最終的Fe3O4-C空心微球的磁飽和強(qiáng)度上升至42.5 emu/g，完全滿足磁分離的需要。圖2(d)內(nèi)部的小圖顯示的是Fe3O4-C空心微球在水溶液中的分散情況(左)和磁分離效果(右)，顯示了材料在無(wú)外加磁場(chǎng)時(shí)良好的分散性和施加外加磁場(chǎng)時(shí)良好的磁響應(yīng)性，這對(duì)于材料的實(shí)際應(yīng)用非常重要[10]。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及模型建立

雄性C57/B6小鼠(8～10周)，體質(zhì)量 255～320 g，購(gòu)自于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所(動(dòng)物合格證號(hào)：11401300036042)，飼養(yǎng)于武漢大學(xué)心血管病研究所動(dòng)物中心。采用隨機(jī)數(shù)表法隨機(jī)將40只小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham組)，AB組，AB+RM(1mg/kg)組及AB+RM(3 mg/kg)組，每組10只。AB組，AB+RM(1 mg/kg)組及AB+RM(3 mg/kg)組小鼠均接受AB手術(shù)處理。超聲心動(dòng)圖檢測(cè)術(shù)后6周是否成功建立壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的心肌重構(gòu)模型。AB+RM(1 mg/kg)組及AB+RM(3 mg/kg)組小鼠于AB術(shù)后2 d開(kāi)始，每天給予1及3 mg/kg的RM灌胃處理，持續(xù)6周。本研究中所有涉及動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)均通過(guò)武漢大學(xué)動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.3 AB組小鼠手術(shù)方法

首先將各組石蠟切片于60 ℃溫箱中脫蠟30 min，采用檸檬酸鹽高壓法進(jìn)行抗原修復(fù)；隨后將3%雙氧水覆蓋于心肌組織上孵育15 min， 8%羊血清封閉30 min，一抗CD45和CD68(1∶200，磷酸緩沖液稀釋)滴加并完全覆蓋于心肌組織孵育，4 ℃過(guò)夜。次日，各組切片復(fù)溫后滴加二抗B液，室溫孵育30 min，沖洗后滴加顯色劑二氨基聯(lián)苯胺(Diaminobenzine, DAB)工作液，并在光鏡下嚴(yán)格控制顯色時(shí)間。最后，蘇木素復(fù)染各組切片，梯度乙醇脫水后封片。隨機(jī)選取10張心肌組織不重復(fù)的區(qū)域觀察，記錄視野中白細(xì)胞及巨噬細(xì)胞數(shù)量。

目前，高中生物一線教師在培育學(xué)生生命觀念的教學(xué)過(guò)程中存在一定的問(wèn)題。例如，教師對(duì)生命觀念的內(nèi)涵缺少深刻的理解、對(duì)生命觀念在生物學(xué)中相應(yīng)的錨定點(diǎn)缺少系統(tǒng)的把握、對(duì)三維目標(biāo)和核心素養(yǎng)教學(xué)目標(biāo)的轉(zhuǎn)化缺少足夠的認(rèn)識(shí)、對(duì)培育學(xué)生生命觀念的系統(tǒng)教學(xué)方案缺少應(yīng)有的重視等。下面重點(diǎn)闡述生命觀念及其培育策略。

1.4 各組小鼠心臟形態(tài)學(xué)參數(shù)的收集

各組小鼠通過(guò)吸入1.5%異氟烷麻醉后，剔去心前區(qū)毛發(fā)，固定于保溫平板上，采用MyLab 30CV多普勒超聲診斷儀(意大利Biosound Esaote公司，頻率10 MHz)檢測(cè)。在靠近乳頭肌水平的胸骨旁長(zhǎng)軸和胸骨旁短軸上以二維模式成像后，記錄一個(gè)二維引導(dǎo)的穿過(guò)左心室前壁和后壁M型超聲，隨后收集并計(jì)算心臟的形態(tài)學(xué)參數(shù)，心率(heart rate，HR)、左室短軸縮短率(left ventricular fraction shortening，LVFS)、左室射血分?jǐn)?shù)(left ventricular ejection fraction，LVEF)、左室收縮末期內(nèi)徑(left ventricular end-systolic diameter，LVESD)及左室舒張末期內(nèi)徑(left ventricular end-diastolic diameter，LVEDD)。各參數(shù)最終取值為3個(gè)連續(xù)心動(dòng)周期的平均值。

