楊贇昀 吳虓飛 胡宇馳

(北京市藥品檢驗所,北京 102026)

逐瘀通脈膠囊為已上市獨家復(fù)方中藥品種,并已列入國家食品藥品監(jiān)督管L總局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)。其組成成分為虻蟲、水蛭、桃仁、大黃。功能主治為破血逐瘀,通經(jīng)活絡(luò),主治血瘀型眩暈證,癥見眩暈、頭痛耳鳴、舌質(zhì)暗紅、脈沉澀。

廣大臨床醫(yī)師在多年的臨床應(yīng)用中,發(fā)現(xiàn)逐瘀通脈膠囊除了上述原有功能主治之外,對腦梗死等缺血性腦血管疾病具有較好的治療作用,能夠改善患者的癥狀。

本研究以期為逐瘀通脈膠囊治療腦梗死這一新的功能提供藥效學(xué)依據(jù),并為新適應(yīng)癥在臨床的合L應(yīng)用提供參考。

1 材料和方法

1.1 動物

SD大鼠,SPF/VAF級,82只,體質(zhì)量(189.54±9.27)g,雌雄各半,購于北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司,實驗動物生產(chǎn)許可證號:SCXK(京)2016-0011,質(zhì)量合格證明號:0261504。

1.2 藥物與試劑

逐瘀通脈膠囊(批號:20100702),由哈藥集團(tuán)三精千鶴制藥有限公司提供;維腦路通片(批號:111204),購自北京誠濟(jì)制藥有限公司和亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司;步長腦心通膠囊(批號:111252),購自陜西步長制藥有限公司。

戊巴比妥鈉(批號:F20070124),Sigma公司生產(chǎn),中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司分裝。

1.3 劑量設(shè)計

逐瘀通脈膠囊,口服,2粒/次,3次/d,4周為一療程,人(70 kg)總用量為1.2 g/d,相當(dāng)于17.1 mg/kg,按照體表面積折算等效劑量,大鼠約為:108 mg/kg。因此,設(shè)計可考慮大鼠藥效試驗高劑量為200 mg/kg,中劑量為120 mg/kg,低劑量為50 mg/kg。

維腦路通片,口服,2～3片/次,3次/d,人(70 kg)總用量為540 mg/d,折合成大鼠的等效劑量為54 mg/kg。參照臨床前研究文獻(xiàn)用量,該藥的大鼠口服劑量約為100 mg/kg。

步長腦心通膠囊,口服,2～4粒/次,3次/d,人(70 kg)總用量為4 800 mg/d,折合成大鼠的等效劑量約為435 mg/kg。參照臨床前研究文獻(xiàn)用量,該藥的大鼠口服劑量約為800 mg/kg。

配制方法:所有藥物蒸餾水配制。

1.4 造模

雄性SD大鼠82只,取其中合格72只,起始體質(zhì)量(189.54±9.27)g,給藥時體質(zhì)量(256.55±38.97)g。參考Torre等[1-2]文獻(xiàn)方法,永久性結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動脈建立大鼠慢性低灌注性腦缺血損傷模型。大鼠用2%戊巴比妥鈉3 m L/kg腹腔內(nèi)注射麻醉,仰臥位固定,頸部去毛、消毒,頸部正中切口,分離雙側(cè)頸總動脈,分別結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈的遠(yuǎn)近端,并從中間剪斷,以確保阻斷頸總動脈血流。另選取剩余10只作為假手術(shù)組,除不結(jié)扎、不剪斷雙側(cè)頸總動脈外,其余過程與手術(shù)組相同,各組動物手術(shù)創(chuàng)口均用青霉素溶液涂抹抗菌。各組大鼠同條件飼養(yǎng)。

1.5 分組給藥

各組均于造模15 d后,挑選取狀態(tài)較好,手術(shù)創(chuàng)口愈合較好的動物分組給藥,分為6組:模型組、陽性對照Ⅰ組(維腦路通片100 mg/kg)、陽性對照Ⅱ組(步長腦心通膠囊800 mg/kg)、逐瘀通脈膠囊200、100、50 mg/kg劑量組,10只/組,5只/籠,自由攝食與飲水,連續(xù)給藥14 d。

