黃于婷，陳佳彥，闞 宇，方燕平，王金偉，鄭林遙，景向紅，廖 軍*

1 福建中醫(yī)藥大學(xué)針灸學(xué)院，福建 福州 350122；

2 四川省衛(wèi)生康復(fù)職業(yè)學(xué)院，四川 自貢 643000；

3 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院針灸研究所，北京 100700

慢性肌肉損傷作為頸椎病發(fā)病的首要常見(jiàn)原因，在頸椎病的發(fā)病過(guò)程中其發(fā)病率高達(dá)50%～70%，長(zhǎng)期低頭伏案工作人群發(fā)病率更高，給社會(huì)帶來(lái)了沉重的醫(yī)療和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［1］。肌衛(wèi)星細(xì)胞（muscle satellite cells，MSC）作為成體專能干細(xì)胞，擁有較強(qiáng)的自我更新以及增殖分化能力，能夠在肌肉損傷時(shí)，在生肌決定因子（myogenic determine factor，MyoD）的作用下，從靜息狀態(tài)進(jìn)入細(xì)胞周期，進(jìn)行大規(guī)模的細(xì)胞分裂和增殖，達(dá)到促進(jìn)骨骼肌的損傷與修復(fù)的功能［2-4］。增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）作為細(xì)胞增殖的標(biāo)記蛋白，能反映肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖活性［5］。骨骼肌損傷后，機(jī)體立即發(fā)生一種自我的保護(hù)機(jī)制，其首發(fā)癥狀即是炎癥反應(yīng)。炎癥反應(yīng)可以清除壞死組織，釋放肌肉生長(zhǎng)因子以及相關(guān)的促炎細(xì)胞因子，從而達(dá)到促進(jìn)肌纖維細(xì)胞再生的功能?；A(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，有許多炎癥細(xì)胞及因子參與頸型頸椎病的損傷與修復(fù)過(guò)程［6］。Toll 樣受體（toll-like receptors，TLRs）被證實(shí)可介導(dǎo)組織免疫炎性反應(yīng)過(guò)程。Toll 樣受體-4（toll-like receptor 4，TLR4）可以啟動(dòng)髓樣分化因子88（myeloid differentiation primary response gene 88，MyD88）所介導(dǎo)的信號(hào)通路。炎性細(xì)胞生物因子主要通過(guò)MyD88的依賴性途徑介導(dǎo)而起作用，當(dāng)TLRs的細(xì)胞外區(qū)段識(shí)別到相對(duì)應(yīng)的特異配體之后，引起特異的TIR 結(jié)構(gòu)域出現(xiàn)改變，結(jié)合MyD88 的羧基端并互相作用。MyD88活化后可誘使核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）激活，NF-κB 信號(hào)通路中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)NF-κBp65 與相關(guān)炎癥因子的表達(dá)密切相關(guān)，可促進(jìn)炎性信號(hào)及趨化因子釋放，并招募炎性反應(yīng)細(xì)胞到病灶局部，介導(dǎo)局部免疫炎性反應(yīng)［7-8］。因此推測(cè)，TLR4/MyD88/NF-κB 可能參與骨骼肌細(xì)胞損傷修復(fù)的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。

本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)電針干預(yù)頸肌慢性損傷大鼠模型，探討電針對(duì)肌細(xì)胞損傷修復(fù)中肌衛(wèi)星細(xì)胞的影響，并對(duì)其與TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路的相關(guān)性進(jìn)行研究，探討肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖分化與炎癥因子的相關(guān)性，闡釋電針修復(fù)頸肌慢性損傷的可能機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

1月齡SPF級(jí)雄性Wistar大鼠45只，體質(zhì)量80～120 g，由福建中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供［實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SYXK（閩）2018-001］。飼養(yǎng)于福建中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，溫度22～25 ℃，濕度45%～65%，12 h/12 h明暗周期，自由飲水。本實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格遵守中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部2006年頒布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)》相關(guān)規(guī)定，并通過(guò)福建中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)審批（審批號(hào)：2021040）。

1.2 主要試劑

多聚甲醛（Sigma-alorich），枸椽酸緩沖液、DAB（美國(guó)Boster 公司）；Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9 免疫組織化學(xué)SP 試劑盒（美國(guó)Bio-Rad 公司）；免疫組織化學(xué)一抗、細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（美國(guó)Boster公司）；免疫印跡一抗（美國(guó)Bio-Rad公司）。

