在線凝膠滲透色譜/氣相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蔬菜中49種農(nóng)藥殘留組分

蔣治國+王博超+殷雪琰+堵燕鈺+羅漪漣

摘 要：該文研究建立了蔬菜中49種農(nóng)藥的多殘留分析方法。前處理采用改進(jìn)的QuEChERS方法，樣品經(jīng)乙腈提取，氯化鈉和無水硫酸鎂鹽析后，經(jīng)N-丙基乙二胺（PSA）、C18填料和無水硫酸鎂混合型固相分散凈化，提取液過濾膜后，用在線GPC/GC-MS-MS在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）下進(jìn)行檢測(cè)和確證。結(jié)果表明：49種農(nóng)藥的殘留組分在50μg/kg的添加量下，用同種樣品基質(zhì)配制標(biāo)樣進(jìn)行定量的加標(biāo)回收率為66%～114%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.4%～16.8%；用相近樣品基質(zhì)配制標(biāo)樣進(jìn)行定量的加標(biāo)回收率，除甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化樂果和噠螨靈外，其余的均為60%～117%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.4%～12.7%。該方法具有樣品前處理簡單、分析時(shí)間短、凈化效果好等優(yōu)點(diǎn)，在大批量的蔬菜農(nóng)藥多殘留檢測(cè)領(lǐng)域有很好的應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞：在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；QuEChERS法；農(nóng)藥殘留；蔬菜

中圖分類號(hào) F767.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）22-129-06

蔬菜中農(nóng)藥殘留是農(nóng)藥使用后一段時(shí)期內(nèi)沒有被分解而殘留于蔬菜上的微量農(nóng)藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質(zhì)的總稱。各地在防治蔬菜病蟲害時(shí)，普通存在大量使用化學(xué)農(nóng)藥現(xiàn)象，長江流域城市一般每年每667m2使用農(nóng)藥2～3kg，多的達(dá)5kg以上[1]。農(nóng)藥的大量使用，使得蔬菜中農(nóng)藥殘留量超標(biāo)問題日益突出[2-3]。GC-MS雖然方法靈敏度和特異性較高，但由于難以完全闡明化合物的結(jié)構(gòu)裂解信息，定性準(zhǔn)確度方面尚有欠缺，容易產(chǎn)生假陽性結(jié)果[4]。凝膠滲透色譜凈化技術(shù)能有效地去除樣品基質(zhì)中的色素等干擾物質(zhì)，但常規(guī)的凝膠滲透色譜多采用離線方式，樣品處理時(shí)間長、溶劑消耗大、操作繁瑣[5]。本研究采用在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，結(jié)合大體積進(jìn)樣，針對(duì)3種蔬菜樣品，以改進(jìn)的QuEChERS方法為前處理手段，通過優(yōu)化色譜質(zhì)譜條件，建立了蔬菜中49種農(nóng)藥殘留的定性確證和定量測(cè)定方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（GPC/GC-MS-MS），配有程序升溫（PTV）進(jìn)樣口和電子轟擊離子（EI）源（日本島津公司）；T-25型高速組織勻漿機(jī)（德國IKA公司）；5804R型冷凍離心機(jī)（美國艾本德公司）；MS3型漩渦混合器（德國IKA公司），24位氮吹儀（美國Organomation公司）。

1.1.2 試劑 正己烷、丙酮、乙腈（色譜純，CNW公司）；PSA（粒徑范圍40～63μm，平均孔徑60?，CNW公司）；C18填料（美國安捷倫公司）；無水硫酸鎂、氯化鈉（AR，上海國藥集團(tuán)），500℃灼燒4h，置于干燥器中備用。實(shí)驗(yàn)用水為超純水（經(jīng)Milli-Q超純水器純化）。49種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品均購于農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所。標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：用丙酮配成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100mg/L），儲(chǔ)存于-20℃冰箱中備用，使用時(shí)再用丙酮逐級(jí)配制成1mg/L的混標(biāo)，然后根據(jù)檢測(cè)要求采用基質(zhì)本底液稀釋成相應(yīng)的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2 樣品前處理 將蔬菜樣品切碎，充分混勻后放入食品加工器粉碎成勻漿。稱取10g（精確至0.1g）樣品于50mL離心管中，加入乙腈10mL，高速勻漿5min，加入NaCl 1g、無水MgSO4 4g，劇烈振搖1min后以5 000r離心10min，取乙腈層1mL于2mL指形管中，加入無水MgSO4100mg、PSA和C18填料各40mg，漩渦混合0.5min后以5 000r離心3min，取上清液過0.22μm微孔濾膜，收集于1.5mL進(jìn)樣瓶中，供在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