1.5 心肌肥厚與纖維化的形態(tài)學(xué)檢測(cè)

1.6.1 RNA的提取 各組取30 mg心肌組織剪碎并加入TRIzol，充分研磨后離心取上清液，加入200 ml三氯甲烷，靜置5 min。12 000 g離心15 min(4 ℃)，取上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管，加入等體積異丙醇，靜置10 min。再次12 000 g離心30 min(4 ℃)，得到白色沉淀。75%乙醇進(jìn)行漂洗，繼續(xù)7 500 g離心5 min(4 ℃)。利用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)所獲RNA的濃度及純度，當(dāng)A260/A280=1.8～2.0時(shí)，代表該樣品達(dá)標(biāo)可用。

1.6 qPCR檢測(cè)肥厚、纖維化及炎癥相關(guān)基因

通過(guò)頸椎脫臼法處死各組小鼠后，獲取小鼠心臟，用吸水紙擦干心臟殘余液體，并稱重(mg)，獲得心重/體重(heart weight/body weight，HW/BW)值。同時(shí)取出小鼠下肢脛骨并測(cè)量其長(zhǎng)度(cm)，計(jì)算心重/脛骨長(zhǎng)(heart weight/ tibia length，HW/TL)。隨后，迅速將心臟置于有10%甲醛溶液的容器中固定，隨后進(jìn)行石蠟包埋并制成厚度為5 μm的切片。HE染色評(píng)價(jià)心肌組織形態(tài)結(jié)構(gòu)，天狼猩紅染色評(píng)價(jià)心肌組織間質(zhì)及血管周纖維化狀況。用Image-ProPlus 6.0軟件分析計(jì)算各組心肌細(xì)胞橫截面積及心肌組織中膠原百分比。

為了更好地落實(shí)新型職業(yè)農(nóng)民培育工程，需要圍繞市場(chǎng)需求，合理地設(shè)計(jì)新型職業(yè)農(nóng)民培育工程信息管理系統(tǒng)。同時(shí)，結(jié)合實(shí)際確定新型職業(yè)農(nóng)民培訓(xùn)工程實(shí)操計(jì)劃，旨在提高新型職業(yè)農(nóng)民的培育質(zhì)量。

超聲心動(dòng)圖數(shù)據(jù)顯示(圖1A)，與Sham組相比，AB組小鼠心室壁厚度明顯增加；與AB組相比，AB+RM(1 mg/kg)組及AB+RM(3 mg/kg)組小鼠心室壁厚度明顯減少；進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，4組小鼠HR無(wú)明顯差異(P>0.05)，表明心功能各指標(biāo)具有可比性(圖1B)。與Sham組相比，AB組小鼠EF和FS百分?jǐn)?shù)均顯著降低(均P<0.05)，而LVESD及LVEDD則顯著升高(均P<0.05)，表明AB手術(shù)成功誘導(dǎo)了小鼠心功能不全；與AB組小鼠相比，AB+RM(1 mg/kg)組及AB+RM(3 mg/kg)組小鼠EF及FS顯著升高(均P<0.05)，而LVESD及LVEDD則顯著降低(均P<0.05)，提示RM能夠改善AB誘導(dǎo)的小鼠心功能不全(圖1C～F)。

1.6.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 將步驟1.6.2中獲取的cDNA加60 μl DEPC水稀釋后，配置反應(yīng)體系。具體如下：(1)SyBr Green 10 μl；(2)DEPC水：8 μl；(3)正向引物及反向引物各0.5 μl。最終以GAPDH作為內(nèi)參基因進(jìn)行校正。各待測(cè)基因引物詳見(jiàn)表1。

表1 qPCR引物序列Table 1 Primers used in qPCR

1.7 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)CD45和CD68

經(jīng)腹腔注射的方式給予小鼠3%異戊巴比妥麻醉，同時(shí)經(jīng)口給予氣管插管輔助呼吸。在小鼠胸部2～3肋間隙水平方向切開(kāi)皮膚，仔細(xì)分離降主動(dòng)脈，將26號(hào)針置于主動(dòng)脈旁并結(jié)扎。結(jié)扎后迅速拔出針頭，逐層縫合小鼠肌肉及皮膚。