1.3 主要儀器

HANS-100 韓式穴位神經(jīng)刺激儀（石家莊福賽醫(yī)巧器械有限公司）；YB-6LF 石蠟包埋機(jī)（亞光醫(yī)用有限公司）；RM2235 切片機(jī)（德國(guó)徠卡儀器有限公司）；YS2-H光學(xué)顯微鏡（上海普赫光電科技有限公司）；15 mm×0.3 mm 針刺針（蘇州醫(yī)療器械廠）；JEM-1230電子顯微鏡（日本電子株式會(huì)社）；M-Turbo便攜式彩色超聲診斷儀（美國(guó)索諾聲公司）；RM6240型多道生理信號(hào)采集處理系統(tǒng)（成都儀器廠）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 實(shí)驗(yàn)分組及模型制備

將45 只實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，按照隨機(jī)數(shù)字表法選取10 只作為空白組，其余35 只大鼠按照劉志華等［9］制備頸肌慢性損傷模型方法改良后進(jìn)行造模，具體方法為：根據(jù)人類頸型頸椎病常見(jiàn)的發(fā)病方式，復(fù)制大鼠頸肌慢性損傷動(dòng)物模型。向大鼠頸部C3～C5間注射3%高滲鹽水1 mL；次日再次注射1 mL；第2天采用頸部低頭法，采用自制固定器，將大鼠放入并固定頸椎后，使大鼠保持低頭位30°，確定不影響其他部位的活動(dòng)，并使呼吸道保持通暢。每次使用固定架固定大鼠保持頸前屈5 h，每天1 次，反復(fù)3 個(gè)月。同時(shí)每隔5 d 在頸部C3～C5注射1 次3%高滲鹽水。3 個(gè)月后，用超聲診斷儀對(duì)大鼠頸后肌組織行超聲診斷檢測(cè)，觀察大鼠頸后肌的形態(tài)學(xué)變化，以驗(yàn)證模型是否成功。模型大鼠可見(jiàn)頸后肌組織斷續(xù)，排列紊亂，肌組織邊界模糊，回聲欠均勻。之后將復(fù)制成功的模型大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組、電針組、美洛昔康組，每組10 只（其中5 只大鼠經(jīng)超聲診斷儀檢測(cè)提示模型復(fù)制不成功，故剔除）。

2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物干預(yù)方法

造模成功后電針組大鼠選用雙側(cè)風(fēng)池穴進(jìn)行電針干預(yù)治療。先用自制固定器固定好大鼠，再根據(jù)李忠仁主編的《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)（新世紀(jì)第2版）》結(jié)合比較解剖學(xué)方法選取風(fēng)池穴（雙側(cè)），風(fēng)池穴的針刺深度為3 mm，抵骨面，之后連接韓氏穴位神經(jīng)刺激儀，刺激參數(shù)采用疏密波，電流為1 mA，頻率為2/100 Hz［10］。治療時(shí)間：每次25 min，每天1 次，連續(xù)干預(yù)10 d 為1 個(gè)療程，每個(gè)療程間隔2 d，共干預(yù)2個(gè)療程。模型組造模后僅抓握固定而不予針刺。美洛昔康組按照大鼠體質(zhì)量選取定量的美洛昔康溶液灌胃。每周1次測(cè)量體質(zhì)量調(diào)整灌胃劑量，灌胃劑量根據(jù)體表面積比率計(jì)算為0.787 8 mg/kg。模型組和美洛昔康組的治療療程、次數(shù)、時(shí)間與間隔時(shí)間，均與電針組相同。

2.3 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

2.3.1 超聲診斷儀檢測(cè) 造模3 個(gè)月后，對(duì)模型大鼠進(jìn)行超聲診斷檢測(cè)，目的是判斷造模是否成功。以大鼠頸后肌為檢查體位，選擇造模部位、肌肉結(jié)節(jié)處，利用高頻超聲探頭進(jìn)行多方位、多位置掃描檢查，并與空白組大鼠相同部位比較。觀察頸后肌肌肉情況，并明確造模損傷范圍與位置，觀察其內(nèi)部回聲信號(hào)分布情況。

