顏秀娟 邱昌文 袁 婷 林丹英

（南寧中心血站，廣西 南寧 530003）

實驗室對經(jīng)血感染性指標(biāo)進行有效檢測，是確保臨床輸血安全的重要手段。酶聯(lián)免疫檢測（ELISA）是目前我國采供血機構(gòu)用于獻血者血液病毒篩查的法定方法[1]。因此，ELISA試劑得到有效控制，是保證實驗室測檢結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。而檢測試劑有效性的確認(rèn)是一項不可忽視的環(huán)節(jié)，在試劑使用前、中、后期都要對試劑的靈敏度、特異性進行嚴(yán)格監(jiān)控，確保檢測試劑的有效性[2]。現(xiàn)將我們對ELISA試劑在使用前進行確認(rèn)的一些粗淺認(rèn)識介紹如下。

1 試劑確認(rèn)的涵義理解

“確認(rèn)”的定義ISO 9001：2000標(biāo)準(zhǔn)3.8.5條將“確認(rèn)”定義為：“通過提供客觀證據(jù)對特定的預(yù)期使用或應(yīng)用要求已得到滿足的認(rèn)定”[3]，在ISO/IEC17025：2005中“確認(rèn)”的定義為“通過檢查并提供客觀證據(jù)，以證實某一特定預(yù)期用途的特定要求得到滿足”[4]，顯然兩者對“確認(rèn)”的表述是一致的。由此可見，“確認(rèn)”的目的是檢查預(yù)期使用要求或應(yīng)用要求是否得到滿足，“確認(rèn)”的范圍是針對特定的預(yù)期用途的特定要求，“確認(rèn)”的要求是按照一定的程序和方法，通過試驗、核查認(rèn)可、驗證等檢查方式，收集和提供客觀證據(jù)，以判定其最終是否符合預(yù)期要求或應(yīng)用要求。ELISA試劑盒熱穩(wěn)定性差，遇熱后靈敏度、特異性都將降低[5]。如果試劑盒在長途運輸過程中保證不了規(guī)定的溫度要求，其質(zhì)量將會受到影響。為了避免試劑盒和質(zhì)控品在運輸過程中可能發(fā)生變質(zhì)、泄露給檢驗工作帶來的影響，以及對新批號的試劑和質(zhì)控品在本實驗室的“表現(xiàn)”進行預(yù)判，確定試劑批間差異和可接受性，應(yīng)對新進貨的試劑盒和質(zhì)控品進行確認(rèn)[6]。另外，我國對體外免疫診斷試劑的注冊、批準(zhǔn)、生產(chǎn)、監(jiān)控等環(huán)節(jié)都有嚴(yán)格控制。用于血液篩查的檢測試劑屬于藥品和三類醫(yī)療器械監(jiān)督管理范疇，質(zhì)量必須符合《中華人民共和國藥品管理法》和《中華人民共和國醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》的有關(guān)規(guī)定[7]?！堆緦嶒炇屹|(zhì)量管理規(guī)范》中明確規(guī)定：每批試劑投入使用前應(yīng)進行確認(rèn)[8]。因此，試劑確認(rèn)的目的是對新的或者有變化的ELISA試劑的系統(tǒng)檢查與評價進行策劃和控制，保證其在正式使用前符合預(yù)期的使用要求。

2 試劑確認(rèn)依據(jù)

ELISA血液檢測試劑的確認(rèn)方法和驗收標(biāo)準(zhǔn)，依據(jù)《中國輸血技術(shù)操作規(guī)程（血站部分）》《中國生物制品規(guī)程》、《ELISA試劑盒操作說明書》和《參考品使用說明書》。

3 制定試劑確認(rèn)計劃

按照本站確認(rèn)管理程序文件的要求，由質(zhì)量管理科制定確認(rèn)計劃，確認(rèn)計劃包括：確認(rèn)目的、確認(rèn)項目、確認(rèn)原因、確認(rèn)時間、確認(rèn)部門、確認(rèn)方法和確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)。質(zhì)量管理科將確認(rèn)計劃發(fā)至相關(guān)科室后，由相關(guān)科室組織參與確認(rèn)的人員，以便做好確認(rèn)前的準(zhǔn)備工作。

4 試劑確認(rèn)的內(nèi)容和步驟

ELISA試劑盒的確認(rèn)包括查驗、質(zhì)量抽檢和資質(zhì)驗證3部分內(nèi)容。原則上應(yīng)查驗合格、入待檢庫后，才進行質(zhì)量抽檢活動。ELISA試劑盒的確認(rèn)按到貨批次執(zhí)行，即不同時間進貨的同供方、同一批號的試劑每次均需要進行確認(rèn)。對于首次抽檢不合格的項目應(yīng)加倍抽樣進行復(fù)檢。