1.6 指標(biāo)檢測

1.6.1 Morris水迷宮行為學(xué)檢測:給藥前進(jìn)行訓(xùn)練,給藥14 d后利用Morris水迷宮對各組動物學(xué)習(xí)記憶能力進(jìn)行檢測,測試內(nèi)容包括:空間探索實驗[3]。數(shù)據(jù)由水迷宮統(tǒng)計軟件獲得,采用圖像處L算法,實時跟蹤大鼠運動軌跡,得出大鼠在設(shè)定區(qū)域內(nèi)經(jīng)過的路徑和所花的時間以及其他相關(guān)數(shù)據(jù)。

空間探索指標(biāo):經(jīng)過平臺次數(shù)、經(jīng)過有效區(qū)次數(shù)、總路程、平臺停留時間、平臺游經(jīng)距離、有效區(qū)停留時間、有效區(qū)游經(jīng)距離。

本工程粗集料采用懷集縣東八里碎石，其各項技術(shù)指標(biāo)檢驗結(jié)果如表2所示，均滿足規(guī)范要求Ⅱ級，部分指標(biāo)已滿足Ⅰ級要求。

1.6.2 腦濕質(zhì)量、腦干質(zhì)量、腦含水量、腦系數(shù):水迷宮檢測結(jié)束后麻醉動物,將動物斷頭取腦,迅速稱量其質(zhì)量,后置于100℃烘箱內(nèi)烘烤24 h用同一天平再次稱質(zhì)量,以(濕質(zhì)量-干質(zhì)量)/濕質(zhì)量×100%即為相對含水量,腦系數(shù)=全腦質(zhì)量/體質(zhì)量×100%。

1.7 統(tǒng)計方法

所有實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析,多組比較用單因素方差分析(one-way ANOVA)。實驗結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對慢性低灌注誘發(fā)腦缺血損傷大鼠空間探索能力的影響

空間探索試驗中,第一象限仍為實驗動物入水區(qū)域,第三象限為虛擬的平臺區(qū)域,平臺已經(jīng)撤離,周圍為有效區(qū)域。動物在平臺區(qū)域停留的時間和距離、有效區(qū)停留的時間和距離越長,以及經(jīng)過平臺次數(shù)、經(jīng)過有效區(qū)次數(shù)越多,表明動物空間探索記憶能力越強(qiáng)。

表1 逐瘀通脈膠囊對慢性低灌注誘發(fā)腦缺血損傷大鼠空間探索指標(biāo)的影響Table 1 Effect of Zhuyu Tongmai capsule on the exploring activity of rats with chronic hypoperfusion of cerebral ischemia in morris water maze test

由表1可知,與假手術(shù)組比較,模型組動物在平臺區(qū)域停留的時間和距離明顯減少,在有效區(qū)停留的時間明顯減少,在有效區(qū)停留的距離顯著減少(P<0.05),經(jīng)過平臺次數(shù)顯著減少(P<0.05),在第一象限停留的時間明顯延長,在第一象限停留的距離顯著延長(P<0.05)。

與模型組比較,逐瘀通脈膠囊200 mg/kg劑量組動物在有效區(qū)停留的時間、距離和經(jīng)過平臺次數(shù)顯著增加(P<0.05),在平臺區(qū)域停留的時間和距離明顯增加,相應(yīng)的在第一象限停留的時間和距離明顯縮短,在第三象限停留的距離明顯延長。表明當(dāng)撤掉平臺后,在120 s的時間內(nèi),給藥組動物主動尋找原平臺所在位置的能力明顯高于模型組,顯示出給藥組動物的空間記憶能力及主動探索能力顯著改善。因此,認(rèn)為逐瘀通脈膠囊對慢性低灌注大鼠腦損傷導(dǎo)致空間探索能力的下降有明顯的改善作用。

同樣實驗條件下,陽性對照藥物維腦路通片組(100 mg/kg)、步長腦心通膠囊組(800 mg/kg)動物在平臺區(qū)域停留的時間和距離、在有效區(qū)停留的時間和距離、經(jīng)過平臺次數(shù)均高于模型組,但未見生物統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);在第三象限停留的距離明顯延長,但未見生物統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);維腦路通片組動物在第一象限停留的時間顯著縮短(P<0.05),步長腦心通膠囊組動物在第一象限停留的時間和距離顯著縮短(P<0.05、P<0.01)。這表明陽性對照藥物對于慢性低灌注大鼠腦損傷導(dǎo)致空間探索能力的下降有一定的改善作用,但不十分顯著。