2.3.2 肌電生理檢測(cè) 經(jīng)超聲檢測(cè)后，對(duì)模型組大鼠頸后肌行肌電生理檢測(cè)。大鼠麻醉后固定姿勢(shì)，充分暴露頸后肌，在頸后肌結(jié)節(jié)處放置正、負(fù)電極，兩針相距1～2 cm，在大鼠尾部放置地極，使用5 mA電流刺激大鼠，產(chǎn)生誘發(fā)電位，最后在電生理記錄儀上連續(xù)5 s 記錄大鼠誘發(fā)電位M 波的肌電電位和振幅的衰減變化程度。

2.3.3 取材 電生理檢測(cè)結(jié)束后，準(zhǔn)備取材。使用20%的烏拉坦行腹腔麻醉，確認(rèn)大鼠完全麻醉后，保持大鼠的背部朝上并完全暴露頭部和頸部。采用鈍性分離的方式找到右側(cè)頸后肌，用手術(shù)剪將其剪下，操作時(shí)注意保證肌肉組織的完整性。用PBS液體清洗頸后肌，剔除筋膜及其他雜質(zhì)，僅保留完整的肌肉組織。將組織置于4%多聚甲醛中放置24 h，備用。

2.3.4 透射電鏡 肌肉組織纖維塊在2.5%戊二醛溶液固定24 h 后，取出組織塊，使用四氧化鋨固定1.5 h，逐級(jí)乙醇脫水，放置在醋酸異戊酯中儲(chǔ)存直至過(guò)夜，置于純丙酮與包埋液的比例為2∶1 的溶液中3 h后取出，改成放置于純丙酮以及包埋液的比例為1∶2 的溶液中過(guò)夜；環(huán)氧樹(shù)脂包埋液中定向包埋，半薄切片，用2%乙酸雙氧鈾以及2%檸檬酸鉛染色切片定位后，使用透射電鏡技術(shù)拍攝組織圖片，仔細(xì)觀察并分析樣本的頸后肌的超微結(jié)構(gòu)變化。

2.3.5 免疫組織化學(xué)檢測(cè) 對(duì)存放于4%多聚甲醛中的肌肉組織依次進(jìn)行脫水、浸蠟、包埋、切片、烘片、烤片、脫蠟至水等步驟；枸櫞酸修復(fù)液中微波修復(fù)；用0.01 mol/L PBS 漂洗，在切片上滴加適量3%H2O2，使用微波震蕩10 min后，血清封閉液封閉0.5 h；滴加一抗稀釋液稀釋抗體，放置在4 ℃冰箱中孵育過(guò)夜；PBS 漂洗，滴入二抗，孵育60 min；滴加HRP，37 ℃孵育2 h；DAB顯色8 min；顯微鏡下進(jìn)行觀察染色程度；使用蘇木素復(fù)染，逐級(jí)濃度酒精依次脫水后使用二甲苯二次透明；隨后進(jìn)行封片和鏡檢；每組切片中隨機(jī)選擇5個(gè)不同的視野，拍照后，經(jīng)圖像分析最后處理數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)大鼠頸后肌中PCNA、MyoD、TLR4、MyD88、NF-κBp65的蛋白表達(dá)量。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 25.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 大鼠頸后肌超聲診斷檢測(cè)

造模3 個(gè)月后，空白組大鼠頸后肌組織形態(tài)規(guī)則，邊界清楚，回聲均勻；模型組大鼠頸后肌組織斷續(xù)，排列紊亂，且邊界較模糊，回聲欠均勻，與空白組相比，模型組頸后肌厚度明顯變薄，表明大鼠頸肌慢性損傷模型復(fù)制成功，見(jiàn)圖1。其中40 只造模成功，5只造模未成功。

圖1 大鼠頸后肌超聲檢測(cè)結(jié)果Figure 1 Results of ultrasonic examination on posterior cervical muscle of rats

3.2 肌電生理檢測(cè)

與空白組比較，模型組肌電波幅及頻率明顯發(fā)生衰減，可見(jiàn)誘發(fā)波M 波、無(wú)潛伏期及H 波，說(shuō)明慢性頸肌損傷大鼠肌肉損傷導(dǎo)致肌肉電傳導(dǎo)功能降低。見(jiàn)圖2。

圖2 大鼠頸后肌肌電檢測(cè)結(jié)果Figure 2 Results of EMG test on posterior cervical muscle of rats