4.1 試劑查驗和入庫

試劑采購回血站后，由設(shè)備科首先對每批試劑進行初步查驗確認(rèn)。查驗的內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)首先確認(rèn)新到貨的試劑是經(jīng)過對試劑生產(chǎn)商的評估批準(zhǔn)采用的試劑；然后是檢查試劑包裝：必須按照規(guī)定貼有批批檢防偽標(biāo)簽、有使用說明書，在包裝上注明有效期、品名、規(guī)格、批準(zhǔn)文號、生產(chǎn)日期、產(chǎn)品批號、儲存溫度，并附有質(zhì)量合格的標(biāo)志，如供方資質(zhì)（供方已向本站提供了有效的企業(yè)法人營業(yè)執(zhí)照副本、藥品注冊證書、藥品生產(chǎn)或經(jīng)營許可證、進口藥品注冊證等證件復(fù)印件）、中標(biāo)情況（供方已通過了本站的物料供方評審，并列入了“合格供方清單”）、試劑資質(zhì)（有說明書和批批檢報告）、規(guī)格型號（與訂購規(guī)格相符）、采購數(shù)量（與訂購數(shù)量相符）、采購價格（不高于政府集中采購招標(biāo)時中標(biāo)價格）、試劑盒外觀（外觀完整，無破損，無變形，無滲漏，無污染，每盒都貼有中國藥品與生物制品檢定所的激光防偽標(biāo)簽）、有效期限（可使用3個月以上）、包裝情況（有專用箱進行外包裝，并有封口膠封箱）、運輸條件（運輸過程符合試劑盒保存要求）。查驗合格后將試劑放入標(biāo)識“待檢”區(qū)域內(nèi)，并在庫存卡詳細(xì)記錄實際進貨日期、數(shù)量、批號、有效期及現(xiàn)有庫存量并簽字。試劑進貨確認(rèn)完畢，庫存管理員填寫“試劑送檢單”，連同“物料查驗入庫單”和隨機抽取的試劑盒樣品及相關(guān)資料（試劑的批批檢證書和關(guān)鍵原輔材料的出廠檢定合格證書）一起遞交試劑確認(rèn)部門（由質(zhì)量管理科負(fù)責(zé)）。

4.2 試劑質(zhì)量抽檢

質(zhì)量管理科委托檢驗科協(xié)助試劑質(zhì)量確認(rèn)檢測，并對檢測過程進行現(xiàn)場監(jiān)控。試劑確認(rèn)時，應(yīng)包括試劑盒陰性和陽性對照品，弱陽性室內(nèi)質(zhì)控品，任意挑選的常規(guī)檢驗標(biāo)本。應(yīng)在與常規(guī)檢驗相同的環(huán)境和儀器狀態(tài)下，按照試劑盒說明書進行操作。判斷標(biāo)準(zhǔn)包括試劑的陰性和陽性對照品必須符合試劑盒要求；低值質(zhì)控品（濃度以該試劑盒臨界值（cut off值）的2～3倍為宜）必須達到cut off值，并與試劑批批檢報告數(shù)據(jù)進行比較，及與以往實驗室檢測質(zhì)控數(shù)據(jù)進行回顧性比較，差異在規(guī)定范圍內(nèi)；常規(guī)標(biāo)本試驗結(jié)果未出現(xiàn)本底異常。HBsAg檢測試劑盒國家規(guī)定最低檢出限為0.5ng/ml，因此需用該濃度質(zhì)控品進行試劑確認(rèn)[9]。具體方法如下：

①試劑組份外觀檢查：于光線明亮處以肉眼進行檢查，外包裝嚴(yán)密、無漏氣；酶標(biāo)板潔凈無異物、無缺損；液體組份無沉淀或絮狀物；凍干組份呈白色或棕色疏松體。②試劑盒對照品檢測：按照試劑使用說明書要求檢測試劑盒內(nèi)的陽性對照品、陰性對照品，依據(jù)試劑盒要求進行檢測結(jié)果判定，試劑盒的陽性對照品、陰性對照品的檢測結(jié)果符合試劑說明書規(guī)定的要求。③陽性符合率檢測：測定已知陽性標(biāo)本8份，每份1孔，陽性符合率應(yīng)為8/8。④陰性符合率檢測：測定已知陰性標(biāo)本16份，每份1孔，，陰性符合率應(yīng)大于14/16，且無花板現(xiàn)象。⑤批內(nèi)重復(fù)性檢測：對同一弱陽性質(zhì)控血清檢測16孔，計算S/CO值的平均值內(nèi)x`、及標(biāo)準(zhǔn)差S，變異系數(shù)（CV=S/X×100%）值應(yīng)小于15%。⑥敏感度檢測：最低程度應(yīng)能檢出血站所選擇的衛(wèi)生部臨檢中心提供的臨界質(zhì)控血清，酶免試劑盒的OD/CO值≥1.0。