1.8 蛋白免疫印跡法檢測(cè)

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

取約30 g的心肌組織用剪刀盡量剪碎，隨后加入放射免疫沉淀試驗(yàn)裂解液，于研磨儀中充分粉碎。進(jìn)一步超聲(400 W，5 kHz)裂解后離心取上清液，二喹啉甲酸法測(cè)定蛋白濃度后，將各組蛋白液定容至等濃度。將所獲蛋白用12%十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel，SDS-PAGE)電泳分離，隨后轉(zhuǎn)入聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride，PVDF)膜上，加入磷酸緩沖液稀釋的P-p38(1∶500)，T-p38(1∶5000)及GAPDH(1∶1000)抗體，4 ℃孵育過(guò)夜，次日將PVDF膜置于羊抗兔二抗中避光孵育60 min，利用Odysse掃描儀(美國(guó)LI-COR)對(duì)各組蛋白條帶掃描并定量，最終以GAPDH作為內(nèi)參蛋白進(jìn)行校正。

2 結(jié)果

2.1 4組小鼠心功能的比較

1.6.2 AMV逆轉(zhuǎn)錄 取0.65 ml EP管，加入4.5 μl DEPC水，1 μl引物及1 μl模板RNA。離心并沸水浴后加入0.5 μl dNTP，2 μl 5× Buffer及1μl AMV逆轉(zhuǎn)錄酶，離心后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，獲取cDNA。

基于先前的工作[25]，本文認(rèn)為,判斷彈體是否進(jìn)入銷蝕侵徹狀態(tài)的主要依據(jù)為長(zhǎng)桿彈頭部是否形成了穩(wěn)定的蘑菇頭。由式(11)和式(12)可以看出，長(zhǎng)桿彈形成穩(wěn)定蘑菇頭，且銷蝕碎片拋射出的條件為

圖1 各組小鼠心功能狀況Figure 1 Heart function of mice among four groupsAB: aortic banding; RM: roflumilast; HR: heart rate; LVEF: left ventricular ejection fraction; LVFS: left ventricular fraction shortening; LVESD: left ventricular end-systolic diameter; LVEDD： left ventricular end-diastolic diameter. Compared with sham group,*P<0.05; compared with AB group, #P<0.05.

2.2 4組小鼠心肌肥厚相關(guān)指標(biāo)的比較

HE染色結(jié)果顯示，與Sham組相比，AB組小鼠心臟大體橫截面積及心肌細(xì)胞橫截面積均明顯增加，HW/BW及HW/TL值明顯上升(均P<0.05)；與AB組相比，AB+RM(1 mg/kg)組及AB+RM(3 mg/kg)組小鼠心臟大體橫截面積及心肌細(xì)胞橫截面積顯著降低，同時(shí)HW/BW及HW/TL值也明顯下降(均P<0.05；圖2A～D)。進(jìn)一步，我們分析了4組小鼠心肌肥厚相關(guān)標(biāo)志基因[心鈉素(atriopeptin，ANP)、腦利鈉肽(brainnatriureticpeptide，BNP)及β-MHC]的mRNA表達(dá)水平，結(jié)果顯示1和3 mg/kg的RM干預(yù)能夠顯著抑制AB誘導(dǎo)的小鼠心肌ANP、BNP及β-MHC的mRNA表達(dá)上調(diào)(均P<0.05；圖2E～G)。

圖2 4組小鼠心肌肥厚相關(guān)指標(biāo)的比較Figure 2 Comparison of hypertrophic markers of mice among four groupsAB: aortic banding; RM: roflumilast; HW: heart weight; BW: body weight；TL: tibia length; ANP: atriopeptin; BNP: brain natriuretic peptide. Compared with sham group, *P<0.05; compared with AB group, #P<0.05.