3.3 4組大鼠頸后肌電鏡檢測(cè)結(jié)果比較

空白組肌絲的橫截面以點(diǎn)狀分布為主，肌節(jié)和肌漿膜無(wú)破裂，肌原纖維結(jié)構(gòu)排列緊密，核膜光滑，線粒體結(jié)構(gòu)無(wú)異常且分布均勻，嵴無(wú)斷裂。模型組可見(jiàn)單個(gè)的肌原纖維結(jié)構(gòu)的排列不連續(xù)，細(xì)胞中線粒體出現(xiàn)腫脹現(xiàn)象，并且肌原纖維整體排列紊亂，肌纖維和肌節(jié)之間斷裂，并有空泡現(xiàn)象，但其肌間隙基本接近正常。電針組肌原纖維可見(jiàn)清晰的紋理，且肌絲的橫斷面呈點(diǎn)狀分布，肌節(jié)和肌漿膜完整，個(gè)別線粒體腫脹，少量與肌原纖維的斷裂處有空泡。美洛昔康組肌原纖維的結(jié)構(gòu)偶見(jiàn)不規(guī)則且細(xì)胞排列混亂，出現(xiàn)少量的線粒體腫脹，其中在肌原纖維的斷裂處有空泡存在。見(jiàn)圖3。

圖3 4組頸后肌電鏡檢測(cè)結(jié)果比較（×50 000）Figure 3 Comparison of electron microscopy results in posterior cervical muscle of four groups (×50 000)

3.4 免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果分析

3.4.1 4組大鼠頸后肌PCNA、MyoD 表達(dá)比較 4組大鼠頸后肌組織中均出現(xiàn)肌纖維細(xì)胞中PCNA、MyoD蛋白的陽(yáng)性表達(dá)?？瞻捉M中PCNA、MyoD的表達(dá)量較少，呈散在分布，數(shù)量較少。模型組中PCNA、MyoD 的表達(dá)呈現(xiàn)弱陽(yáng)性，分布集中、數(shù)量多、排列密集、染色較深。在電針組和美洛昔康組大鼠中的PCNA、MyoD 呈陽(yáng)性表達(dá)，細(xì)胞排列較緊密、數(shù)量多、核染色深。與空白組相比，模型組PCNA、MyoD的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組相比，電針組和美洛昔康組肌肉組織中PCNA、MyoD 的陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞明顯增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)圖4和圖5。

圖4 4組大鼠頸后肌PCNA表達(dá)比較（×200）Figure 4 Comparison of PCNA expression in posterior cervical muscle of four groups (×200)

圖5 4組大鼠頸后肌MyoD表達(dá)比較（×200）Figure 5 Comparison of MyoD expression in the posterior cervical muscle of four groups (×200)

3.4.2 大鼠頸后肌中TLR4、MyD88、NF-κBp65陽(yáng)性表達(dá)分析 4 組大鼠頸后肌組織中均檢測(cè)到TLR4、MyD88、NF-κBp65陽(yáng)性表達(dá)。模型組中TLR4、MyD88、NF-κBp65 的表達(dá)呈現(xiàn)陽(yáng)性，細(xì)胞分布集中、排列密集、數(shù)量較多、核染色較深；電針組及美洛昔康組中TLR4、MyD88、NF-κBp65 蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)出弱陽(yáng)性，染色細(xì)胞數(shù)量較少，排列較稀疏、染色淺。與空白組相比，模型組中TLR4、MyD88、NF-κBp65蛋白表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，電針組和美洛昔康組中的TLR4、MyD88、NF-κBp65 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)圖6～8。

圖6 4組大鼠頸后肌TLR4表達(dá)比較（×200）Figure 6 Comparison of TLR4 expression in posterior cervical muscle of four groups (×200)

圖7 4組大鼠頸后肌MyD88 表達(dá)比較（×200）Figure 7 Comparison of MyD88 expression in posterior cervical muscle of four groups (×200)

圖8 4組大鼠頸后肌NF-κBp65表達(dá)比較（×200）Figure 8 Comparison of NF-κBp65 expression in posterior cervical muscle of four groups (×200)