4.3 試劑資質(zhì)驗證

質(zhì)量管理科核對送檢的酶聯(lián)免疫試劑盒生產(chǎn)批號與《材料質(zhì)控單》、《中國食品藥品檢定研究院檢驗報告》或廠家檢驗報告是否一致；送檢產(chǎn)品是否在有效期內(nèi)，并進行資質(zhì)驗證。資質(zhì)驗證主要是進一步核查酶聯(lián)免疫試劑盒的生產(chǎn)廠家是否具有相應(yīng)的資質(zhì)，所具有的證件是否在有效期內(nèi)（進口試劑必須具有國務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門核發(fā)的《進口藥品注冊證》），并根據(jù)以上檢查結(jié)果填寫“檢驗質(zhì)量檢查報告”。

5 出據(jù)確認(rèn)報告

質(zhì)量確認(rèn)檢測完成后，質(zhì)量管理科收集、整理、分析和解析ELISA試劑盒的查驗結(jié)果和質(zhì)量抽檢結(jié)果，并與驗收標(biāo)準(zhǔn)進行比對分析，做出是否通過驗收的結(jié)論，編制“ELISA試劑盒確認(rèn)報告”，附相關(guān)記錄和說明書，報質(zhì)量主管審批。質(zhì)量主管或其受權(quán)人負(fù)責(zé)對確認(rèn)實施過程、確認(rèn)結(jié)果和結(jié)論進行全面審核，并做出確認(rèn)是否完畢、是否符合既定驗收標(biāo)準(zhǔn)、是否允許投入使用的決定。

6 試劑確認(rèn)后的處置

試劑確認(rèn)合格后，發(fā)出放行報告并在試劑盒上進行標(biāo)識，放置于標(biāo)識“合格區(qū)”位置，準(zhǔn)許領(lǐng)用。對于質(zhì)量抽檢不合格的試劑，在外包裝箱/盒上粘貼“不合格物料標(biāo)識，存放于“不合格區(qū)”，防止誤用。對于最終的確認(rèn)結(jié)論為不合格的試劑，質(zhì)量管理科須書面反饋給設(shè)備科，并報告質(zhì)量主管審批，由采購負(fù)責(zé)人與供應(yīng)商聯(lián)系進行退換處理。

7 結(jié) 語

試劑確認(rèn)的目的是對新的或者有變化的ELISA試劑的系統(tǒng)檢查與評價進行策劃和控制，保證其在正式使用前符合預(yù)期的使用要求。只有使用符合質(zhì)量要求的檢測試劑才能確保血液篩查試驗的精密度和準(zhǔn)確度，是確保血液質(zhì)量的有力保障。

[1]中華人民共和國.GB 18467-2001,獻血者健康檢查要求[S].2001.

[2]羅建勇.血站開展全面質(zhì)量管理的體會[J].中國輸血雜志,2006,6(19):509-510.

[3]國際標(biāo)準(zhǔn)化組織.ISO 9001:2000質(zhì)量管理體系要求[S].2000.

[4]國際標(biāo)準(zhǔn)化組織和國際電工委員會.ISO/IEC17025:2005檢測和校準(zhǔn)實驗室能力的通用要求[S].2005.

[5]徐志峰,李惠,王淑艷,等.ELISA檢測影響因素分析[J].中國誤診學(xué)雜志,2001,1(4):584-585.

[6]江偉梅,葛紅衛(wèi),郭永建.淺談采供血機構(gòu)實驗室檢驗試劑的管理[J].中國輸血雜志,2006,19(4):343-345.

[7]張文周.中華人民共和國藥品管理法實施條例[M].北京:人民出版社,2002.

[8]中華人民共和國衛(wèi)生部.血站實驗室質(zhì)量管理規(guī)范[S].2006.

[9]呂進明.淺談體外診斷試劑的管理[J].醫(yī)學(xué)動物防制,2004,20(6):338.