2.3 4組小鼠心肌纖維化相關(guān)指標(biāo)的比較

免疫組織化學(xué)染色結(jié)果提示，與Sham組相比，AB組小鼠心肌組織中CD45及CD68陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯增多，同時(shí)增加促炎癥細(xì)胞因子白細(xì)胞介素(interleukin-6,IL-6)及腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)的表達(dá)，表明AB能夠通過(guò)促進(jìn)心肌組織中白細(xì)胞及巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，激活心肌炎癥反應(yīng)(均P<0.05)；而不同劑量RM干預(yù)后均能降低心肌組織中炎癥細(xì)胞數(shù)目，抑制相關(guān)促炎癥細(xì)胞因子釋放(均P<0.05；圖4A～E)。免疫印跡結(jié)果揭示，與AB組相比，AB+RM(1 mg/kg)組及AB+RM(3 mg/kg)組小鼠心肌組織中p38蛋白磷酸化水平明顯被抑制(均P<0.05；圖4F, G)。

圖3 4組小鼠心肌纖維化相關(guān)指標(biāo)的比較Figure 3 Comparison of fibrotic markers of mice among four groupsAB: aortic banding; RM: roflumilast; Ctgf：connective tissue growth factor. Compared with sham group,*P<0.05; compared with AB group, #P<0.05.

2.4 4組小鼠心肌組織炎癥反應(yīng)及p38 MAPK的激活狀態(tài)

天狼猩紅染色結(jié)果顯示，與Sham組相比，AB組小鼠心肌間質(zhì)及血管周膠原沉積明顯增加；與AB組相比，AB+RM(1 mg/kg)組及AB+RM(3 mg/kg)組小鼠心肌血管周及間質(zhì)中膠原沉積明顯降低(均P<0.05；圖3A～C)；同時(shí)，我們分析了心肌纖維化相關(guān)標(biāo)志基因(Ctgf、fibronectin、collagen1和collagen3)的mRNA表達(dá)水平，結(jié)果顯示，與AB組相比，AB+RM(1 mg/kg)組及AB+RM(3 mg/kg)組小鼠心肌組織中Ctgf、fibronectin、collagen1和collagen3的mRNA表達(dá)水平明顯降低(均P<0.05；圖3D～G)。

圖4 4組小鼠炎癥反應(yīng)及p38 MAPK信號(hào)的激活狀況Figure 4 Inflammatory response and activation of p38 MAPK signaling pathway of mice among four groupsAB: aortic banding: RM: roflumilast; IL-6：interleukin-6；TNF-α：tumor necrosis factor-α; P-p38: phosphorylated-p38; T-p38: total-p38. Compared with sham group,*P<0.05; compared with AB group, #P<0.05.

3 討 論

心肌重構(gòu)是心臟應(yīng)對(duì)各種內(nèi)源性及外源性損傷時(shí)的一種適應(yīng)性反應(yīng)。一方面，長(zhǎng)期壓力負(fù)荷刺激下，白細(xì)胞向心臟浸潤(rùn)，與巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和心臟成纖維細(xì)胞相互作用，導(dǎo)致心肌組織中促炎和抗炎因子的平衡失調(diào)，同時(shí)促進(jìn)心臟成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)，最終導(dǎo)致心肌膠原沉積和心臟纖維化[9]；另一方面，p38 MAPK信號(hào)通路作為關(guān)鍵的胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)交匯點(diǎn)，可介導(dǎo)多條信號(hào)通路導(dǎo)致心肌細(xì)胞肥大[10]。因此，抑制心肌組織炎癥激活，阻斷p38 MAPK信號(hào)通路對(duì)干預(yù)心肌重構(gòu)、治療心力衰竭具有重要意義。本研究發(fā)現(xiàn)新型抗COPD藥物能夠顯著抑制壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的小鼠心肌肥厚及纖維化，可能與RM對(duì)心臟炎癥激活的抑制劑p38磷酸化激活有關(guān)。

左心室功能障礙和心力衰竭與促炎細(xì)胞因子、T細(xì)胞、白細(xì)胞及巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)密切相關(guān)。大量促炎癥細(xì)胞因子的累積不僅會(huì)導(dǎo)致心臟各類細(xì)胞死亡、阻斷β-腎上腺素信號(hào)、胚胎基因的激活、內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂及膠原沉積，還能夠通過(guò)激活下游的p38 MAPK信號(hào)通路、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶及核因子-κb信號(hào)促進(jìn)心肌肥厚。同時(shí)，炎癥急性期促炎癥細(xì)胞因子基因表達(dá)的增加可進(jìn)一步通過(guò)自分泌和旁分泌的方式引起“繼發(fā)性炎癥反應(yīng)”[11,12]。臨床研究表明，心力衰竭患者外周血中促炎癥細(xì)胞因子水平與心力衰竭嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[13]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，心臟特異性過(guò)表達(dá)TNF-α能誘導(dǎo)小鼠發(fā)生自發(fā)性擴(kuò)張型心肌病及心肌纖維化[14]。此外，心臟特異性過(guò)表達(dá)IL-1β能導(dǎo)致小鼠發(fā)生射血分?jǐn)?shù)保留的心肌肥厚[15]。此外，抗炎癥細(xì)胞因子IL-10能夠通過(guò)抑制STAT3依賴的核因子-κb信號(hào)明顯逆轉(zhuǎn)壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的小鼠心肌重構(gòu)[16]。上述研究提示抑制心肌炎癥激活是預(yù)防心肌重構(gòu)的重要靶點(diǎn)。