表2 逐瘀通脈膠囊對慢性低灌性腦缺血大鼠腦組織損傷的影響Table 2 Effect of Zhuyu Tongmai Capsule on brain tissue injury of rats with chronic hypoperfusion of cerebral ischemia

2.2 對慢性低灌性腦缺血大鼠腦損傷的影響

由表2可知,與假手術(shù)組比較,模型組的腦濕質(zhì)量,腦含水量及腦系數(shù)均顯著增加(P<0.01,P<0.01,P<0.05),表明慢性低灌注導(dǎo)致大鼠腦水腫損傷,腦組織含水量顯著增加。

與模型組比較,逐瘀通脈膠囊200 mg/kg劑量組動物的腦濕質(zhì)量、腦含水量、腦系數(shù)均顯著下降(P<0.05),其他各劑量組腦濕質(zhì)量、腦含水量均有明顯的下降趨勢,但未見生物統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。這表明逐瘀通脈膠囊對大鼠慢性低灌注致腦水腫有很好的改善作用。

同樣實驗條件下,陽性對照藥物維腦路通片(100 mg/kg)、步長腦心通膠囊(800 mg/kg)與模型組比較,腦濕質(zhì)量,腦含水量及腦系數(shù)均顯著下降(P<0.05),表明陽性對照藥可改善大鼠慢性低灌注所致的腦水腫。

3 討論

上述結(jié)果顯示,動物經(jīng)過訓(xùn)練后,逐瘀通脈膠囊對慢性低灌注大鼠腦損傷導(dǎo)致空間探索能力的下降有明顯的改善作用,并明顯減輕腦缺血后的腦組織水腫現(xiàn)象。

腦梗死是缺血性卒中的總稱,包括腦血栓形成、腔隙性梗死和腦栓塞等,約占全部腦卒中類型的70%。腦梗死是由于腦組織局部供血動脈血流的突然減少或停止,造成該血管供血區(qū)的腦組織缺血、缺氧導(dǎo)致腦組織軟化、壞死,并伴有相應(yīng)部位的臨床癥狀和體征,如偏癱、失語等神經(jīng)功能缺失的癥候。腦梗死是臨床常見病、多發(fā)病,是我國發(fā)病率、死亡率和致殘率最高的疾病之一,嚴(yán)重危害中老年人的健康,且近年來已呈現(xiàn)年輕化的發(fā)病趨勢。

逐瘀通脈膠囊組方來源于張仲景所著的“四大經(jīng)典”之一的《傷寒論》中的抵當(dāng)湯,由虻蟲、水蛭、桃仁、大黃四味活血化瘀的中藥組成,方中虻蟲、水蛭為主藥,佐以桃仁、大黃協(xié)同作用[4]。現(xiàn)代藥L學(xué)研究證實,逐瘀通脈制劑具有降低血液黏度、纖維蛋白原及血脂作用,抑制血小板聚集,改變血液流變學(xué)指標(biāo),降低毛細(xì)血管通透性及腦耗氧指數(shù),擴(kuò)張血管,增強(qiáng)血流量,改善腦缺血等作用。除此之外,逐瘀通脈膠囊還具有雙向調(diào)節(jié)作用,阻止血栓形成,它既可降低血液黏度,抑制血小板聚集功能,縮短血栓長度及重量,改善血液流變學(xué)指標(biāo);又不影響凝血機(jī)制,不會出現(xiàn)高纖溶狀態(tài)的出血傾向[5-7]。

本試驗研究結(jié)果顯示,逐瘀通脈膠囊給藥組,特別是高劑量給藥組動物的空間記憶能力及主動探索能力顯著改善;解剖發(fā)現(xiàn)高劑量給藥組動物的腦濕重、腦含水量、腦系數(shù)均顯著下降。提示逐瘀通脈膠囊具有顯著的改善腦缺血、缺氧狀態(tài),對局灶性腦缺血大鼠有顯著保護(hù)作用,對缺血引起的大鼠神經(jīng)行為學(xué)異常有顯著改善作用,對腦缺血引起的大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙有顯著改善作用;臨床上也有使用逐瘀通脈膠囊治療慢性供血不足、腦血栓的相關(guān)應(yīng)用研究[8-9],因此認(rèn)為逐瘀通脈膠囊對腦梗死急性期腦組織保護(hù)以及恢復(fù)期神經(jīng)功能缺損以及學(xué)習(xí)記憶能力的下降有較好的治療作用。