謝 芳, 李 強, 趙愛國, 楊衛(wèi)華

(中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院 內(nèi)分泌代謝科, 廣東 深圳, 518107)

妊娠期糖尿病(GDM)是臨床中十分常見的妊娠綜合征，與孕產(chǎn)婦和新生兒不良結(jié)局有關(guān)[1-2]。GDM的危險因素包括超重和肥胖、產(chǎn)婦高齡、家族病史或任何形式的糖尿病。GDM給孕產(chǎn)婦、發(fā)育中的胎兒帶來了健康風(fēng)險，包括發(fā)生妊娠婦女2型糖尿病(T2DM)的高可能性，以及后代中可能出現(xiàn)不良心臟代謝表型[3]。胰島素分泌功能異常以及抵抗性增強是妊娠期糖尿病患者的重要生理特征[4]。糖尿病病因非常復(fù)雜，主要是由致病基因和環(huán)境共同作用引發(fā)。長鏈非編碼RNA(LncRNA)是參與基因表達(dá)調(diào)控的重要因子。LncRNA異常表達(dá)能夠?qū)膊〉陌l(fā)生起到促進或者抑制作用，可在心血管疾病、糖尿病、腫瘤等多種疾病的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用[5-6]。相關(guān)研究[7]顯示, LncRNA-p3134是調(diào)控胰島素信號通路的關(guān)鍵因子，并與胰島β細(xì)胞功能調(diào)控相關(guān)。本研究通過檢測LncRNA-p3134表達(dá)，探究其表達(dá)與胰島素敏感性、胰島β細(xì)胞功能和GDM發(fā)生的相關(guān)性，為指導(dǎo)臨床上GDM診療工作開展以及后續(xù)研究LncRNA-p3134表達(dá)引起GDM的作用機制提供理論依據(jù)，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月—2019年12月中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院收治的82例GDM患者為研究對象，納入GDM組。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 按照美國糖尿病學(xué)會診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]診斷為GDM者; ② 年齡≥18歲，單胎妊娠者; ③ 知情同意并自愿參與研究者。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 妊娠前已確診妊娠糖尿病者; ② 嚴(yán)重心、肝、腎等器質(zhì)性疾病者; ③ 急性感染期、惡性腫瘤者; ④ 高血壓、蛋白尿、血液病患者; ⑤ 信息資料不全者。另取116例非GDM患者作為對照組。本試驗已通過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，且所有納入研究的患者均已簽署知情同意書。

2組患者年齡、孕前體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、孕周、收縮壓和舒張壓方面比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05), 具有可比性。見表1。

表1 非GDM組和GDM組人口學(xué)資料及臨床資料比較

1.2 方法

1.2.1 外周血采樣和RNA提取: 對患者進行全血標(biāo)本采集，采集前空腹8～10 h。收集全血標(biāo)本2.5 mL于PAXgeng RNA管中，室溫環(huán)境下靜置2 h后放入-80℃冰箱保存待用。提取外周血RNA，經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA。

1.2.2 熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測: 對內(nèi)參片段和目的片段大小進行檢測，內(nèi)參基因U6的大小為94 bp, 目的基因LncRNA-p3134的大小為100 bp。以U6作為內(nèi)參基因，引物均由Primer Premer5 軟件設(shè)計并由上海生工公司合成。熒光定量PCR反應(yīng)體系總量為20 μL, 包含cDNA模板5 μL及上、下游引物各0.5 μL、2×SYBR Green qPCR SuperMix體積為10 μL, 4 μL dH2O。共設(shè)置40個循環(huán)，后做溶解曲線分析。實驗過程中設(shè)置3個復(fù)孔，結(jié)果取三者的平均值。

1.2.3 PCR結(jié)果計算: 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測結(jié)果使用Ct值來表示，采用比較CT法進行相對定量，計算方法為，即為LncRNA-p3134基因的相對表達(dá)量。

1.3 觀察指標(biāo)

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 GDM組和對照組外周血中LncRNA-p3134表達(dá)水平比較

外周血中，GDM組LncRNA-p3134相對表達(dá)水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2 。

表2 2組外周血中LncRNA-p3134表達(dá)水平比較

2.2 GDM組和對照組臨床特征比較

對照組TC、TG、FPG、FCP、HbA1c和GA低于GDM組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 2組臨床特征比較

2.3 LncRNA-p3134表達(dá)與GDM發(fā)生相關(guān)性

LncRNA-p3134表達(dá)與ISOGTT(r=-0.532,P<0.001)、HOMA-β(r=-0.417 9,P<0.001)呈負(fù)相關(guān)，與HOMA-IR(r=0.556,P<0.001)、GDM(r=0.726,P<0.001)呈正相關(guān)，見圖1。

2.4 LncRNA-p3134表達(dá)對GDM發(fā)生的影響

校正混雜因素后, LncRNA-p3134表達(dá)是GDM發(fā)生的獨立影響因素(OF=P<0.05), LncRNA-p3134表達(dá)相對量越高則GDM發(fā)生風(fēng)險越大。見表4。

表4 多元logistics回歸分析LncRNA-p3134表達(dá)對GDM發(fā)生的影響

2.5 LncRNA-p3134診斷GDM的作用

ROC曲線分析顯示, LncRNA-p3134診斷GDM的曲線下面積(AUC)為0.853(95%CI為0.799 4～0.906,P<0.05), 敏感度和特異度分別為75.0%、83.0%, 最佳截斷值為0.580。見圖2。