p38 MAPK隸屬于MAPK家族，與多種心血管疾病(高血壓、心肌梗死及心力衰竭等)的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，可被缺血缺氧、紫外線、高糖、高滲、脂多糖、氧化應(yīng)激及炎癥等多種損傷相關(guān)刺激激活。心肌細(xì)胞在受到上述刺激后，會(huì)產(chǎn)生大量活性氧自由基，通過(guò)進(jìn)一步激活p38 MAPK在內(nèi)的相關(guān)促肥厚信號(hào)通路，誘導(dǎo)心肌細(xì)胞c-fos大量轉(zhuǎn)錄，最終導(dǎo)致心肌細(xì)胞體積增大[7]。同時(shí)，p38 MAPK信號(hào)亦可調(diào)節(jié)心臟成纖維細(xì)胞，影響心肌纖維化。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明p38 MAPK特異性抑制劑PH797804能夠明顯提高缺氧或肺動(dòng)脈縮窄所誘導(dǎo)的小鼠右心室重構(gòu)，改善心功能。體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步揭示PH797804可抑制TGF-β誘導(dǎo)的心臟成纖維細(xì)胞膠原合成及應(yīng)力纖維形成，其機(jī)制可能與p38 MAPK對(duì)Smad2/3磷酸化及心肌素蛋白核轉(zhuǎn)位的調(diào)節(jié)有關(guān)[17]。

(3)在鈾尾礦下游農(nóng)田中，除Cd和U，其余幾種重金屬潛在生態(tài)危害單項(xiàng)系數(shù)均小于6，潛在危害性很低，并不能對(duì)當(dāng)?shù)剞r(nóng)田構(gòu)成生態(tài)威脅。Cd單項(xiàng)系數(shù)均值為206.68，潛在生態(tài)危害程度為重。其次為U，單項(xiàng)系數(shù)均值為63.18，潛在生態(tài)危害程度為中。9個(gè)樣品中有8個(gè)樣品的RI值介于150～300之間，綜合潛在生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)程度為中，一個(gè)樣品RI值超過(guò)300，綜合潛在生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)程度為重?？傮w來(lái)看，該農(nóng)田潛在生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)較高，主要是Cd和U所帶來(lái)的潛在生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)。

RM作為新型抗COPD的選擇性PDF4抑制劑，在改善COPD患者肺功能及減少急性加重頻率方面取得了良好效果。最近的研究表明，RM還能通過(guò)抑制炎癥及p38信號(hào)通路改善膿毒癥誘導(dǎo)的小鼠肝損傷[6]。此外，RM可通過(guò)下調(diào)iNOS，上調(diào)cAMP減輕潰瘍性結(jié)腸炎大鼠的炎癥反應(yīng)[18]。本研究發(fā)現(xiàn)RM可顯著改善壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的小鼠心功能不全，減輕心肌肥厚及纖維化。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，RM的抗心肌重構(gòu)作用可能與對(duì)炎癥反應(yīng)及p38磷酸化的抑制有關(guān)。研究已證實(shí)，p38 MAPK亦是介導(dǎo)心肌細(xì)胞炎癥和凋亡的重要原因之一[19]，因此本研究中RM抑制心臟炎癥是否依賴于其對(duì)p38 MAPK信號(hào)通路的阻斷還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)來(lái)闡明。

綜上，RM可通過(guò)抑制心肌組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及p39 MAPK信號(hào)激活改善壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的心肌重構(gòu)，但仍需要進(jìn)一步研究探討其具體分子靶點(diǎn)。