4 討 論

頸部肌肉慢性損傷屬于中醫(yī)學(xué)“經(jīng)筋病”范疇。由于生活習(xí)慣及工作壓力的影響，頸肌慢性損傷在臨床上發(fā)病率較高。針刺在治療頸肌慢性損傷中具有十分獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。本課題采用大鼠長(zhǎng)期低頭位制作頸肌慢性損傷模型，符合臨床頸肌慢性損傷的發(fā)病特征。本課題選用風(fēng)池穴為足少陽(yáng)膽經(jīng)的腧穴，位于顳額處后發(fā)際線的凹陷，是十二經(jīng)脈中足少陽(yáng)膽經(jīng)、手少陽(yáng)三焦經(jīng)以及奇經(jīng)八脈中陽(yáng)維脈和陽(yáng)蹺脈循行的交會(huì)穴?！澳懣芍鹘钏　薄叭箍芍魉練馑　薄瓣?yáng)維可主人體一身的腠理”“陽(yáng)蹺可主人體一身的運(yùn)動(dòng)功能”，因此風(fēng)池穴能夠平熄少陽(yáng)上擾清竅，又能夠疏通頸部肌肉關(guān)節(jié)的氣血。本實(shí)驗(yàn)中促進(jìn)頸部肌肉慢性損傷的修復(fù)進(jìn)程可能是通過(guò)電針“風(fēng)池穴”達(dá)到舒筋通絡(luò)、調(diào)理氣血的作用。

從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度來(lái)看，骨骼肌損傷后機(jī)體會(huì)啟動(dòng)自我再生修復(fù)機(jī)制，增殖的成纖維細(xì)胞所形成的瘢痕組織能夠阻礙周圍神經(jīng)對(duì)肌纖維的支配作用，造成骨骼肌電生理傳導(dǎo)功能障礙。因此，本課題使用超聲診斷儀檢測(cè)慢性頸肌損傷模型中頸后肌的肌肉形態(tài)、結(jié)節(jié)，用于判斷是否有瘢痕形成或肌肉形態(tài)改變；同時(shí)，使用肌電生理檢測(cè)判斷慢性頸肌損傷肌纖維的電生理傳導(dǎo)功能，以此來(lái)判斷慢性頸肌損傷的模型是否成功。在實(shí)驗(yàn)中模型組大鼠頸后肌超聲檢測(cè)可見(jiàn)肌組織排列紊亂等病理性改變，肌電生理可見(jiàn)肌電振幅衰減，表明造模成功。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明：慢性頸部肌肉損傷模型大鼠的超聲檢測(cè)可見(jiàn)其肌纖維形態(tài)明顯變化，出現(xiàn)肌纖維結(jié)構(gòu)紊亂、厚度變薄、病理性結(jié)節(jié)產(chǎn)生等現(xiàn)象。在肌電圖結(jié)果中也可以看到，模型組大鼠右側(cè)頸后肌肌電振幅明顯下降，表明慢性頸部肌肉損傷會(huì)影響骨骼肌對(duì)電生理的傳導(dǎo)作用。從電鏡結(jié)果中可見(jiàn)，模型組大鼠頸后肌肌原纖維排列較紊亂，線粒體腫脹，且有空泡現(xiàn)象存在，而電針能夠有效改善肌纖維情況。在電針組的肌纖維橫切面中肌原纖維可見(jiàn)清晰紋理，且肌絲的橫斷面呈點(diǎn)狀分布，肌節(jié)和肌漿膜完整，個(gè)別線粒體腫脹，其中少量與肌原纖維的斷裂處有空泡，表明電針能夠有效促進(jìn)骨骼肌損傷的肌纖維修復(fù)。