1.3 色譜質(zhì)譜條件

1.3.1 GPC條件 CLNpak EV-200凝膠滲透色譜柱（2mm×150mm）；流動(dòng)相為環(huán)己烷-丙酮混合溶液（7∶3），流速0.1mL/min；進(jìn)樣量5μL。

1.3.2 色譜條件 色譜柱：惰性熔融石英毛細(xì)管柱（5m×0.53mm），DB-5MS預(yù)柱（5m×0.25mm×0.25μm），DB-5MS分析柱（25m×0.25mm×0.25μm）；載氣：氦氣（純度99.999%）；恒線速度模式，流速：1.0mL/min；柱溫箱升溫程序：初始溫度82℃保持5min，以8℃/min升溫到300℃，保持7.75min，分析時(shí)間約40min；PTV進(jìn)樣口升溫程序：初始溫度120℃保持5min，以100℃/min迅速升溫到250℃，保持33.7min。

1.3.3 質(zhì)譜條件 離子源溫度：230℃；傳輸線溫度300℃；電離模式：電子轟擊電離（EI）；轟擊能量：70eV；Q2碰撞氣：氬氣（純度≥99.999%）；溶劑延遲時(shí)間：9min；檢測(cè)器電壓：調(diào)諧電壓+0.6kv；數(shù)據(jù)采集模式：MRM。

2 結(jié)果與分析

2.1 凈化條件的確定 由于蔬菜中含有大量色素、水分和少量油脂，因此在樣品提取液的凈化過程中，選擇了C18、PSA和無水MgSO4作為凈化劑去除干擾。C18屬于反相吸附劑，可有效除去基質(zhì)中的脂肪和脂類等非極性有機(jī)物，PSA可除去少量色素，無水MgSO4可進(jìn)一步去除有機(jī)層中的水分。為提高測(cè)定的回收率水平，在確定凈化條件時(shí)，未選擇吸附能力較強(qiáng)的石墨化炭黑（GCB），而是通過充分利用在線GPC的優(yōu)點(diǎn)、提高進(jìn)樣口襯管維護(hù)頻率和增加色譜柱預(yù)柱的手段來滿足實(shí)際樣品分析的要求。

2.2 在線GPC的作用 在在線GPC中注入敵敵畏和氯氰菊酯的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用得到的標(biāo)準(zhǔn)溶液出峰時(shí)間進(jìn)行定位，使得目標(biāo)物在進(jìn)入色譜/質(zhì)譜分析前和分析后排出了大量的干擾物質(zhì)，使基質(zhì)干擾的問題得到解決，同時(shí)取代了經(jīng)典的GPC凈化方式，縮短了分析過程，從而實(shí)現(xiàn)了樣品從凈化到分析檢測(cè)的自動(dòng)化，提高了實(shí)驗(yàn)室的工作效率，大大幫助了前處理過程中凈化條件的確定，為盡量減少凈化劑的種類和數(shù)量，降低其吸附能力起到了關(guān)鍵作用。endprint

2.3 同種基質(zhì)標(biāo)分析下的回收率與精密度 在優(yōu)化條件下對(duì)49種農(nóng)藥殘留在芥藍(lán)、甘藍(lán)、西葫蘆3種蔬菜中進(jìn)行50μg/kg添加量的加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，每個(gè)加標(biāo)平行4次，采用同種樣品基質(zhì)配制標(biāo)樣進(jìn)行定量，回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差如表1所示。由此可見，用同種樣品基質(zhì)配制標(biāo)樣進(jìn)行定量的加標(biāo)回收率為66%～114%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.4%～16.8%。

2.4 相近基質(zhì)標(biāo)分析下的回收率與精密度 在優(yōu)化條件下對(duì)49種農(nóng)藥殘留在甘藍(lán)、西葫蘆2種蔬菜中進(jìn)行50μg/kg添加量的加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，每個(gè)加標(biāo)平行4次，采用相近樣品芥藍(lán)基質(zhì)配制標(biāo)樣進(jìn)行定量，回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差如表2所示。由此可見，用相近樣品基質(zhì)配制標(biāo)樣進(jìn)行定量的加標(biāo)回收率，除甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化樂果和噠螨靈外，其余的均為60%～117%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.4%～12.7%。

