玉木耳液體菌種培養(yǎng)條件試驗

郭月仙 馬立驗 駱伏海 蘇貴平

（1寧德市益智源農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司，福建寧德355300；2寧德市食用菌技術推廣站，福建寧德352100）

玉木耳（Auricularia cornea）為李玉院士團隊由白色毛木耳變種經(jīng)多孢自交選育出的菌株[1]。玉木耳味道鮮美，且富含蛋白質、膳食纖維、多糖、不飽和脂肪酸，具有抗腫瘤、抗氧化等功效[2]，深受消費者青睞。玉木耳在我國臺灣地區(qū)、福建省、江西省等均有少量栽培，應用菌種主要是固體菌種。隨著食用菌產(chǎn)業(yè)向設施化、標準化轉型升級，液體菌種應用越來越多，也日益成熟[3]。劉孝利等[4]研究了玉木耳液體菌種培養(yǎng)基配方。試驗根據(jù)玉木耳的生物學特性，進行液體菌種的培養(yǎng)基配方、培養(yǎng)溫度、初始pH比較，以期篩選出玉木耳液體菌種較佳的培養(yǎng)條件。

1 材料與方法

1.1 玉米耳菌株

玉木耳1號菌株，由福建省南平農(nóng)科所提供。

1.2 試驗設計及方法

1.2.1 培養(yǎng)基配方比較試驗

試驗液體培養(yǎng)基配方：①馬鈴薯100 g，紅糖15 g，葡萄糖10 g，麩皮30 g，蛋白胨1.5 g，磷酸二氫鉀0.75 g，硫酸鎂1 g，維生素B11片，加水1 000 mL；②玉米粉40 g，麩皮20 g，葡萄糖30 g，黃豆粉5 g，磷酸二氫鉀2.5 g，硫酸鎂1 g，維生素B11片，水1 000 mL；③葡萄糖20 g，玉米粉5 g，豆粉5 g，磷酸二氫鉀0.5 g，硫酸鎂0.5 g，酵母粉1 g，消泡劑0.2 g，加水1 000 mL。

配制培養(yǎng)基時微溶性的麩皮、玉米粉、黃豆粉均研磨成粉末狀，馬鈴薯用清水煮30 min后過濾殘渣，并將馬鈴薯水煮液用清水調至1 000 mL，再加入其他原料攪拌均勻即可。用1 000 mL三角瓶分裝培養(yǎng)液，每瓶裝液量為500 mL，用棉塞封口，并用牛皮紙包緊瓶口后，于121℃滅菌35 min。冷卻到常溫后，在凈化室接種，每瓶接8塊0.5 cm2的PDA斜面菌種塊。接種后于25℃靜置24 h，隨后在轉速170 r/min、22℃的恒溫搖床上培養(yǎng)6 d。測菌絲鮮重，記錄菌球形態(tài)。每配方重復3次。

1.2.2 液體菌種培養(yǎng)溫度試驗

培養(yǎng)基用配方③。培養(yǎng)溫度設20℃、22℃、24℃。培養(yǎng)基配制、培養(yǎng)方法同1.2.1。每個溫度處理重復3次。

1.2.3 液體培養(yǎng)基初始pH試驗

培養(yǎng)基用配方③。初始pH設為pH5.5、6.5、7.5。其他同1.2.1。每個pH處理重復3次。

1.2.4 培養(yǎng)瓶接種量試驗

試驗采用配方③。設每個三角瓶接種量為1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL。其他同1.2.1。每個接種量處理重復3次。

2 結果與分析

2.1 液體培養(yǎng)基配方的試驗結果

菌絲鮮重是評價液體菌種質量優(yōu)劣的重要指標。由表1可知，玉木耳菌絲鮮重由高到低的順序是配方③＞配方①＞配方②，配方③的玉米耳菌絲平均鮮重為265.7 g/L，為三個配方中最高，與配方①差異不明顯，與配方②差異顯著。菌球均一性最好的是配方③，配方①和配方②相近。供試配方培養(yǎng)的菌球顏色均為淡黃色，但配方①與配方②的菌液顏色較深，而配方③不管在接種前還是接種后培養(yǎng)液透明度都較好，有利于觀察菌球生長情況（圖1，圖2）。試驗結果表明配方③為供試較佳配方，選擇其進行后續(xù)試驗。

表1 不同液體培養(yǎng)基配方的玉木耳菌絲生長情況

圖1 接種前供試液體培養(yǎng)基狀態(tài)

圖2 供試配方培養(yǎng)菌種6 d后菌液狀態(tài)

2.2 液體菌種培養(yǎng)溫度試驗結果

由表2可知，培養(yǎng)溫度為22℃時，玉米耳菌絲鮮重最高，為263.7 g/L，與培養(yǎng)溫度24℃的菌絲鮮重（262.3 g/L）差異不明顯，與培養(yǎng)溫度20℃的菌絲鮮重差異顯著。因此，22℃為培養(yǎng)玉米耳液體菌種適宜的溫度。

表2 不同溫度培養(yǎng)玉木耳液體菌種菌絲生長情況

2.3 液體培養(yǎng)基初始p H試驗結果

由表3可知，當培養(yǎng)基初始pH為6.5時，菌絲鮮重最高為251.7 g/L，與初始pH5.5、pH7.5時的菌絲鮮重差異達極顯著水平，且菌球均一性及顏色的差異較明顯。因此，玉木耳液體培養(yǎng)基最適合初始pH為6.5。

圖3 不同溫度培養(yǎng)菌種6 d菌液狀態(tài)

圖4 不同初始p H液體培養(yǎng)基培養(yǎng)菌種6 d后菌液狀態(tài)

2.4 培養(yǎng)瓶不同接種量試驗結果

圖5 不同接種量培養(yǎng)液體菌種6 d菌液狀態(tài)

由表4可知，培養(yǎng)瓶接種量1 mL/瓶的菌絲鮮重與接種量2 mL/瓶差異不明顯，與接種量3 mL/瓶、4 mL/瓶、5 mL/瓶的菌絲鮮重均差異極顯著。但不同接種量菌液顏色、菌球均一性無明顯差異。因此，在培養(yǎng)玉木耳液體菌種時，若有條件應適當增加接種量來提高液體菌種的菌絲量，從而增加接種后萌發(fā)點。

表4 培養(yǎng)瓶不同接種量試驗結果

3 小結

試驗篩選出適宜玉木耳液體菌種培養(yǎng)基：葡萄糖20 g，玉米粉5 g，豆粉5 g，磷酸二氫鉀0.5 g，硫酸鎂0.5 g，酵母粉1 g，消泡劑0.2 g，水1 000 mL。培養(yǎng)條件為：適宜培養(yǎng)溫度為22℃，培養(yǎng)液初始pH為6.5，條件允許接種量提高至3 mL以上。近兩年來示范推廣該培養(yǎng)條件培養(yǎng)的液體菌種栽培玉木耳3×105袋，不僅提高了生產(chǎn)效率，且玉木耳產(chǎn)量穩(wěn)定、質量良好。