超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法篩查食品中的蘇丹紅

陳英

摘 要：運(yùn)用超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）同時(shí)測(cè)定辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血中的蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ。通過(guò)優(yōu)化萃取試劑、樣品基質(zhì)效應(yīng)的消除、色譜及質(zhì)譜條件等參數(shù)，檢測(cè)方法的靈敏度和適用性。在電噴霧離子源正離子模式下，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）方式檢測(cè)，外標(biāo)法定量。蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r2）均大于0.999，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ在3個(gè)添加水平下，回收率范圍為85.1%～104.9%，標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于6.2%，檢出限和定量限為1.0～6.0?g/kg。本方法處理過(guò)程簡(jiǎn)單、分析時(shí)間短、準(zhǔn)確度高，適用于辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋和鴨血中的蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ檢測(cè)，可用于食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的篩查。

關(guān)鍵詞：超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法;蘇丹紅;非法添加

蘇丹紅共有4個(gè)組分，為蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ，是一種紅色顆?；蚍勰畹募t色染料常用于工業(yè)上色如鞋、地板等的增光，因?yàn)橛兄掳┳饔梦：θ梭w健康，我國(guó)和歐盟都禁止其用于食品生產(chǎn)[1]。市面上有一些不法分子為了產(chǎn)品成色漂亮好出售，依然違法添加工業(yè)染料。

目前，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ檢測(cè)方法主要有薄層色譜法[2]、紫外可見(jiàn)分光光度法[3]、近紅外顯微成像光譜法[4]、液相色譜法[5-6]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[7-8]和化學(xué)發(fā)光分析法[9]，這些方法前處理復(fù)雜、試劑用量大、檢測(cè)周期長(zhǎng)、準(zhǔn)確度不高，不適應(yīng)實(shí)際工作中遇到的多種復(fù)雜基質(zhì)中蘇丹紅的篩查測(cè)定。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)色譜條件和質(zhì)譜參數(shù)的研究、優(yōu)化，建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)分析蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的方法。本方法前處理簡(jiǎn)單，7 min即可同時(shí)測(cè)出蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的含量，方法快速簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，可以用于食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的篩查。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀：Qtrap 5500三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó)AB SCIEX公司）;配有電噴霧離子源（ESI）;LC20A超高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）;MS1003S電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）;Milli-Q超純水儀（美國(guó)Millipore公司）;MFV-24智能氮吹儀（廣州德泰儀器科技有限公司）。

1.2 藥品及試劑

實(shí)驗(yàn)用蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)品，純度均大于95%，購(gòu)自Dr.Ehrenstorfer GmbH;甲醇、乙腈（色譜純，美國(guó)Mreda公司）;甲酸（色譜純，美國(guó)Fisher Scientific公司）;水為超純水。

樣品辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血均為市售。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別各精密量取適量標(biāo)準(zhǔn)溶液，加乙腈制成每1 mL中各約含1.0 mg的溶液，為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液密封，于4 ℃保存。分別量取上述蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量，用甲醇稀釋成約0.5 mg/mL的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，加空白樣品基質(zhì)提取液配制系列混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.4 樣品處理方法

提取。取待測(cè)試樣適量混勻，研細(xì)，稱取粉末5.0 g（準(zhǔn)確至0.001 g），置50 mLpvc離心管中，加15 mL乙腈超聲提?。üβ?00 W，頻率50 kHz）30 min，以6000 r/min離心5 min，取上清有機(jī)液，殘?jiān)?5 mL乙腈復(fù)提一次，合并兩次有機(jī)液于雞心瓶，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，備用。

凈化。將上述提取的樣品用1 mL的乙腈溶解，混勻，轉(zhuǎn)移到氧化鋁層析柱上，用正己烷洗脫，氮吹濃縮置近干，1 mL乙腈復(fù)溶，過(guò)0.22 μm濾膜，備用。

1.5 色譜條件和質(zhì)譜條件

色譜柱：Waters UPLC BEH柱（3.0 ?m，2.1mm×100 mm）;柱溫：35 ℃;進(jìn)樣量：5 μL;流動(dòng)相：A相為0.1%甲酸水溶液，B相為乙腈溶液，進(jìn)行梯度洗脫，流速：0.6 mL/min。

電離源模式：電噴霧離子化;電離源極性：正離子模式;霧化氣：氮?dú)?掃描方式：正離子掃描;檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）;電噴霧電壓：4000 V;離子源溫度：150 ℃、碰撞電壓（CE）為20～30 V、去簇電壓（DP）30～40 V。具體待測(cè)物的準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)及碎片離子為：蘇丹紅Ⅰ249.1/156.1，249.1/232.2;蘇丹紅Ⅱ277.3/156.1，277.3/160.1;蘇丹紅Ⅲ253.2/156.1，253.2/197.0;蘇丹紅Ⅳ381.1/224.3，381.1/275.8。

2 結(jié)果和分析

2.1 質(zhì)譜方法的建立

將蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液分別稀釋成濃度約為200 ?g/L，按照上述色譜和質(zhì)譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，在7 min內(nèi)蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ能得到很好分離，方法條件滿足辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血中的蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的測(cè)定。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

在上述本實(shí)驗(yàn)色譜和質(zhì)譜條件下，取1.3混合系列標(biāo)準(zhǔn)溶液0～500 μg/L，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以定量離子峰面積y對(duì)質(zhì)量濃度x（μg/L）做線性回歸，得到蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的線性方程和相關(guān)系數(shù)。蘇丹紅Ⅰ：y=1 271.7x+3 854.8，蘇丹紅Ⅱ：y=1 540.1x+4 678.5，蘇丹紅Ⅲ：y=1 383.2x+2 432.3，蘇丹紅Ⅳ：y=1 262.1x+2 743.3，r2均大于等于0.999。將混合系列溶液的最低濃度點(diǎn)溶液稀釋后進(jìn)樣分析，測(cè)定信噪比，取信噪比約為3的溶液濃度作為定性檢測(cè)限，信噪比約為10的溶液濃度作為定量檢測(cè)限。檢出限和定量限為1.0～6.0 ?g/kg。

2.3 精密度和重復(fù)性試驗(yàn)

按本實(shí)驗(yàn)條件，在5種不同基質(zhì)樣品中進(jìn)行3個(gè)添加水平（0.1 ?g/mL、0.2 ?g/mL、0.5 ?g/mL）的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，每個(gè)添加水平平行實(shí)驗(yàn)6次。蘇丹紅Ⅰ的平均回收率為89.3%、93.5%、91.9%;蘇丹紅Ⅱ的平均回收率為92.2%、91.4%、104.9%;蘇丹紅Ⅲ的平均回收率為87.9%、88.0%、90.5%;蘇丹紅Ⅳ的平均回收率為85.1%、86.9%、91.5%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為4.05%、3.2%、6.18%，表明該方法具有良好的精密度和準(zhǔn)確度?？蓾M足食品中蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的分析要求。

2.4 樣品測(cè)定

應(yīng)用建立的本方法，對(duì)市場(chǎng)銷售的50批次辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血樣品進(jìn)行了篩查，所測(cè)樣品中均未檢出蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ。

3 結(jié)論

本研究建立的UPLC-MS/MS高分辨率質(zhì)譜檢測(cè)方法，可同時(shí)測(cè)定食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ，樣品沒(méi)有復(fù)雜的處理過(guò)程，操作簡(jiǎn)便，可在7 min內(nèi)完成整個(gè)分析，提高了檢驗(yàn)效率。采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的MRM模式進(jìn)行定性和定量檢測(cè)，靈敏度、準(zhǔn)確度高，適用于食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的檢測(cè)。

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