3 結(jié)論與討論

本文利用在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GPC/GC-MS-MS）進(jìn)行測(cè)定，采用改進(jìn)的QuEChERS方法對(duì)樣品進(jìn)行前處理，建立了蔬菜中49種農(nóng)藥殘留的測(cè)定方法。由于在實(shí)際監(jiān)測(cè)工作中，每次抽檢的蔬菜種類復(fù)雜多樣，且數(shù)量較多，采用同種樣品基質(zhì)配制標(biāo)樣定量較為困難，而采用相近樣品基質(zhì)配制標(biāo)樣定量，除少數(shù)幾種農(nóng)藥參數(shù)外，大部分農(nóng)藥的準(zhǔn)確性和精密度均能滿足大批量蔬菜中多農(nóng)殘快速分析的要求，而且在實(shí)踐中具有較強(qiáng)的可操作性。蔬菜的基質(zhì)類型越相近，得到結(jié)果的準(zhǔn)確度越高?；|(zhì)劃分的原則可以參照蔬菜類型，如：茄果類、葉菜類、十字花科類、瓜類等；另外，含糖量、含酸量以及強(qiáng)烈的特殊氣味也是需要考慮的因素，如：同為茄果類蔬菜的番茄和茄子，最好不要一起定量，蘿卜雖然也是十字花科類的蔬菜，但也最好不要同甘藍(lán)一起定量。

參考文獻(xiàn)

[1]閆實(shí)，張靜.氣質(zhì)聯(lián)用測(cè)定甘藍(lán)、韭菜中農(nóng)藥多殘留方法研究[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境與發(fā)展，2010（2）：77.

[2]劉衛(wèi)東，劉傳娟，劉鳳枝，等.農(nóng)業(yè)環(huán)境污染突發(fā)事件調(diào)查評(píng)估的研究[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境與發(fā)展，2008（1）：28-31.

[3]張麗萍，張妙仙.環(huán)境災(zāi)害學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，2008.

[4]賈瑋，黃峻榕，凌云，等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定茶葉中290種農(nóng)藥殘留組分[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2013（1）：10.

[5]張帆，付善良，施雅梅，等.在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定水果中11種苯氧羧酸類農(nóng)藥[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2013（1）：80.

（責(zé)編：張宏民）endprint

2.3 同種基質(zhì)標(biāo)分析下的回收率與精密度 在優(yōu)化條件下對(duì)49種農(nóng)藥殘留在芥藍(lán)、甘藍(lán)、西葫蘆3種蔬菜中進(jìn)行50μg/kg添加量的加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，每個(gè)加標(biāo)平行4次，采用同種樣品基質(zhì)配制標(biāo)樣進(jìn)行定量，回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差如表1所示。由此可見，用同種樣品基質(zhì)配制標(biāo)樣進(jìn)行定量的加標(biāo)回收率為66%～114%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.4%～16.8%。

2.4 相近基質(zhì)標(biāo)分析下的回收率與精密度 在優(yōu)化條件下對(duì)49種農(nóng)藥殘留在甘藍(lán)、西葫蘆2種蔬菜中進(jìn)行50μg/kg添加量的加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，每個(gè)加標(biāo)平行4次，采用相近樣品芥藍(lán)基質(zhì)配制標(biāo)樣進(jìn)行定量，回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差如表2所示。由此可見，用相近樣品基質(zhì)配制標(biāo)樣進(jìn)行定量的加標(biāo)回收率，除甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化樂果和噠螨靈外，其余的均為60%～117%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.4%～12.7%。

3 結(jié)論與討論

本文利用在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GPC/GC-MS-MS）進(jìn)行測(cè)定，采用改進(jìn)的QuEChERS方法對(duì)樣品進(jìn)行前處理，建立了蔬菜中49種農(nóng)藥殘留的測(cè)定方法。由于在實(shí)際監(jiān)測(cè)工作中，每次抽檢的蔬菜種類復(fù)雜多樣，且數(shù)量較多，采用同種樣品基質(zhì)配制標(biāo)樣定量較為困難，而采用相近樣品基質(zhì)配制標(biāo)樣定量，除少數(shù)幾種農(nóng)藥參數(shù)外，大部分農(nóng)藥的準(zhǔn)確性和精密度均能滿足大批量蔬菜中多農(nóng)殘快速分析的要求，而且在實(shí)踐中具有較強(qiáng)的可操作性。蔬菜的基質(zhì)類型越相近，得到結(jié)果的準(zhǔn)確度越高。基質(zhì)劃分的原則可以參照蔬菜類型，如：茄果類、葉菜類、十字花科類、瓜類等；另外，含糖量、含酸量以及強(qiáng)烈的特殊氣味也是需要考慮的因素，如：同為茄果類蔬菜的番茄和茄子，最好不要一起定量，蘿卜雖然也是十字花科類的蔬菜，但也最好不要同甘藍(lán)一起定量。

參考文獻(xiàn)

[1]閆實(shí)，張靜.氣質(zhì)聯(lián)用測(cè)定甘藍(lán)、韭菜中農(nóng)藥多殘留方法研究[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境與發(fā)展，2010（2）：77.