3 討 論

妊娠期間女性內(nèi)分泌系統(tǒng)可發(fā)生一系列復(fù)雜的變化，孕婦常常由于飲食習(xí)慣和結(jié)構(gòu)、活動與鍛煉的改變，容易發(fā)生妊娠期高血壓、GDM等并發(fā)癥。中國GDM的患病率呈逐年上升趨勢[9]。GDM能夠引起妊娠婦女體內(nèi)代謝紊亂，導(dǎo)致妊娠合并癥、不良妊娠結(jié)局的發(fā)生，還會對胎兒的生長發(fā)育產(chǎn)生影響。研究[4]認(rèn)為, GDM的發(fā)生與胰島素敏感性和功能有關(guān)。相比孕前，妊娠期母體對胰島素的敏感性下降，胰島β細(xì)胞對血糖的興奮表現(xiàn)應(yīng)答失調(diào)，導(dǎo)致胰島素分泌功能異常及抵抗性增強。而胰島β細(xì)胞發(fā)揮作用的機制和其功能發(fā)揮受到多種分子調(diào)控[10-13], 其中LncRNA是近年來學(xué)者關(guān)注的重點。CHENG Y Q等[14]研究發(fā)現(xiàn), LncRNA-PVT1敲除可通過靶向調(diào)控miR-181a-5p提高胰島β細(xì)胞的胰島素分泌能力。FENG Y等[15]報道指出, LncRNA-DANCR是在胰島INS-1細(xì)胞中拮抗miR-33a-5p功能的海綿，而GDM患者外周血中miR-33a-5p表達(dá)上調(diào)，與血糖呈正相關(guān)(P<0.05), miR-33a-5p的過度表達(dá)或顯著抑制或促進INS-1細(xì)胞的生長和胰島素分泌。LncRNA-p3134是新提出的與胰島β細(xì)胞功能有關(guān)的長鏈非編碼RNA, 但其與GDM的發(fā)生發(fā)展相關(guān)性研究鮮有報道。本研究通過檢測妊娠婦女外周血中LncRNA-p3134的表達(dá)水平和與GDM發(fā)生的相關(guān)性，證明了LncRNA-p3134在GDM妊娠婦女外周血中高表達(dá)，同時與胰島素敏感性以及胰島β細(xì)胞功能有關(guān)，可能通過參與相關(guān)分子機制影響GDM的發(fā)生。此外，在GDM診斷中具有一定作用，可作為GDM早期診斷的候選分子標(biāo)記物。

本研究中, GDM妊娠婦女外周血中LncRNA-p3134相對表達(dá)水平較非GDM妊娠婦女高(P<0.05), 且LncRNA-p3134表達(dá)與ISOGTT、HOMA-β、HOMA-IR、GDM發(fā)生有關(guān)(P<0.05), 提示LncRNA-p3134在GDM中異常表達(dá)，可能通過調(diào)控胰島素敏感性和胰島β細(xì)胞功能引起GDM的發(fā)生。RUAN Y T等[7]研究發(fā)現(xiàn)，在T2DM患者中LncRNA-p3134可通過PI3K/Akt/mTOR信號正調(diào)控胰島β細(xì)胞葡萄糖刺激胰島素分泌，但在妊娠婦女中是否也通過同一個信號通路發(fā)揮作用尚未明確，可以推測妊娠婦女外周血LncRNA-p3134水平與糖代謝失衡以及胰島β細(xì)胞功能有關(guān)。 本研究結(jié)果表明, LncRNA-p3134表達(dá)是GDM發(fā)生的獨立影響因素(P<0.05), LncRNA-p3134表達(dá)相對量越高則GDM發(fā)生風(fēng)險越大。阮玉婷[16-17]研究報道, LncRNA-p3134在GDM中穩(wěn)定高表達(dá)，并與血糖水平呈正相關(guān)，與評估胰島β細(xì)胞功能的指標(biāo)HOMA-β指數(shù)呈顯著負(fù)相關(guān)，可能與LncRNA-p3134參與糖代謝過程中胰島β細(xì)胞的調(diào)控有關(guān)。LncRNA-p3134表達(dá)對GDM的獨立影響，可能可作為GDM早期診斷的新標(biāo)志物[18-19]。本研究采用ROC曲線分析LncRNA-p3134對GDM診斷的效能，結(jié)果發(fā)現(xiàn), LncRNA-p3134表達(dá)可診斷GDM的發(fā)生，其靈敏度和特異度較高，預(yù)測效能也較好(AUC為0.853), 提示LncRNA-p3134可作為GDM早期診斷的候選標(biāo)志物，單一或聯(lián)合其他已知指標(biāo)，構(gòu)建GDM診斷的分子體系，可早期診斷臨床上GDM發(fā)生，并及時給予干預(yù)措施，還有助于圍產(chǎn)期保健和防止妊娠合并癥發(fā)生引起的不良結(jié)局。

本研究也存在一定的不足之處，樣本量小，病例來源單一，研究結(jié)果存在一定的選擇偏倚; 外周血中LncRNA-p3134表達(dá)水平檢測的有效性沒有進行凝膠電泳檢測，質(zhì)量控制部分不夠嚴(yán)謹(jǐn); 缺乏具體分子作用研究，不能深入探討LncRNA-p3134在GDM發(fā)生發(fā)展中的作用機制，上述方面有待后續(xù)進一步深入研究。

綜上所述, LncRNA-p3134在GDM中表達(dá)水平較非GDM高，其可能通過影響胰島素敏感性以及胰島β細(xì)胞功能導(dǎo)致GDM的發(fā)生。LncRNA-p3134在臨床上可能可作為GDM診斷的候選標(biāo)志物。