黃芩苷對人肝癌細(xì)胞增殖抑制及放療增敏作用

鄒航

（廣西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 廣西南寧 530021）

黃芩苷對人肝癌細(xì)胞增殖抑制及放療增敏作用

鄒航

（廣西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 廣西南寧 530021）

目的：探討黃芩苷對人肝癌細(xì)胞HepG2增殖抑制及放療增敏作用。方法：以人肝癌細(xì)胞株HepG2為研究對象，用CCK-8法和流式細(xì)胞儀檢測黃芩苷對肝癌細(xì)胞增殖的影響和肝癌細(xì)胞放射敏感性的改變。結(jié)果：CCK-8法檢測黃芩苷對HepG2的生長有顯著抑制作用且具有劑量依賴性，與陰性對照組對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P＜0. 05） 。黃芩苷能使處于G0/G1、G2/M期的細(xì)胞減少，S期細(xì)胞增加。同時，黃芩苷對HepG2放療具有增敏作用。結(jié)論：黃芩苷可抑制人肝癌細(xì)胞增殖，可能與影響細(xì)胞周期有關(guān)；黃芩苷能增強(qiáng)肝癌細(xì)胞放射敏感性。

黃芩苷 肝癌 細(xì)胞增殖 放療增敏

肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，預(yù)后差、病死率高，尋求可靠的綜合治療方案成為治療肝癌的必經(jīng)之路。黃芩苷是從黃芩中分離出來的黃酮類化合物，具有多種藥理作用［1］。近年來發(fā)現(xiàn)黃芩苷具有抗脂質(zhì)氧化，降低血脂、血壓和抗腫瘤作用［2］。放療是輔助治療肝癌的有效手段之一，而如何更進(jìn)一步增加放療的效果，探索肝癌放療的增敏劑無疑是個新途徑。本研究旨在探討黃芩苷聯(lián)合放療，對人肝癌細(xì)胞株HepG2增殖的抑制作用，以及黃芩苷對HepG2放療敏感性的影響，為提高肝癌的治療效果提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 主要材料及試劑

HepG2細(xì)胞購于中科院上海細(xì)胞所，DMEM培養(yǎng)基及胎牛血清購于Life公司。黃芩苷（Baicalin）購于上海純優(yōu)生物。CCK-8試劑盒購于博士德生物。細(xì)胞周期檢測試劑盒購于北京碧云天。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

人肝癌HepG2細(xì)胞培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中， 置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。細(xì)胞分組：①陰性對照組；②黃芩苷組：不同濃度黃芩苷處理的HepG2細(xì)胞（黃岑苷粉末用細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋成工作濃度：0.1、0.25、0.5 mg/ml）；③放療組；④黃芩苷與放療聯(lián)合治療組：加入0.5 mg/ml黃芩苷培養(yǎng)12h后進(jìn)行照射（X射線能量為6 MeV/u、靶皮距100 cm、劑量率2 Gy/min，細(xì)胞給予4Gy放療）。

1.2.2 流式細(xì)胞儀檢測腫瘤細(xì)胞周期分布

黃芩苷組細(xì)胞按0.1、0.25、0.5mg/ml黃芩苷處理后，于48h后分別進(jìn)行消化計(jì)數(shù)。各個不同濃度組及陰性細(xì)胞組分別收集1×106個細(xì)胞。冷PBS洗滌2次后，按照細(xì)胞周期試劑盒說明書分別加入周期檢測試劑，上流式細(xì)胞儀檢測，并對細(xì)胞周期進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

1.2.3 CCK-8法測定腫瘤細(xì)胞增殖抑制率

按上述細(xì)胞分組，每組設(shè)6個復(fù)孔，在96孔板中相同條件下培養(yǎng)48 h 后，吸去培養(yǎng)液，按CCK-8試劑盒說明書加入試劑，在酶標(biāo)儀上讀取450nm處吸光度值，并計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)：單獨(dú)黃芩苷處理后，較陰性對照組相比，處于G0/G1、G2/M期細(xì)胞減少，S期細(xì)胞顯著增加；單獨(dú)放療組G0/G1期細(xì)胞增加，S期細(xì)胞減少，G2/M期細(xì)胞變化較少；黃芩苷+放療聯(lián)合組較單獨(dú)放療組G0/G1、G2/M期細(xì)胞減少，S期細(xì)胞顯著增加。CCK-8結(jié)果顯示：隨藥物濃度增高，黃芩苷對HepG2細(xì)胞增殖的抑制率明顯增高，呈濃度依賴性；聯(lián)合組對HepG2細(xì)胞的抑制率較單獨(dú)放療組和黃芩苷組明顯增高，組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 黃芩苷及聯(lián)合放療對肝癌細(xì)胞增殖的影響

3 討論

放療是常用的肝癌治療手段， 但有效率并不高，主要原因是易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和并發(fā)癥。雖然提高放射劑量可提高局部控制率， 但增加了對周圍正常組織的損害。尋找有效的放療增敏方式進(jìn)行聯(lián)合治療是當(dāng)前腫瘤治療的新出路。黃芩苷是中藥黃芩中的主要活性成分。近年來，研究表明它對多種腫瘤具有抗瘤活性［3］［4］。本研究選用人肝癌細(xì)胞株HepG2為研究對象，探討了黃芩苷的抗腫瘤作用。結(jié)果表明，黃芩苷對HepG2細(xì)胞生長具有明顯抑制作用；聯(lián)合治療組抑制率均高于單獨(dú)使用黃芩苷組和單獨(dú)放療組，說明黃芩苷與放療聯(lián)合治療對肝癌細(xì)胞的抑制有協(xié)同作用，黃芩苷能增加肝癌細(xì)胞放射敏感性。細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)的結(jié)果提示，黃芩苷可使HepG2細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯于S期，使進(jìn)入G2 /M期的細(xì)胞比例降低，提示黃芩苷可能通過影響細(xì)胞周期進(jìn)程并抑制HepG2細(xì)胞增殖，具體機(jī)制有待進(jìn)一步探討。隨著對黃芩苷抗腫瘤作用機(jī)制的進(jìn)一步認(rèn)識， 黃芩苷有望成為具有較好療效且價格低廉的一種協(xié)同抗癌藥物，具有潛在的臨床應(yīng)用價值。

［1］黃志軍.黃芩苷藥理作用研究進(jìn)展.天津藥學(xué)，2012， （3） ：0061-64.

［2］蘭真，曾凡駿，曾里，等.生物類黃酮對心血管系統(tǒng)的調(diào)節(jié)及作用機(jī)理現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2005，32（6）：613.

［3］郭昱，姚樹坤.黃芩苷對人肝癌SMMC-7721細(xì)胞系生物學(xué)行為的影響.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2006，12（10）：732-735.

［4］湯立建，趙良才，李慶林，等.黃芩黃酮類成分抗腫瘤作用及機(jī)制研究進(jìn)展.中國中藥雜志，2007，32（1）：21-26.

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1674-2060（2016）02-0186-01