[2]劉衛(wèi)東，劉傳娟，劉鳳枝，等.農(nóng)業(yè)環(huán)境污染突發(fā)事件調(diào)查評(píng)估的研究[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境與發(fā)展，2008（1）：28-31.

[3]張麗萍，張妙仙.環(huán)境災(zāi)害學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，2008.

[4]賈瑋，黃峻榕，凌云，等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定茶葉中290種農(nóng)藥殘留組分[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2013（1）：10.

[5]張帆，付善良，施雅梅，等.在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定水果中11種苯氧羧酸類農(nóng)藥[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2013（1）：80.

（責(zé)編：張宏民）endprint

2.3 同種基質(zhì)標(biāo)分析下的回收率與精密度 在優(yōu)化條件下對(duì)49種農(nóng)藥殘留在芥藍(lán)、甘藍(lán)、西葫蘆3種蔬菜中進(jìn)行50μg/kg添加量的加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，每個(gè)加標(biāo)平行4次，采用同種樣品基質(zhì)配制標(biāo)樣進(jìn)行定量，回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差如表1所示。由此可見，用同種樣品基質(zhì)配制標(biāo)樣進(jìn)行定量的加標(biāo)回收率為66%～114%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.4%～16.8%。

2.4 相近基質(zhì)標(biāo)分析下的回收率與精密度 在優(yōu)化條件下對(duì)49種農(nóng)藥殘留在甘藍(lán)、西葫蘆2種蔬菜中進(jìn)行50μg/kg添加量的加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，每個(gè)加標(biāo)平行4次，采用相近樣品芥藍(lán)基質(zhì)配制標(biāo)樣進(jìn)行定量，回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差如表2所示。由此可見，用相近樣品基質(zhì)配制標(biāo)樣進(jìn)行定量的加標(biāo)回收率，除甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化樂果和噠螨靈外，其余的均為60%～117%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.4%～12.7%。

3 結(jié)論與討論

本文利用在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GPC/GC-MS-MS）進(jìn)行測(cè)定，采用改進(jìn)的QuEChERS方法對(duì)樣品進(jìn)行前處理，建立了蔬菜中49種農(nóng)藥殘留的測(cè)定方法。由于在實(shí)際監(jiān)測(cè)工作中，每次抽檢的蔬菜種類復(fù)雜多樣，且數(shù)量較多，采用同種樣品基質(zhì)配制標(biāo)樣定量較為困難，而采用相近樣品基質(zhì)配制標(biāo)樣定量，除少數(shù)幾種農(nóng)藥參數(shù)外，大部分農(nóng)藥的準(zhǔn)確性和精密度均能滿足大批量蔬菜中多農(nóng)殘快速分析的要求，而且在實(shí)踐中具有較強(qiáng)的可操作性。蔬菜的基質(zhì)類型越相近，得到結(jié)果的準(zhǔn)確度越高?；|(zhì)劃分的原則可以參照蔬菜類型，如：茄果類、葉菜類、十字花科類、瓜類等；另外，含糖量、含酸量以及強(qiáng)烈的特殊氣味也是需要考慮的因素，如：同為茄果類蔬菜的番茄和茄子，最好不要一起定量，蘿卜雖然也是十字花科類的蔬菜，但也最好不要同甘藍(lán)一起定量。

參考文獻(xiàn)

[1]閆實(shí)，張靜.氣質(zhì)聯(lián)用測(cè)定甘藍(lán)、韭菜中農(nóng)藥多殘留方法研究[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境與發(fā)展，2010（2）：77.

[2]劉衛(wèi)東，劉傳娟，劉鳳枝，等.農(nóng)業(yè)環(huán)境污染突發(fā)事件調(diào)查評(píng)估的研究[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境與發(fā)展，2008（1）：28-31.

[3]張麗萍，張妙仙.環(huán)境災(zāi)害學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，2008.

[4]賈瑋，黃峻榕，凌云，等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定茶葉中290種農(nóng)藥殘留組分[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2013（1）：10.

[5]張帆，付善良，施雅梅，等.在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定水果中11種苯氧羧酸類農(nóng)藥[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2013（1）：80.

（責(zé)編：張宏民）endprint