骨骼肌的損傷后修復(fù)是一個(gè)完整的病理、生理過(guò)程［11］，骨骼肌的再生與修復(fù)是在肌纖維損傷后各種因素的刺激及誘導(dǎo)下導(dǎo)致肌細(xì)胞產(chǎn)生自我修復(fù)的過(guò)程。肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖分化是骨骼肌損傷后修復(fù)的關(guān)鍵因素。在肌衛(wèi)星細(xì)胞形成肌纖維細(xì)胞的特異性基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控過(guò)程中，MyoD 作為反映肌細(xì)胞損傷后再生的指標(biāo)［12-13］，屬于閥門通道，具備總開(kāi)關(guān)的調(diào)節(jié)作用，可以與各種相關(guān)的基因啟動(dòng)子相結(jié)合而調(diào)控肌細(xì)胞的生成，同時(shí)促進(jìn)基因啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄與激活。PCNA 又被稱為周期蛋白，是細(xì)胞中DNA 在合成時(shí)所需要的特殊核蛋白，可以當(dāng)作細(xì)胞分裂增殖過(guò)程的一種標(biāo)記蛋白。檢測(cè)PCNA 在肌細(xì)胞中的蛋白表達(dá)可作為判斷肌細(xì)胞增殖的指標(biāo)，反映肌衛(wèi)星細(xì)胞的分裂增殖進(jìn)程［5］。鄒媛等［14］通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)在股四頭肌損傷小鼠中MyoD 的表達(dá)量增加，斜刺阿是穴能夠促進(jìn)MyoD 的表達(dá)，促進(jìn)股四頭肌損傷的良性恢復(fù)。趙丹丹等［15］認(rèn)為電針干預(yù)能夠上調(diào)大鼠腓腸肌中PCNA和配對(duì)盒基因7（paired box gene 7，Pax7）的表達(dá)，提高肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖水平。本實(shí)驗(yàn)的研究中，使用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)頸后肌中PCNA 和MyoD 的指標(biāo)，結(jié)果顯示與模型組相比，電針能夠明顯提高M(jìn)yoD 和PCNA 的表達(dá)，電針組大鼠頸后肌中MyoD 和PCNA 均顯著性增加，與上述結(jié)果一致，說(shuō)明電針有激活并促進(jìn)肌衛(wèi)星細(xì)胞分裂增殖的能力，這有可能是電針促進(jìn)骨骼肌損傷修復(fù)的機(jī)制。

炎癥反應(yīng)是骨骼肌損傷后的首發(fā)癥狀［16-17］，炎癥反應(yīng)是機(jī)體的一種自我保護(hù)機(jī)制，其目的是清除壞死組織，促進(jìn)肌纖維的再生。有研究認(rèn)為炎癥反應(yīng)能夠誘導(dǎo)并激活骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞受損后的分裂、增殖與分化過(guò)程［18］。當(dāng)骨骼肌損傷后，接收到壞死肌纖維及局部血管、神經(jīng)損傷的信號(hào)刺激，使炎癥細(xì)胞釋放，局部出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，浸潤(rùn)損傷部位，吞噬并代謝壞死肌纖維，同時(shí)釋放相關(guān)的細(xì)胞生長(zhǎng)因子激活肌衛(wèi)星細(xì)胞。而肌細(xì)胞損傷的修復(fù)與TLR4/MyD88/NF-κB 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的異常激活密切相關(guān)。馬芳菲等［19］在探究糖尿病患者的骨骼肌受到炎癥損傷及用藥后損傷的修復(fù)過(guò)程時(shí)，使用免疫印跡法檢測(cè)TLR4、MyD88、NF-κB的蛋白表達(dá)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明TLR4/MyD88/NF-κB 信號(hào)通路在骨骼肌的炎癥損傷修復(fù)中扮演著重要的作用。何堅(jiān)團(tuán)隊(duì)在兔頸型頸椎病模型中，使用HE 染色及免疫印跡法檢測(cè)兔頸椎病模型中頸后肌的NF-κBp65 和MyD88的蛋白含量，發(fā)現(xiàn)在頸型頸椎病模型中MyD88 和NF-κBp65 均呈顯著性的增加，說(shuō)明在頸椎病肌肉損傷過(guò)程中存在MyD88 和NF-κBp65 的影響［6］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，肌肉損傷后大鼠頸后肌中TLR4、MyD88 和NF-κBp65 信號(hào)因子的表達(dá)明顯增加，表明在頸肌慢性損傷中TLR4、MyD88 及NF-κBp65 信號(hào)因子處于活化狀態(tài)，給予電針刺激后，大鼠頸后肌組織中TLR4、MyD88 及NF-κBp65 蛋白在電針組的表達(dá)均有所下降，說(shuō)明電針能夠抑制大鼠頸肌慢性損傷模型中TLR4/MyD88/NF-κB 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活性。

電針風(fēng)池穴可以改善頸肌慢性損傷模型中頸后肌的形態(tài)變化，促進(jìn)頸肌慢性損傷修復(fù)，其作用機(jī)制可能是通過(guò)抑制TLR4/MyD88/NF-κB 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的炎癥反應(yīng)，促進(jìn)肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖，進(jìn)而影響損傷后骨骼肌的再生與修復(fù)。